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| 1 | 绿色荧光蛋白显示文摘来源于水母Aequoreavictoria的绿色荧光蛋白 ( greenfluorescentprotein ,GFP)现已成为在生物化学和细胞生物学中研究和开发应用得最广泛的蛋白质之一 .其内源荧光基团在受到紫外光或蓝光激发时 (λmax=395nm ,小峰在 4 79nm )可高效发射清晰可见的绿光 .GFP的高分辨率晶体结构为了解和研究蛋白质结构和光谱学功能关系提供了一个极好的机会 .GFP已成为一个监测在完整细胞和组织内基因表达和蛋白质定位的理想标记 .通过突变和蛋白质工程构建的GFP嵌合蛋白在生理指示剂、生物传感器。 | 刘默芳 王恩多 | 2000 | 生物化学与生物物理进展2000，27，3： | 27 |
| 2 | MicroRNA作用机制研究的新进展显示文摘microRNA(miRNA)是一种非蛋白质的新型基因表达调控因子,对真核生物基因表达起非常重要的调控作用.关于miRNA的功能及作用机制方面的研究是当前生命科学研究的前沿热点,研究人员陆续提出了一些假说模型,诸如翻译起始抑制、翻译起始后抑制、mRNA降解、P小体(Processing Body),SG(Stress Granules)颗粒扣押靶mRNA等来阐述miRNA如何抑制其靶基因的表达.此外,最近还有文献报道了一些全新的miRNA作用方式,如去抑制和miRNA激活作用等.本文将简要介绍一些miRNA作用机制研究的新进展及相关作用模型. | 赵爽 刘默芳 | 2009 | 中国科学(C辑)2009，39，1： | 22 |
| 3 | piRNA和PIWI蛋白的功能机制研究进展显示文摘piRNA是2006年7月在动物生殖细胞中发现的一类新小分子非编码RNA。piRNA特异地与PIWI家族蛋白相互作用,因此,被命名为PIWI-interacting RNA,简称piRNA。这类长度在26~32核苷酸的小分子非编码RNA代表了一个生殖细胞转座子沉默的独特小RNA通路。它们可能通过与PIWI家族蛋白质相互作用,在表观遗传学水平和转录后水平沉默转座子等基因组自私性遗传元件,参与生殖干细胞自我维持和分化命运决定、减数分裂、精子形成等生殖相关事件。在piRNA发现后短短数年的时间,对其生物发生、功能及作用机制的研究都取得了诸多重大突破。该文就piRNA研究的最新研究进展作一简述。 | 赵爽 刘默芳 | 2010 | 生命科学2010，22，7： | 9 |
| 4 | Piwi/piRNA调控异常与男性不育症显示文摘男性不育是一个全球性的人口与健康问题,主要病因是少弱畸形精子症或不明原因。最近的生殖生物学和临床医学研究发现了一系列与男性不育相关的基因突变和调控通路,促进了对男性不育致病原因及机理的认识。piRNA(piwi-interacting RNA)是2006年发现的一类动物生殖细胞特异性小分子非编码RNA,通过与Piwi家族蛋白结合形成Piwi/piRNA复合物,在沉默转座子、维持生殖细胞基因组稳定性和完整性、调控生殖细胞发育分化和配子形成等过程中发挥不可或缺的重要生物学功能。近期的研究提示,Piwi/piRNA调控通路异常与男性不育相关。现简要总结和概述了近期关于Piwi/piRNA调控通路在精子发生和男性不育中的生物学功能和机制方面的研究进展。 | 王鑫 李智彤 刘默芳 | 2018 | 生命科学2018，30，2： | 6 |
| 5 | 人Piwi基因突变致男性不育的机制研究显示文摘大量遗传学研究表明,Piwi蛋白对于动物生殖系细胞发育具有至关重要的作用,Piwi基因敲除致动物不育。人Piwi(Hiwi)基因特异性地在雄性生殖细胞表达,但目前对其在人精子发生中的作用及其与男性不育的联系还知之甚少。该研究通过筛查临床男性不育样本发现,少弱精症患者Hiwi基因中存在拮抗泛素化修饰的D-box元件突变;通过构建基因敲入小鼠模型证实,该突变导致雄性不育。机制研究表明,小鼠Piwi(Miwi)D-box突变致MIWI蛋白异常稳定存在于后期精子细胞中,导致与其相互作用的组蛋白泛素连接酶RNF8(ring finger protein 8)被扣留于细胞质、不能入核催化组蛋白泛素化修饰,进而抑制组蛋白被鱼精蛋白替换,引发精子形成异常、雄性不育。该研究发现了男性不育的一类新型致病基因突变,并发现了Piwi蛋白具有调控组蛋白泛素化修饰的新功能,揭示了精子形成中调控组蛋白–鱼精蛋白转换的重要机制。 | 苟兰涛 康俊炎 刘默芳 | 2017 | 中国细胞生物学学报2017，39，9： | 5 |
| 6 | RNAi机器显示文摘小分子非编码RNA,以不同于蛋白质调控因子的全新方式,通过RNA干扰(RNAi),调控mRNA稳定性、蛋白质合成、染色质的组织和基因组的结构.由于可方便地施加和释放控制,RNAi已被广泛作为通过沉默作用研究基因功能的手段,并正在被应用于一些重大疾病的诊治.小分子RNA沉默作用的发挥依赖于一个由多种蛋白质因子组成的RNAi机器.在过去的几年中,对RNAi机器中重要蛋白质因子的结构功能,及它们在小向导RNA指导下沉默基因表达的分子机制等方面的研究都取得了诸多突破性的进展. | 刘默芳 蒋帅 王恩多 | 2007 | 生物化学与生物物理进展2007，34，10： | 4 |
| 7 | 小RNA与蛋白质的相互作用显示文摘小分子调控RNA,包括siRNA(small interfering RNA)、miRNA(microRNA)和piRNA(piwi interacting RNA)、hsRNA(heterochromatin associated small RNA)等,是当前生命科学研究的前沿热点。越来越多的证据表明,这些小分子R N A存在于几乎所有较高等的真核生物细胞中,对生物体具有非常重要的调控功能。它们通过各种序列特异性的RNA基因沉默作用,包括RNA干扰(RNAi)、翻译抑制、异染色质形成等,调控诸如生长发育、应激反应、沉默转座子等各种各样的细胞进程。随着对这些小分子调控RNA的发现,一些RNase III酶家族成员、Argonaute蛋白质家族成员及RNA结合蛋白质等先后被鉴定为小RNA的胞内蛋白质合作者,参与小RNA的加工成熟和在细胞内行使功能。本综述简介一些RNA沉默作用途径中重要组分的结构和功能的研究进展。 | 刘默芳 王恩多 | 2008 | 生命科学2008，20，2： | 4 |
| 8 | PIWI/piRNA“机器”与雄性生殖细胞发育显示文摘PIWI(P-element-induced wimpy testis)蛋白在动物生殖系细胞中特异性表达,为动物生殖细胞发育分化所必需。piRNA(PIWI-interacting RNAs)是最近在动物生殖系细胞中发现的一类非编码小分子RNA,这类小RNA特异性地与PIWI家族蛋白相互作用。PIWI/piRNA'机器'通过沉默转座元件和调控编码mRNA等方式在动物生殖细胞发育分化过程中发挥重要作用。本文围绕PIWI/piRNA'机器'的生物学功能及分子机制,对近期取得的相关研究进展进行了系统性总结。 | 戴鹏 苟兰涛 刘默芳 | 2014 | 生命的化学2014，34，4： | 4 |
| 9 | PIWI/piRNA调控基因表达研究的新进展显示文摘piRNA是2006年发现的一类在动物生殖系特异性表达的小分子非编码RNA。piRNA的生成和功能行使均依赖PIWI蛋白。之前的研究认为,PIWI/piRNA通过表观遗传水平和转录后水平沉默转座子等自私性遗传元件,维持生殖细胞基因组的稳定性和完整性。最近的研究发现,PIWI/piRNA还可以通过转录后水平调控蛋白质编码基因,参与胚胎发育、性别决定、配子发育等事件的调控。现简要介绍PIWI/piRNA调控基因表达研究的新进展。 | 赵爽 刘默芳 | 2015 | 生命科学2015，27，3： | 3 |
| 10 | miR-155和miR-21在乳腺癌组织中的表达显示文摘微小RNA(miRNA)是近年来发现的一类新型内源性小分子非编码RNA,参与调控许多细胞生理过程,它们的异常表达与癌症发生密切相关。本研究旨在探讨miRNA家族成员miR-155及miR-21在乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌临床病理学特征的关系。 | 傅少梅 张宏伟 刘默芳 蒋帅 陆明华 | 2011 | 中华实验外科杂志2011，28，8： | 2 |
| 11 | 精子形成中的表观遗传调控显示文摘精子形成是指单倍体球形精子细胞分化发育成为精子的过程。这一连续进程包含一系列复杂的生化事件和剧烈的形态变化,涉及顶体和尾部形成、组蛋白-鱼精蛋白转换、细胞核压缩和细胞质丢弃等。近期研究发现,表观遗传调控在精子形成过程中发挥重要作用,对确保精子细胞正常发育和精子生成至关重要。现总结近期的相关研究进展,从DNA甲基化和组蛋白修饰两个方面简介精子形成过程中的表观遗传调控功能和机制。 | 康俊炎 苟兰涛 刘默芳 | 2017 | 生命科学2017，29，10： | 2 |
| 12 | miR-143靶向抑制己糖激酶-2治疗乳腺癌的实验研究显示文摘目的在乳腺癌细胞MDA-MB-231中验证miR-143靶向抑制己糖激酶-2(HK2)改变其能量代谢达到治疗作用,并探讨18F-氟代脱氧葡萄糖(18F-FDG)和3'-脱氧-3'-18F-氟代胸苷(18F-FLT)在评估其疗效中的价值。方法实验分为三组,实验组转染miR-143模拟物(miR-143 mimic),阴性对照组转染无义序列小RNA,空白组不做任何处理。通过qRT-PCR和Western blot分别检测治疗前后HK2 mRNA和蛋白表达水平的改变,检测葡萄糖代谢和乳酸生成速率的变化,MTT法检测细胞增殖活性的变化,测定细胞对18F-FDG和18F-FLT摄取的动态变化,判断两种示踪剂在评估其疗效中的价值。结果实验组HK2 mRNA和蛋白的表达均降低;葡萄糖消耗和乳酸生成速率、细胞增殖活性较阴性对照组明显下降。18F-FDG与18F-FLT分别孵育细胞30、60、90和120 min后,摄取呈时间依赖性递增的趋势,并且各时间点的18F-FLT摄取率均低于18F-FDG。30 min时,实验组18F-FDG摄取率明显低于阴性对照组(21.81±2.75 vs.36.71±4.36),差异具有统计学意义(P<0.05),此时两组摄取18F-FLT无明显差异(12.03±1.53 vs.15.23±2.31,P>0.05)。60 min时,18F-FDG与18F-FLT在两组中的摄取率均出现统计学差异(P<0.05)。结论 miR-143能靶向抑制HK2改变其能量代谢达到治疗作用,18F-FDG在评估其疗效中具有更好的价值。 | 苗莹 张凌飞 梁胜 石朔 刘默芳 李彪 | 2014 | 上海交通大学学报(医学版)2014，34，8： | 1 |
| 13 | RNA的免疫共沉淀分离及检测显示文摘非编码RNA的发现使得RNA领域再次成为了生命科学研究关注的焦点。因为RNA是一种不稳定的生物大分子,绝大多数的RNA都需要与特定的RNA结合蛋白质结合形成RNA/蛋白复合物才能稳定存在于细胞中;不仅如此,RNA与RNA结合蛋白之间的动态关联贯穿和伴随了RNA的转录合成、加工和修饰、胞内运输和定位、功能发挥及降解的整个生命循环。鉴于此,利用RNA结合蛋白分离或发现鉴定功能性RNA分子是RNA研究领域中一个不可或缺的研究方法。简单地说,就是利用RNA结合蛋白的抗体免疫沉淀RNA/蛋白复合物,再从沉淀的RNA/蛋白复合物中分离得到特定RNA结合蛋白的RNA;分离得到的RNA可以通过末端标记和变性胶电泳对RNA分子的大小进行鉴定,也可以利用高通量RNA测序方法对RNA序列进行分析。 | 苟兰涛 赵爽 刘默芳 | 2010 | 中国细胞生物学学报2010，32，1： | 1 |
| 14 | 人Piwi基因泛素化修饰缺陷突变通过削弱精子形成过程中组蛋白-鱼精蛋白转换致男性不育显示文摘文章简介遗传学研究表明,Piwi蛋白对于动物生殖系细胞发育至关重要,Piwi基因敲除致动物不育。人Piwi(Hiwi)基因特异性地在雄性生殖细胞表达,但目前对其在人精子发生中的作用及其与男性不育的联系还知之甚少。 | Lan-Tao Gou Jun-Yan Kang Peng Dai Xin Wang Feng Li Shuang Zhao Man Zhang Min-Min Hua Yi Lu Yong Zhu Zheng Li Hong Chen Li-Gang Wu Dangsheng Li Xiang-Dong Fu Jinsong Li 施惠娟 刘默芳 | 2018 | 科学新闻2018，0，4： | 1 |
| 15 | MIWI/piRNA激活小鼠精子细胞mRNA翻译的新功能机制研究显示文摘哺乳动物减数分裂后期的精子发生(spermatogenesis),即精子形成(spermiogenesis),是一个剧烈的细胞形态变化过程。伴随精子细胞中细胞核压缩和染色质重构,基因转录活性将逐渐降低直至完全停止,那些为精子细胞后期阶段发育所需的基因都需要提前转录为信使核糖核酸(mRNA),然后以翻译抑制状态储存在精子细胞中,直到特定发育阶段再被激活翻译,以合成蛋白质发挥作用。这个现象被称为“转录–翻译解偶联”,是精子发生中基因表达调控的一个典型特征。然而,目前对于精子细胞中被抑制的mRNA是如何被翻译激活的还知之甚少。我们当前的这项研究发现,MIWI/piRNA通过与翻译起始因子eIF3f、RNA结合蛋白HuR等因子形成功能性翻译激活复合物,特异性地激活小鼠精子细胞中包含AU序列富含元件(AU-rich element,ARE)mRNA的翻译。此项研究揭示了PIWI/piRNA在精子细胞翻译激活中的新功能,并证明此功能为精子细胞发育和功能性精子生成所必需。 | 戴鹏 刘默芳 | 2020 | 中国细胞生物学学报2020，42，2： | 1 |
| 16 | 实时荧光定量PCR方法检测小RNA显示文摘Real—time Quantitative PCR Detecting System,即实时定量核酸扩增检测系统,也称为实时定量基因扩增检测系统,简称定量PCR(qPCR)。荧光定量PCR-般分为非特异性荧光定量PCR和特异性荧光定量PCR。本文主要介绍一种应用非特异性荧光定量PCR(以SYBRGreen I为例)方法对小RNA进行定量分析。SYBRGreen I qPCR分析小RNA的优点为:实验设计简单,一般需要一条特异性反转录引物,一条特异性正向PCR引物,反向PCR引物可通用于所有小RNA分析,无需象TaqMan方法那样专门设计探针;实验成本相对较低;可通过溶解曲线分析来检测扩增反应的特异性。这些特点有利于初学者掌握该技术,而对于一般的分析也可以完全达到实验目的。操作方法如下: | 贺小宏 刘默芳 | 2010 | 中国细胞生物学学报2010，32，3： | 0 |
| 17 | 微RNA关键结合蛋白的功能与机制研究显示文摘在原计划研究内容基础上,开展了piRNA、miRNA作用通路中功能蛋白质因子的筛选、功能机制研究。(1)对MIWI/piRNA机器的代谢分子机制和生理学意义进行了深入研究;(2)发现CAF1/MIWI/piRNA介导后期精子细胞中m RNA清除;(3)筛选获得了若干RISC相互作用蛋白,发现BTG2蛋白对miRNA引起的m RNA脱腺苷酸化具有显著促进作用,并且依赖于其与CAF1间的相互作用;(4)对2个与miRNA生物合成直接相关的关键蛋白质的类泛素化修饰(SUMOylation)进行了体内体外的鉴定,并进一步研究了这种蛋白质修饰的功能。该研究完成了原计划研究内容,取得了一些重要研究结果。 | 刘默芳 | 2016 | 科技资讯2016，14，21： | 0 |
| 18 | 大肠杆菌精氨酰tRNA合成酶基因(argS)的上游非编码区存在一个负调控区(英文)显示文摘含大肠杆菌精氨酰tRNA合成酶 (ArgRS)基因 (argS)的 pUC18重组质粒 ,在大肠杆菌TG1转化子中能够高表达ArgRS近 10 0 0倍。为了研究大肠杆菌argS的表达调控 ,构建了一系列的缺失突变。分别缺失全部上游序列 (argSΔ1)、Shine Dalgarno(SD)区 (argSΔ2 )和缺失启动子 - 10区下游 (相当于翻译起始位点 - 6 5nt ,argSΔ3)前的上游序列后的变种argS都不能表达ArgRS。而缺失 - 12 2nt (距翻译起始位点 - 180nt,argSΔ8)、- 70nt (距翻译起始位点 - 12 8nt,argSΔ7)、- 5 2nt (距翻译起始位点 - 110nt ,argSΔ6 )、- 35区 (距翻译起始位点 - 94nt,argSΔ5 )、启动子 - 10区 (距翻译起始位点 - 71nt,argSΔ4)前的上游序列后 ,这些缺失突变基因的表达水平与野生型argS接近。但argSΔ4、argSΔ5、argSΔ6都会形成部分包涵体。通过RNA斑点杂交测定发现 ,argSΔ4、argSΔ5和argSΔ6的mRNA转录量为argS及argSΔ7的 2到3倍。即 - 5 2nt和 - 70nt之间的 19个碱基 (AATAGTGAAAACGGCAATA)可能是大肠杆菌argS的转录负调控区。该元件的缺失将使得ArgRS过快表达并导致部分蛋白质形成包涵体。凝胶阻滞分析也发现在细胞粗抽液中有一个因子可以专一地与这个负调控元件结合 ,它可能参与该基因的表达调控。 | 刘默芳 徐敏刚 夏宪 王恩多 王应睐 | 2001 | 生物化学与生物物理学报2001，33，6： | 0 |
| 19 | 核苷碱基修饰抑制RNA免疫原性成就新型冠状病毒mRNA疫苗显示文摘1 RNA研究领域多项成果曾获诺贝尔奖项近日揭晓的2023年诺贝尔生理学/医学奖颁发给了出生于匈牙利的美国生物学家Katalin Karikó和美国生物学家Drew Weissman,以表彰他们关于核苷碱基修饰的突破性发现,从而为开发高效新型冠状病毒mRNA疫苗奠定了坚实基础。这也是继多核苷酸磷酸化酶的发现(1959年诺贝尔生理学/医学奖),酵母Ala-tRNA序列的确定(1969年诺贝尔生理学/医学奖)、逆转录现象的发现(1975年诺贝尔生理学/医学奖)、内含子和RNA剪接现象的发现(1993年诺贝尔生理学/医学奖)、核酶的发现(1993年诺贝尔化学奖)、RNA干扰现象的发现(2006年诺贝尔生理学/医学奖)、真核生物转录机制的研究(2006年诺贝尔化学奖)以及CRISPR/Cas9基因编辑技术(2020年诺贝尔化学奖)之后在RNA领域获得诺贝尔生理学/医学奖的又一重大科研发现。 | 翟甜甜 刘默芳 雷海新 | 2023 | 生理学报2023，75，5： | 0 |
| 20 | ShRNA慢病毒表达载体的构建和病毒颗粒包装显示文摘慢病毒载体主要用于感染对常规方法转染效率较低的细胞,如原代细胞等。慢病毒颗粒可同时感染增殖和非增殖的细胞,且感染比较稳定、持久。运用慢病毒载体,可实现特定基因的高表达,也可以表达ShRNA以RNAi方式下调某基因的表达。本文主要介绍ShRNA慢病毒表达载体的构建和病毒颗粒包装。实验步骤如下: | 华敏敏 刘默芳 | 2010 | 中国细胞生物学学报2010，32，4： | 0 |
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