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| 1 | 替莫唑胺联合全脑放疗治疗脑转移瘤的疗效评价显示文摘目的:评价替莫唑胺联合全脑放疗治疗脑转移瘤患者的疗效及安全性。方法:将55例脑转移瘤患者(转移灶>3个)随机分为替莫唑胺联合放疗组及放疗组。替莫唑胺联合放疗组予以常规分割行全脑放疗,DT:40 Gy(2 Gy.d-1,每周5 d),于放疗d1开始给予替莫唑胺口服治疗(75 mg.m-2.d-1),放疗结束后每28 d予以替莫唑胺口服5 d(200 mg.m-2.d-1)化疗,共6周期。放疗组全脑放疗,DT:40 Gy(2 Gy.d-1,每周5 d)。使用Kaplan-Meier方法计算生存率、无进展生存率及生存曲线,组间生存率比较应用Log-rank检验。结果:替莫唑胺联合放疗组与放疗组的客观缓解率分别为76.9%和48.0%(P=0.033);中位生存期分别为8.0和5.5个月,差异达统计学显著性(P=0.025);中位无进展生存期为分别为5.0和3.1个月,差异达统计学显著性(P=0.020)。替莫唑胺联合放疗组发生恶心、呕吐的患者显著高于单纯放疗组,但大部分患者可耐受。结论:替莫唑胺联合全脑放疗有可能提高脑转移瘤患者的局部控制及远期生存,且耐受性良好。 | 毕卓菲 刘宜敏 何艳 廖恺 | 2012 | 中国新药杂志2012，21，4： | 27 |
| 2 | 全脑放疗联合替莫唑胺治疗非小细胞肺癌脑转移的荟萃分析显示文摘目的通过荟萃分析,探讨全脑放疗(WBRT)联合替莫唑胺(TMZ)治疗非小细胞肺癌(NSCLC)脑转移的疗效及安全性。方法通过Medline、EMBASE、Cochrane、CBM等数据库检索国内外文献截止日期为2011年12月31日相关文献。选择治疗组为WBRT+TMZ、对照组为单纯WBRT的NSCLC脑转移的随机对照试验(RCT)。由2位评价者分别按上述检索策略收集资料,按纳人标准人选,主要对客观缓解及不良反应进行荟萃分析,其次是总生存(OS)。结果共纳人4个RCT。WBRT+TMZ与单纯WBRT相比,前者客观缓解率是后者的1.55倍(P=0.003);在不良反应方面,胃肠道不良反应(恶心、呕吐)的发生率两组相当(P=0.14),而血液学不良反应(3/4度骨髓抑制)的发生率前者是后者的2.47倍(P=0.008);在远期疗效方面,两组间生存获益的可能性相当(P=0.69)。结论现有证据提示对于NSCLC脑转移的治疗,WBRT+TMZ与单纯WBRT相比,改善了客观缓解,但增加了血液学不良反应,未能将近期的局控获益转化为远期的生存获益。因此,对于WBRT+TMZ治疗NSCLC脑转移的疗效和安全性,还需要进一步的大规模、高质量、前瞻性的Ⅲ期临床研究进行验证。 | 廖恺 毕卓菲 何艳 刘宜敏 | 2012 | 中华医学杂志2012，92，45： | 24 |
| 3 | 国产麻疹-腮腺炎-风疹联合疫苗与麻疹疫苗的免疫效果评价显示文摘目的研究探讨国产麻疹-腮腺炎-风疹联合疫苗(MMR)和麻疹疫苗的免疫效果差异性,为下一步更好使用联合疫苗提供依据。方法选择8月龄儿童随机分为两组,分别接种MMR疫苗和麻疹疫苗,于免前免后采血,用酶联免疫吸附法(ELISA)定量检测接种者相应的IgG抗体水平。结果观察对象接种MMR疫苗前后麻疹IgG抗体GMT分别为1.536、27.763,抗体阳转率85.71%;另一组观察对象接种麻疹疫苗前后麻疹IgG抗体GMT为1.205、30.867,抗体阳转率82.14%,两组相比差异无统计学意义。观察对象接种MMR疫苗后风疹IgG抗体和腮腺炎IgG抗体的阳转率都在80%以上。结论国产MMR疫苗具有良好的免疫原性。 | 刘卫民 何梅英 卓菲 | 2010 | 实用预防医学2010，17，9： | 23 |
| 4 | 七种国产新型冠状病毒核酸检测试剂盒的一致性和检出能力评价研究显示文摘目的比较7种国产新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸检测试剂盒的一致性和检出能力,为临床实验室选择检测方法和新型冠状病毒肺炎的诊断提供参考依据。方法收集深圳市罗湖区人民医院2020年1月29日至2月5日2019-nCoV感染确诊患者核酸检测阳性和疑似患者核酸检测阴性的咽拭子标本各10例,采用7种试剂盒(编号a^g)分别进行核酸检测,评价7种试剂盒临床标本检测结果的一致性;选取1份阳性标本核酸用无RNA酶水梯度稀释得到5个浓度梯度盘(浓度1~浓度5),比较不同品牌试剂盒的阳性检出率及批内重复性。结果6种试剂盒检测20例临床标本的阴性和阳性符合率均为100%,仅1种试剂盒的阳性符合率为8/10,阴性符合率10/10;批内重复性显示7种试剂盒在浓度1水平重复检测病毒载量CV值均<5%;在浓度1~浓度3梯度区间,开放阅读框(ORF)1ab基因的检出能力比较显示b、d、f低于a、c、e、g,试剂盒e和g最高(14/15),a试剂盒对N基因检出能力可达15/15,优于其余5种试剂盒。ORF1ab和N基因检出能力综合分析显示d试剂盒检出能力最低(ORF1ab:40%;N:53%),a、b、c、e、f这5种试剂盒检出能力无明显差异。结论7种试剂盒对病毒载量较高的阳性标本检测的准确度和重复性无明显差异,检测性能良好;但部分试剂盒对弱阳性标本的检出能力欠佳,建议弱阳性标本应至少采取两个厂家的试剂盒复核检验,以保障结果的准确性。 | 熊丹 阚丽娟 王萌萌 汤花梅 武薇 杨贵清 卓菲 豆小文 陈大洋 纪翔 宗曾艳 张秀明 | 2020 | 中华检验医学杂志2020，43，8： | 23 |
| 5 | 深圳地区疱疹性咽峡炎疫情的柯萨奇病毒A4型VP1区基因特征分析显示文摘目的 分析从2012年和2014年深圳市2起疱疹性咽峡炎疫情中获得的6株柯萨奇病毒A组4型(CVA4)的VP1区遗传进化特征.方法 采用荧光定量反转录(RT)-PCR法对疱疹性咽峡炎患儿咽拭子标本进行总肠道病毒(EV)、人肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒A组16型(CVA16)、CVA4、CVA6和CVA10进行检测,对CVA4阳性样本采用RT-PCR方法扩增其VP1区全长序列,并进行核苷酸序列测定和系统进化分析.结果 在2起疫情中共鉴定出6株CVA4病毒,均为GIb基因亚型.其中的2014年深圳CVA4病毒株与2012年深圳CVA4病毒株核苷酸的同源性仅为94.1%(变异率达5.9%);氨基酸的同源性为98.3%,共发现5个氨基酸突变aa22N-S、aa34T-A、aa63N-S、aa165A-D、aa200T-A.进化分析表明,2012年深圳CVA4病毒株与山东省KF150144株进化关系最近;而2014年深圳CVA4病毒株与吉林省JQ715709株的进化关系最近.结论 2014年深圳CVA4病毒株和2012年病毒株的VP1区存在较大的核苷酸变异,基因内部走势明显不同. | 蔡春林 姚相杰 卓菲 何雅青 杨贵清 | 2015 | 中华医学杂志2015，95，16： | 20 |
| 6 | 2012年深圳市罗湖区沙门菌菌型分布及耐药情况分析显示文摘目的了解2012年辖区内沙门氏菌的菌型分布及耐药情况,为防治沙门氏菌感染和临床治疗提供依据。方法采用GB4789.4-2010沙门菌检测方法对从腹泻病人中分离的26株沙门菌进行分离鉴定,阳性菌株用MicroScanWalk-Away-40全自动细菌鉴定仪做生化鉴定及药敏分析。结果沙门菌感染主要以幼年组(0岁~5岁)儿童为主,分离季节主要集中在春夏季;鼠伤寒沙门菌为分离最多的血清型,菌株对氨基糖苷类及碳青霉烯类药物普遍敏感,对青霉素类药物耐药严重;存在多重耐药菌株。结论鼠伤寒沙门菌是辖区感染性腹泻的优势菌株,病例感染呈低龄化趋势,多重耐药形势严峻,应合理使用抗生素,实时监测菌株耐药谱变化趋势,指导临床正确用药,控制多重耐药菌株的出现。 | 龙冬玲 卓菲 黎剑华 赵洁玲 杨贵清 姚相杰 | 2014 | 中国卫生检验杂志2014，24，2： | 20 |
| 7 | 国内芬太尼透皮贴剂与口服吗啡控释片治疗中重度癌痛临床随机对照试验的Meta分析显示文摘目的:通过Meta分析,探讨国内芬太尼透皮贴剂与口服吗啡控释片在癌痛治疗中的临床应用价值。方法:检索中国生物医学文献库(CBMdisc)、中国期刊全文数据库、维普数据库(VIP)等国内数据库已发表的相关文献,收集国内有关芬太尼透皮贴剂与口服吗啡控释片治疗癌痛的随机临床对照试验(randomized controlled trials,RCTs),由两位评价者分别按检索策略收集并按纳入标准入选资料,分析指标为疼痛缓解率和毒副反应发生率。结果:12个研究共911例患者纳入分析,芬太尼透皮贴剂与口服吗啡控释片的疼痛缓解率分别是87.32%和89.14%(P=0.79);在不良反应方面,芬太尼透皮贴剂相比口服吗啡控释片便秘的发生率降低31%(P<0.00001),恶心呕吐的发生率降低26%(P=0.0002),头晕嗜睡的发生率降低10%(P=0.02)。结论:芬太尼透皮贴剂和口服吗啡控释片治疗中重度癌痛的效果相近,但芬太尼透皮贴剂不良反应的发生率可能较低,临床医生应根据患者个体情况合理选用。 | 杨琼 陈邓林 毕卓菲 郭双双 江志敏 谢德荣 | 2008 | 临床肿瘤学杂志2008，13，2： | 18 |
| 8 | 深圳地区流行性出血热疫点鼠类汉坦病毒血清学调查研究显示文摘目的了解深圳地区肾综合征出血热疫点鼠形动物汉坦病毒的带毒情况和抗体水平,为本市肾综合征出血热的预防和控制提供科学依据。方法用酶联免疫吸附(ELISA)法检测鼠血清汉坦病毒Ig M抗体和Ig G抗体,并用汉坦病毒定量试剂盒测定汉坦病毒总抗体浓度。结果深圳地区肾综合征出血热疫点的鼠种主要为褐家鼠(占50.82%)和臭鼩鼱(占47.51%)。鼠类汉坦病毒Ig M抗体和Ig G抗体阳性率分别为10.5%和16.6%。鼠形动物血清汉坦病毒总抗体浓度为(54.98±9.87)pg/ml。结论深圳地区褐家鼠具有较高的汉坦病毒感染率和抗体水平,同时臭鼩鼱在疫点鼠中的比例较大,并可携带汉坦病毒。应加强肾综合征出血热疫点的灭鼠和后续监测工作。 | 蔡春林 陈戊申 陈伟红 卓菲 姚相杰 张仁利 | 2017 | 中国卫生检验杂志2017，27，1： | 17 |
| 9 | 2012-2016年深圳4家医院感染性腹泻来源非伤寒沙门菌耐药研究显示文摘沙门菌是全球公共卫生关注的重要人兽共患病病原菌。研究显示,非伤寒沙门菌(nontyphoidal salmonella,NTS)是引起全球儿童和成人急性胃肠炎散发及暴发的主要病原。 | 龙冬玲 闫梅英 崔志刚 黎剑华 王礼法 卓菲 | 2017 | 中华预防医学杂志2017，51，12： | 16 |
| 10 | 深圳市健康人群麻疹风疹腮腺炎免疫水平调查显示文摘目的了解深圳市健康人群中麻疹、风疹、腮腺炎的免疫水平,为控制相应疾病,改善免疫策略提供理论依据。方法按照随机原则选取494名0~40岁健康人群及部分育龄期女性、新出生婴儿,采集静脉血,用酶联免疫吸附试验检测麻疹、风疹、腮腺炎血清IgG抗体水平。结果健康人群中麻疹、风疹、腮腺炎IgG抗体阳性率随年龄升高呈升高趋势,但总体水平偏低,其中0岁~组麻疹、风疹IgG抗体阳性率偏低,显示部分新生儿出生后面临感染疾病的风险。结论改善现有的免疫策略,扩大免疫规划的范围,将麻腮风联合疫苗纳入免疫规划管理,提高人群总体防病水平。 | 刘卫民 何梅英 卓菲 付丹凤 | 2008 | 中国初级卫生保健2008，22，3： | 15 |
| 11 | 全脑放疗联合厄洛替尼治疗非小细胞肺癌脑转移的效果显示文摘目的探讨全脑放疗(WBRT)联合厄洛替尼治疗非小细胞肺癌(NSCLC)脑转移的有效性及安全性。方法回顾性分析24例NSCLC脑转移患者,均接受全脑放疗联合厄洛替尼治疗,其中WBRT剂量为36 Gy/18次,厄洛替尼150 mg/次,1次/d,放疗结束后继续予厄洛替尼治疗,直至出现疾病进展或不能耐受不良反应。放疗结束后3个月,复查脑部MRI评价近期疗效,统计总生存期与1年生存率,并评估不良反应。结果 WBRT联合厄洛替尼治疗NSCLC脑转移患者的总体缓解率为70.8%,疾病控制率91.7%;中位总生存期为10.5个月,1年生存率为41.7%。不良反应主要为皮疹、腹泻和乏力,未出现Ⅲ~Ⅳ度不良反应。结论 WBRT联合厄洛替尼治疗NSCLC脑转移具有良好的近期疗效,能够延长生存期,且毒副作用较小,患者耐受性好。 | 李豆豆 姜燕慧 毕卓菲 刘宜敏 | 2015 | 广东医学2015，36，15： | 15 |
| 12 | 饮食业单核细胞增生性李斯特菌污染状况分析显示文摘[目的]了解饮食业冷藏设备及食品中单核细胞增生性李斯特菌的污染情况,为制订预防措施提供依据。[方法]采集53家饮食经营单位冷藏食物及冰箱冷藏室内表面涂抹拭子共293份样本,按国标法分离鉴定。[结果]冷藏室内表面涂抹拭子200份样本,单增李斯特菌检出阳性率为4.00%。3类冷藏食品共93份样本,阳性率为3.23%[结论]饮食业冰箱及食品存在交叉污染,控制冷藏温度可有效防止单增李斯特菌污染。 | 张风雷 戴桂勋 汤洵 卓菲 卓丽 杨湘霞 张艳 | 2008 | 现代预防医学2008，35，4： | 14 |
| 13 | 奈达铂单周方案化疗联合同期放疗治疗局部晚期宫颈癌的疗效显示文摘目的研究奈达铂单周方案化疗联合同期放疗治疗局部晚期宫颈癌的近期疗效及不良反应。方法 80例局部晚期宫颈癌患者,随机分成奈达铂组40例,顺铂组40例。两组患者均接受盆腔外照射放疗及腔内放疗,在盆腔外照射的第1周起,奈达铂组与顺铂组分别用奈达铂30 mg/m2或顺铂30 mg/m2静脉滴注,每周1次,1周为一疗程,共6个疗程。采用2检验比较两组患者的近期疗效和急性不良反应。结果 80例患者均可进行疗效评价,两组患者的临床资料比较无明显差别。奈达铂组和顺铂组患者的近期疗效差异无统计学意义(P>0.05),有效率均为100%。在不良反应方面,奈达铂组恶心、呕吐的发生率明显低于顺铂组(P=0.002)。结论对于局部晚期宫颈癌,奈达铂近期疗效与顺铂相似,但奈达铂胃肠道反应发生率低,耐受性良好。 | 毕卓菲 刘宜敏 廖恺 李豆豆 | 2013 | 广东医学2013，34，20： | 14 |
| 14 | 深圳市罗湖区托幼机构儿童蛲虫感染现状及危险因素分析显示文摘目的调查深圳市罗湖区托幼机构儿童蛲虫感染情况,并分析蛲虫感染危险因素。方法以分层抽样法在罗湖区抽取6所托幼机构的489名儿童进行调查。采用透明胶纸肛拭法检查蛲虫卵;同时对托幼机构卫生环境、儿童卫生习惯及家庭卫生情况等进行问卷调查。结果儿童蛲虫感染率为10.22%(50/489)。单因素分析结果显示,可能与蛲虫感染相关(P<0.05)的因素有:托幼机构档次、年级、睡房地面材质、床铺类型、被褥管理模式、班级独立厕所、盥洗室水龙头类型、父母文化程度、洗澡频率、清洗屁股频率、饭前洗手、便后洗手。多因素Logistic回归分析显示,高年级、被褥混合叠放、母亲学历低、洗屁股频率低以及班级无独立厕所等5个因素为托幼机构儿童蛲虫感染的危险因素。结论控制托幼机构儿童蛲虫感染率,应从规范托幼机构寝具管理、提高家长对蛲虫病的认识、改善儿童的卫生习惯等方面进行综合防制。 | 旷翠萍 吴晓亮 陈戊申 吴菲菲 卓菲 | 2015 | 中国血吸虫病防治杂志2015，27，1： | 14 |
| 15 | 2012年-2013年深圳市罗湖区腹泻患者沙门菌流行特征及耐药情况分析显示文摘目的分析2012年-2013年本辖区腹泻患者中沙门菌的感染情况及耐药特征,为防治沙门菌感染和临床治疗提供依据。方法采用GB 4789.4—2010沙门菌检测方法,对从腹泻患者中分离的49株沙门菌进行分离鉴定,阳性菌株用全自动细菌鉴定仪做生化鉴定及药敏分析。结果沙门菌感染主要以幼年组(0岁~5岁)儿童为主,分离高峰集中在春季、夏季;鼠伤寒沙门菌的分离率最高,菌株对青霉素类及磺胺类药物耐药率较高,存在多重耐药菌株。结论鼠伤寒沙门菌是本辖区感染性腹泻的优势菌型,感染患者的年龄呈现低龄化,沙门菌耐药率呈逐年升高趋势,菌株多重耐药形势严峻。 | 黎剑华 龙冬玲 卓菲 赵洁玲 沈静媛 | 2016 | 中国卫生检验杂志2016，26，3： | 13 |
| 16 | 一起札如病毒所致成年人急性胃肠炎暴发的分子流行病学研究显示文摘目的了解一起成年人急性胃肠炎暴发流行的病原学。方法采用国家标准方法对样本进行沙门菌、志贺菌、金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、副溶血弧菌、变形杆菌、致泻性大肠埃希菌、蜡样芽孢杆菌、空肠弯曲菌及单核细胞增生李斯特菌10种致病菌进行检测。采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测诺如病毒和札如病毒核酸,对阳性PCR产物进行核苷酸序列测定,并进行基因系统进化分析。结果 7份粪便样本中4份为札如病毒核酸阳性。4株札如病毒与GⅠ.2型参考株核苷酸序列同源性在94.7%~98.4%之间。基因进化分析显示,札如病毒深圳株与Sapovirus Hu/Oshima1/2009/JP、Houston/90(U95644)、Parkville/94/U73124在同一进化树遗传分支,属于GⅠ.2型。结论此起成年人急性胃肠炎暴发是由札如病毒GⅠ.2型感染所致。 | 何雅青 卓菲 张海龙 杨贵清 杨洪 文风兰 黄薇 夏伟 罗敏 武伟华 刘建平 姚相杰 冼慧霞 | 2012 | 疾病监测2012，27，2： | 12 |
| 17 | 荧光定量RT-PCR定量检测诺如病毒方法的建立及其评价显示文摘目的:建立荧光定量RT-PCR快速检测诺如病毒GⅠ、GⅡ的方法,以用于患者标本的检测、分型及绝对定量。方法:经过优化筛选出最佳反应体系及反应条件,建立荧光定量RT-PCR快速检测诺如病毒的方法;制作两种不同型号的荧光定量PCR仪的绝对定量标准曲线,并从灵敏度、特异性、重复性、对患者标本检测能力等方面对建立的方法进行综合评价。结果:该方法在两种不同型号的仪器上对108-101copy/μl范围内的病毒,具有良好的线性关系,最低灵敏度为101copy/μl。与容易引起腹泻症状的轮状病毒、腺病毒、星状病毒、肠道病毒均无交叉反应;诺如病毒GⅠ、GⅡ两种常见感染人类的亚型之间无交叉反应。批内及批间重复性实验的标准差在0.10~0.59、变异系数在0.43%-2.84%之间,显示该方法重复性较好。用该方法共检测腹泻患者粪便标本181份,其中33份诺如病毒阳性,随机抽取10份阳性标本测序分析,结果证实均为诺如病毒。结论:本研究建立的诺如病毒荧光定量RT-PCR检测方法,灵敏度、特异性、重复性、对患者标本的检测能力等均显示较好的结果,且能快速区分GⅠ、GⅡ两种感染人类的重要亚型,在诺如病毒的快速检测中有着实际推广意义。 | 陈传德 周晓红 莫艳玲 李晖 杨贵清 卓菲 | 2010 | 中国卫生检验杂志2010，20，3： | 12 |
| 18 | 深圳地区四家医院感染性腹泻来源沙门菌耐药性及分子分型研究显示文摘目的分析2012-2016年深圳地区感染性腹泻沙门菌耐药状况及分子型别特征,为沙门菌感染防控提供科学依据。方法收集深圳地区四家医院的137株沙门菌,传统血清学方法鉴定沙门菌血清型,微量肉汤稀释法测定菌株药物敏感性,脉冲场凝胶电泳(PFGE)对鼠伤寒沙门菌和肠炎沙门菌作分子同源性分析。结果 137株沙门菌可分为30种菌型,鼠伤寒沙门菌和肠炎沙门菌是本地优势菌型。菌株对链霉素、氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸钾耐药最为严重,对青霉素类、头孢类、氨基糖苷类、大环内酯类抗生素的耐药呈逐年增高的趋势。49株鼠伤寒沙门菌经脉冲场凝胶电泳可获得38种带型,相似度65.5%~100%,TY18为优势带型;27株肠炎沙门菌经脉冲场凝胶电泳可获得9种带型,相似度61.8%~100%,EN7为优势带型。结论感染性腹泻来源沙门菌耐药状况比较严重,菌株PFGE带型多样化,呈高度散发,部分带型与其耐药谱之间具有一定的聚集与关联性。 | 龙冬玲 韦洁宏 吴劲松 郝红雨 蒋淑萍 黎剑华 卓菲 | 2017 | 中国人兽共患病学报2017，33，10： | 12 |
| 19 | 吉西他滨固定剂量率输注一线治疗晚期胰腺癌随机对照试验的Meta分析显示文摘目的:探讨吉西他滨固定剂量率(fixed dose rate,FDR)输注一线治疗晚期胰腺癌的价值。方法:通过MEDLINE、EMBASE、ASCO和ECCO等数据库及论文集检索相关文献,选择FDR组为吉西他滨FDR化疗,对照组为吉西他滨30min化疗的晚期胰腺癌随机对照试验(randomized controlled trial,RCT)。由2位评价者依据检索策略收集资料,按纳入标准筛选文献,主要对总生存率,其次是客观缓解率和毒副反应进行Meta分析。结果:从876篇文献中筛选出符合纳入标准的2个RCT,涉及648例患者。FDR组与对照组相比,FDR组1年生存率提高6%,95%CI为0.00~0.12,P=0.060;客观缓解率提高5%,95%CI为0.00~0.09,P=0.030;3~4度中性粒细胞减少症增加25%,95%CI为0.18~0.33,P〈0.000;血小板减少症增加19%,95%CI为0.13~0.26,P〈0.000;贫血增加8%,95%CI为0.02~0.13,P=0.007;恶心呕吐增加4%,RD=0.04,95%CI为0.00~O.12,P=0.160。结论:现有证据不推荐吉西他滨FDR输注常规临床应用,但值得进一步的临床试验。 | 杨琼 江志敏 郭双双 陈邓林 毕卓菲 谢德荣 | 2008 | 中华肿瘤防治杂志2008，15，1： | 11 |
| 20 | 猪α-干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及其生物活性测定显示文摘利用基因工程技术,将编码梅山猪α-干扰素成熟蛋白基因(mPoIFNα,501 bp)亚克隆到含分泌信号肽序列的毕赤酵母表达载体pPIC9K中,构建成分泌型重组表达载体pPIC9K-mPoIFNα。用化学方法(LiCl)将线性化的mPoIFNα与ssDNA共转化入毕赤酵母菌株GS115,转化子经MD平板筛选和PCR鉴定后,得到的阳性菌株再以高浓度的G418筛选多拷贝重组子。该高拷贝菌株经1%甲醇连续诱导4 d,表达产物经SDS-PAGE和Western-blot检测,结果表明在毕赤酵母中猪α-干扰素获得分泌型表达,表达产物约为20 000,在GS115中的表达量约为40mg/L,占GS115表达的可分泌型总蛋白的40.1%。对表达产物进行理化分析发现,重组酵母菌表达的蛋白耐酸(pH2),对热(56℃)部分敏感,并能被特异性抗猪α-干扰素抗体中和而不与抗猪γ-干扰素抗体反应。细胞病变抑制法(CPE50)测定干扰素生物活性,试验结果表明rPolIFNα具有较高的抗病毒生物活性,在MDBK中的抗VSV比活性为8.0×106U/mg。 | 姚清侠 钱平 曹毅 徐卓菲 何雁南 陈焕春 | 2008 | 中国兽医学报2008，28，12： | 10 |
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