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| 1 | 进口锦鲤暴发病病原的nested-PCR鉴定显示文摘为了查明锦鲤暴发性疾病的病因 ,将患病锦鲤的脑、肝、脾和肾等组织悬液接种到CO、CK和EPC等鱼类细胞系中培养 ,均未发现细胞病变 ;从病灶中取样进行病原菌的分离和培养 ,证明锦鲤有副溶血弧菌和嗜水气单胞菌的感染。制备锦鲤疱疹病毒 (KHV)的 2对引物KHV9/ 5F和KHV9/ 5R ,KHV1和KHV2 ,用嵌套式聚合酶链式反应 (nested -PCR)在脑和脾脏组织的抽提物中扩增出长度为 4 12bp的特异性的DNA片段。将该片段的nested -PCR扩增产物纯化后 ,克隆、测序。用NCBI -Blast软件将测序结果在Genebank中进行搜寻、比较 ,结果发现与注册号为AF4 1180 3的KHV基因序列的一部分片段有 99%的同源性。因此初步判断这次锦鲤暴发性疾病是由KHV引起的 。 | 刘荭 史秀杰 高隆英 江育林 | 2002 | 华中农业大学学报2002，21，5： | 58 |
| 2 | 鲤春病毒血症病毒(SVCV)的研究进展显示文摘鲤春病毒血症病毒(SVCV)是一种能够引起鲤科鱼类急性传染性病毒病-鲤春病毒血症(SVC)的病原,一旦暴发会造成巨大的经济损失。该病主要在欧洲的鲤鱼养殖中广泛传播,主要症状为体内出血,腹膜炎及腹水。SVCV具有囊膜,暂时列为弹状病毒科水泡性病毒属。病毒基因组为线性单股不分段的负链RNA,长11 019个核苷酸,主要包含5个基因,分别编码核蛋白N、磷蛋白P、基质蛋白M、糖蛋白G和RNA聚合酶L。目前,中国出入境检验检疫检测SVCV的行业标准是逆转录PCR法。本研究从病毒的生物学特征,感染的临床症状及流行特点,病毒基因组及其多肽特征,病毒的分类地位以及检测技术等方面对国内外研究的现状作一综述。 | 付峰 刘荭 黄倢 蔡生力 | 2006 | 中国水产科学2006，13，2： | 32 |
| 3 | 用RT-PCR法快速检测鲤春病毒血症病毒基因显示文摘用逆转录多聚酶链式反应 (RT PCR)方法快速、灵敏、特异地检测鲤春病毒血症病毒(SVCV) ,根据SVC病毒糖蛋白基因序列设计的引物经过RT PCR和半嵌套PCR(semi nested PCR)可扩增出SVC病毒核酸中的 71 4bp和 60 6bp片段。与其他弹状病毒IHNV、VHSV、PFRV没有交叉 ,具有特异性。灵敏度检测 ,表明不小于 1 0 0 0个病毒就可检测出阳性结果。本文还对复性温度 ,引物 ,Mg2 +,Tag酶以及反转录酶的浓度对检测结果的影响进行了探讨。 | 高隆英 史秀杰 刘荭 江育林 | 2002 | 水生生物学报2002，26，5： | 29 |
| 4 | 非离子态氨及亚硝酸盐对鳜鱼苗的急性毒性试验显示文摘通过毒性试验得出:24小时、48小时、96小时非离子态氨对鳜鱼苗(9-12mm)的半致死浓度和安全浓度分别为0.92mg/l、0.49mg/l、0.32mg/l、0.032mg/l;亚硝酸盐对鳜鱼苗(12-19mm)的半致死浓度及安全浓度分别为724.44mg/l、190.55mg/l、71.61mg/l、7.16mg/l。结果表明,水体中非离子态氨对鳜鱼苗的毒性作用较明显,而鳜鱼苗对亚硝酸盐有较强的耐受力。 | 王侃 刘荭 | 1996 | 淡水渔业1996，26，3： | 27 |
| 5 | DNA条形码技术在深圳鱼肉制品鉴定中的应用显示文摘以线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因为目标基因,应用DNA条形码技术鉴别深圳批发市场和超市零售鱼肉制品的种类来源,判别其产品标签是否正确。本研究调查的77份鱼肉制品均能扩增出特异性条带,28份样品与产品标签标示不符,'错贴'率高达36.36%,其中所有标示'龙俐鱼'的商品都是低价的'巴丁鱼'(Pangasianodon hypophthalmus)。DNA条形码技术可用于鱼肉制品的来源物种鉴定。 | 王敏 刘荭 黄海 赵晓萌 石琼 何舜平 孙颖 | 2015 | 食品科学2015，36，20： | 27 |
| 6 | 实时定量RT-PCR检测鱼类传染性造血器官坏死病毒方法的建立与应用显示文摘建立了Taqman实时定量RT-PCR方法检测传染性造血器官坏死病毒(IHNV)。选取IHNV病毒的N蛋白基因保守序列,利用PrimerExpress2.0软件设计引物和探针。以梯度稀释的含有IHNV目的扩增片段的质粒作为标准品,进行定量RT-PCR反应以确定检测灵敏度。病毒浓度在5×106—5个拷贝,共7个数量级的范围内,定量RT-PCR反应有'S'型扩增曲线,检测灵敏度为5个拷贝。根据病毒拷贝数与定量反应Ct值的关系,绘制了标准曲线。该方法具有特异性,对鲤春血症病毒(SVCV)、病毒性出血性败血症(VHSV)、传染性胰脏坏死病毒(IPNV)、草鱼呼肠孤病毒(GCRV)、流行性造血器官坏死病毒(EHNV)、EPC细胞系、牙鲆的核酸都没有扩增反应。在50批待检样品中,有3批鱼类感染IHNV,利用标准曲线进行了定量分析。实时定量RT-PCR检测IHNV方法,灵敏度高,特异性好,可以进行定量分析,在鱼病的快速检测上具有重要意义。 | 岳志芹 刘荭 梁成珠 高宏伟 徐彪 邓明俊 江育林 | 2008 | 水生生物学报2008，32，1： | 25 |
| 7 | 国内养殖鱼类和进境鱼卵中传染性造血器官坏死病毒(IHNV)的检测及基因分析显示文摘用传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)的反转录聚合酶链及该方法在来自国内养殖场的患病牙鲆和虹鳟及进口的匙吻鲟鱼卵中检测出IHNV,同时对扩增出的IHNV的DNA片段进行了序列分析。结果表明,从国内养殖的牙鲆和虹鳟中分离出的IHNV与IHNV的标准株RB-1株在序列上都具有98.1%的同源性,推导出在氨基酸序列上分别具有97%和99%的同源性。从进口匙吻鲟鱼卵中分离的IHNV与RB-1株在序列上都具有92.5%的同源性,推导出氨基酸序列有93%的同源性。系统发育树分析结果表明,从国内发病的养殖虹鳟中分离出的IHNV与进口匙吻鲟鱼卵中检测到的IHNV在进化上关系较为密切。 | 刘荭 范万红 史秀杰 陈超 吕建强 何俊强 高隆英 江育林 | 2006 | 华中农业大学学报2006，25，5： | 20 |
| 8 | 鱼病毒性神经坏死病病毒(VNNV)不同基因型鉴别方法的建立及在VNN检疫和监测中的应用显示文摘从GenBank中查找出乙型野田村病毒组中海水鱼类各病毒的序列,并用Sequencher多重序列比较软件将其分到条纹神经坏死病毒(stripedjacknervousnecrosisvirus,SJNNV)组、条纹星鲽神经坏死病毒(barfinfloundernervousnecrosisvirus,BFNNV)组、红点石斑鱼神经坏死病毒(redspottedgroupernervousnecrosisvirus,RGNNV)组和虎斑东方神经坏死病毒(tigerpuffernervousnecrosisvirus,TPNNV)组4个基因型的组别中。用DNAsis序列比较软件比较同一基因型各基因序列之间的同源性,均在85%以上;不同基因型之间序列的同源性,均在66%以下。结合Premier引物设计软件和Sequencher序列多重比较软件,设计了4对引物,采用逆转录聚合酶链式反应(RT PCR)来鉴别这4个不同的基因型。对从深圳口岸进境的产地为台湾的海水鱼苗和广东、福建两省养殖的主要海水鱼类进行检疫和监测,结果在进境的海水鱼苗中检出有RGNNV基因型的VNNV,在福建和广东省养殖的石斑鱼成鱼和鱼苗的病鱼体内均检测到RGNNV基因型的VNNV,对上述扩增产物基因序列进行比较,相似性均在96.5%以上,推导出的氨基酸序列与玛拉巴石斑鱼神经坏死病毒(MNNV)序列相似性均为100%。 | 刘荭 史秀杰 高隆英 何俊强 江育林 陈焕春 | 2004 | 水产学报2004，28，6： | 17 |
| 9 | 患病北极红点鲑的病原分离与鉴定显示文摘对2004年5月四川省某养殖基地养殖的北极红点鲑患病鲑进行了病理学检查和病原分离,从病灶处分离到细菌和真菌。分离到的细菌经API生化鉴定为杀鲑气单胞菌杀鲑亚种(Aeromonas salmonicidasubsp.salmonicida)。用引物AP1和AP2对纯化后的细菌进行PCR扩增,结果扩增出长度为421 bp的DNA片段,对扩增片段进行克隆、测序,用NCBI-BLASTn在GenBank中搜寻相似序列,结果与杀鲑气单胞菌各株A层蛋白部分编码基因有99%以上的序列同源性。用引物EUS-F和EUS-R对分离到的真菌进行PCR扩增,结果扩增出长度为755 bp的DNA片段,对扩增片段进行克隆、测序,用NCBI-BLASTn在GenBank中搜寻相似序列,结果与水霉属各株的DNA片段(包括18S核糖体RNA基因部分序列、内转录间隔区1全序列、5.8S核糖体RNA基因全序列、内转录间隔区2全序列和28S核糖体RNA部分序列)有93%-100%的同源性;而与属于丝囊霉菌属的EUS各株相对应的DNA片段仅有60%的序列同源性。因此判定所分离的真菌为水霉。杀鲑气单胞菌是引起疖疮病和溃疡病等病的病原菌,而水霉广泛存在于水中,当鱼受伤后,水霉孢子容易从患病部位侵入鱼体,加重感染。因此判断该病主要是由杀鲑气单胞菌引起,而水霉则引起继发感染。 | 史秀杰 刘荭 高隆英 何俊强 江育林 | 2007 | 华中农业大学学报2007，26，2： | 16 |
| 10 | 金鱼疱疹病毒性造血器官坏死病研究进展显示文摘本文概述了金鱼疱疹病毒性造血器官坏死病的流行现状,临床症状和病理特征,阐述了该病病原为鲤科疱疹病毒-2(CyHV-2)的形态和基因特征以及在分离培养、流行病学和检测方法方面取得的进展,旨在为深入研究该病提供理论参考依据。 | 田飞焱 何俊强 王璐 刘荭 | 2012 | 中国动物检疫2012，29，4： | 16 |
| 11 | 牙鲆鱼淋巴囊肿病初报显示文摘牙鲆鱼(Paralichthysolivaceus)淋巴囊肿病(LymphocystisDisease简称LD)是由虹彩病毒科(Iridoviridae)淋巴囊肿病毒(LymphocystisVirus简称LCV)引起的一种鱼类传染病。该病毒易感鱼类广泛,对鱼类危害严重.本次发现该病在6个牙鲆鱼养殖场呈亚急性暴发。病鱼体表可见有明显的瘤样囊肿物,囊肿细胞大的达到500μm。牙鲆鱼淋巴囊肿病暴发在我国为首次,疫源为外来。已建议采取综合防治措施控制疫源,防止扩散,尽快扑灭此病。 | 曲径 江育林 沈海平 王浩 刘荭 连建华 潘雁甲 郑雪莲 | 1998 | 中国动物检疫1998，15，2： | 15 |
| 12 | 锦鲤疱疹病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用显示文摘研究建立并完善了Taqman实时荧光定量PCR检测锦鲤疱疹病毒(KHV)的方法。首先通过选取KHV病毒TK基因的保守序列(GenBank AB182940),利用PRIMER EXPRESS 2.0设计引物和探针。其中Taqman探针的5’端标记FAM,3’端标记TAMRA。然后利用梯度稀释的阳性样品克隆质粒进行定量PCR反应,制作标准曲线,得到病毒拷贝数与Ct值的关系为:Ct=-3.45 lgX+42.73(相关系数R2=0.989)。通过试验检测得到实时荧光定量PCR对KHV的灵敏度为32个病毒核酸拷贝数,同时,设计的引物和探针对于鱼类细胞系和其它鱼类病毒没有扩增反应,表现出较好的特异性。实验结果表明,实时荧光定量PCR检测KHV的方法,具有特异性好、灵敏度高的特点,可以缩短检测时间,提高检测速度,非常适合口岸进出口检验检疫的要求。 | 范万红 刘荭 岳志芹 吕建强 何俊强 江育林 | 2007 | 中国海洋大学学报(自然科学版)2007，37，5： | 14 |
| 13 | 锦鲤疱疹病毒的检测与人工感染试验显示文摘基于在美国和以色列普通鲤鱼和锦鲤中分离了一种新的疱疹病毒,命名为锦鲤疱疹病毒(KHV)或鲤鱼肾炎鳃坏死病毒(CNGV).本文根据GenBank登记的KHV序列设计了两对特异性引物,在我国患病的锦鲤样品中检测到该类病毒DNA.经对PCR产物进行克隆测序,结果表明与GenBank登记序列完全一致.用组织匀浆上清人工感染健康锦鲤,并从试验感染鱼组织中检测到KHV病毒DNA.该结果表明KHV或CNGV已经传播到我国,应引起重视. | 周永灿 袁军法 任武泽 刘荭 江育林 石正丽 | 2005 | 武汉大学学报(理学版)2005，51，S2： | 14 |
| 14 | 鲤春血症病毒中国分离株糖蛋白基因和氨基酸序列的初步解析显示文摘2002~2004年间从国内养殖鲤科鱼类和观赏鱼类中分离出8株鲤春血症病毒(SVCV)。根据SVCV参考株 全序列,设计引物,用逆转录聚合酶链式反应扩增出8株SVCV糖蛋白编码基因片段,并对扩增产物进行了克隆和 序列测定。用生物信息学方法对测得的序列进行分析,结果8个国内分离株的糖蛋白基因序列与参考株的基因序 列相似性均在92%以上,8个国内分离株之间基因序列相似性均在97.7%以上;8个国内分离株之间糖蛋白推导 出的氨基酸序列相似性均在94.5%以上,与参考株氨基酸序列相似性在92.9%-94.9%之间。系统发育树分析结 果表明,SVCV国内分离株与USA株、980451株、980528株和970469株的进化方向一致,与其它SVCV毒株在进 化方向上不同。8个毒株有19个共同的酶切位点,推导出的氨基酸序列中有10个亲水区、10个可能的抗原位点 和10个跨膜蛋白区域,其峰值基本一致。对SVCV国内分离株的糖蛋白6个功能位点(天冬酰胺糖基化位点、精 氨酸-甘氨酸-天冬氨酸序列、酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、蛋白激酶C磷酸化位点、酪氨酸磷酸化位点和肉豆蔻酰 基化位点)进行了初步分析。 | 刘荭 付峰 黄倢 何俊强 史秀杰 高隆英 杨锦舜 江育林 | 2005 | 中国病毒学2005，20，6： | 14 |
| 15 | 虹彩病毒蛙病毒属病毒实时荧光PCR检测方法的建立显示文摘在GenBank中搜寻虹彩病毒蛙病毒属主衣壳蛋白(MCP)基因序列并进行多重比较后,利用其中的保守序列,设计引物和Taqman探针,建立了虹彩病毒蛙病毒属实时荧光PCR检测方法。对荧光PCR反应条件进行优化,评估该检测方法的特异性、稳定性和重复性,利用10倍系列稀释法检验其灵敏度并与常规PCR做了比较。结果显示,该方法对虹彩病毒蛙病毒属成员(新加坡石斑鱼虹彩病毒除外)的检测有高度的特异性,与淋巴囊肿病毒、鳜鱼传染性脾肾坏死病毒、真鲷虹彩病毒、锦鲤疱疹病毒等其他水生动物病毒之间均无交叉反应,有良好的特异性,检测总DNA灵敏度为4.5×10-3pg/μL,比传统PCR的敏感度高出100倍,可对低病毒含量的样品进行准确检测。制作的标准曲线有极好的线性关系,且线性范围宽,相关系数为0.9984。组内和组间重复试验的Ct值标准偏差分别为1.2%和1.6%,有良好的重复性。与常规的PCR相比较,该方法具有快速、特异、敏感、可定量、可同时检测大量样品等优点,可用于出入境检疫和动物防疫监督部门对虹彩病毒蛙病毒属的疫情监测。 | 李惠芳 吕建强 岳志芹 刘荭 田飞焱 何俊强 蔡依娜 陈昌福 | 2008 | 华中农业大学学报2008，27，2： | 14 |
| 16 | 云南锦鲤养殖场鲤浮肿病毒的鉴定及基因型分析显示文摘锦鲤睡眠病(Koi sleepy disease,KSD)是一种由鲤浮肿病毒(Carp edema virus,CEV)引起鲤科鱼类死亡的病毒性传染病,已经对世界鲤科鱼类养殖业造成危害。2016年,中国云南某锦鲤养殖场养殖的锦鲤出现以体表出血、眼睛凹陷、沉于池底昏睡为主要临床症状的疾病,发病水温为11℃~20℃,累计死亡率30%~50%。从该养殖场不同池塘采集两个样品,使用nested PCR和real-time PCR方法进行实验室诊断。结果表明,两个样品CEV检测结果均为阳性,发病锦鲤鳃和肾脏CEV病毒载量为250.02~1 332.94拷贝/250ng,鳃中CEV病毒载量约为肾脏的6~7倍。在排除寄生虫、细菌、SVCV和KHV感染后,推测CEV可能是引起此次云南锦鲤场发生疫情的病原,但还需回归感染实验做进一步验证。基于CEV P4a基因的遗传进化分析结果表明,此次从云南发病锦鲤检出的两个CEV毒株均属于IIa基因型,且与英国(R083株)和日本CEV毒株(CyPP-3)的遗传进化关系最近。 | 温智清 刘莹 唐绍林 王飞 王津津 史秀杰 于力 郑晓聪 何俊强 兰文升 贾鹏 刘荭 | 2017 | 病毒学报2017，33，6： | 14 |
| 17 | 用逆转录多聚酶链式反应从凡纳对虾中检出传染性皮下组织和造血器官坏死病毒显示文摘A reverse transcription polymerase chain reaction (RT PCR) was used for detection of infectious hypodermal and haematopoietic necrosis virus (IHHNV) from the gills and subcutaneous tissue of Penaeus vannamei (10-15cm in body size) without clinical signs. With primers 77012R and 77353F, a fragment of 356bp of IHHNV was amplified in RT PCR. The amplified product was sequenced and showed more than 98% homologue with the sequences of other IHHNV strains in Gene Bank. | 刘荭 高隆英 史秀杰 江育林 | 2002 | 水产学报2002，26，2： | 13 |
| 18 | 锦鲤疱疹病毒病的研究进展显示文摘 | 刘宗晓 刘荭 江育林 | 2006 | 检验检疫科学2006，16，4： | 12 |
| 19 | 鲤春病毒血症病毒糖蛋白基因的克隆及其在毕赤酵母中的初步表达显示文摘根据SVCV糖蛋白基因序列设计引物,在5’引物和3’引物中分别引入酶切位点。以病毒核酸为模板用RT-PCR方法扩增该段糖蛋白基因,将所得的基因片段(517和521)克隆至穿梭载体pGAPZαA/B之GAP启动子下游位点,构建含α信号肽的重组表达载体。获得的重组质粒pGAPZαA-517和pGAPZαB-521经线性化后,电击法转化毕赤酵母SMD1168菌株,构建分泌型表达SVCV糖蛋白的重组酵母菌株。酵母菌落PCR法检测表明,已成功构建分泌表达SVCV糖蛋白的酵母基因工程菌株,斑点印迹法进一步分析表明有目的蛋白的成功表达。 | 付峰 刘荭 范万红 江育林 黄倢 | 2007 | 海洋水产研究2007，28，4： | 12 |
| 20 | TaqMan实时荧光PCR快速检测斑点叉尾鮰病毒显示文摘根据GenBank登录的斑点叉尾鮰病毒株ORF8基因序列,设计引物和Taqman荧光探针,建立了用于检测斑点叉尾鮰(Ictalurus Punctatus)病毒的实时荧光定量PCR方法;对实时荧光定量PCR反应条件进行了优化,评估了该方法的特异性、灵敏度和重复性,并建立了绝对定量方法。特异性试验证实,该方法只能检测到斑点叉尾鮰病毒,与真鲷虹彩病毒、蛙虹彩病毒、锦鲤疱疹病毒、鳜鱼传染性脾肾坏死病毒等多种常见的水生动物病毒没有交叉反应,具有高度的特异性。标准曲线表明,在3.3×10~3.3×107拷贝数之间有较好的线性关系(r=0.998 3),最少可检测到33个拷贝的阳性质粒,敏感度很高。同一样品于试验内及试验间的重复性试验发现,变异系数分别为0.7%和1.2%,重复性较好。该方法的检测时间从核酸抽提到出具结果仅需3h。试验结果表明,采用实时荧光PCR检测斑点叉尾鮰病毒方法具有特异性好、灵敏度高、检测耗时短的特点,并且能对病毒进行准确的定量分析,不仅适合口岸进出口检验检疫的需求,而且可以作为研究该病毒感染过程的有力工具。 | 李惠芳 刘荭 吕建强 蔡依娜 田飞焱 李香平 岳志芹 陈昌福 | 2008 | 长江大学学报(自科版)(中旬)2008，5，1： | 12 |
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