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| 1 | DNA免疫诱导鸡对禽流感病毒的免疫保护反应显示文摘为研究DNA疫苗对禽流感病毒(AIV)的保护作用,将禽流感病毒A/Afri.Star./Eng-Q/983/79(H7N1)株血凝素基因cDNA置于SV40启动子和增强子下游,构建了HA基因表达质粒pSVH7。以此质粒肌注免疫3周龄SPF鸡,免疫后第4周用100倍最小鸡胚感染量的HA基因同源病毒人工感染,1周后用棉拭子取样进行泄殖腔病毒分离。免疫后每周及攻毒后第1、2周采血,微量血凝抑制法检测抗体。病毒分离阴性结果:100μg/只组为6/6,10μg/只组为4/6,1μg/只组为5/8,空白对照组为0/6。攻毒后1周相对应的4组血凝抑制价依次为:1∶32~64,1∶16~64,1∶4~64,1∶4~16,表明所构建的H7亚型HA基因表达质粒可诱导鸡产生有效的免疫保护反应。 | 陈化兰 于康震 田国滨 唐秀英 卢景良 | 1998 | 中国农业科学1998，31，5： | 55 |
| 2 | 以MTT比色法检测鸡脾淋巴细胞转化效果显示文摘本研究运用MTT比色法以正交试验对鸡脾脏淋巴细胞转化的最佳条件(conA量、血清种类和浓度)进行了研究。结果表明,无论血清种类和浓度如何,低剂量ConA(2.5~10μg/ml)可以获得较好的转化效果。当ConA的量确定时,低浓度鸡血清(0.5%~1.25%)的转化效果优于高浓度(2%~3%):5%犊牛血清优于任何浓度的鸡血清;无血清培养基优于血清培养基。其最佳组合为无血清RPMI1640培养基加ConA2.5μg/ml。 | 李祥瑞 金红 王秀丽 卢景良 | 1996 | 畜牧与兽医1996，28，1： | 48 |
| 3 | 禽流感病毒血凝素基因的克隆及其DNA疫苗的免疫原性显示文摘禽流感病毒(AIV)的表面结构蛋白血凝素(HA)是其主要保护性抗原。本研究参考已发表的H7亚型AIV的HA基因序列,设计合成了1对H7HA特异引物,以AIVA/Afri.Star./Eng-Q/983/79/(H7N1)(A/Afri.Star./Eng)核酸为模板,通过RT-PCR扩增出1条1.7kbcDNA片段。将这一片段定向克隆到pUC18中,对其5′端及3′端部分序列测定后,确证其为HAcDNA。将HA基因置于SV40启动子和增强子下游,构建了这一基因的真核表达质粒pSVH7。以此质粒100μg肌肉注射免疫3周龄SPF鸡6只,4周后以100倍鸡胚感染剂量(EID)的HA基因同源病毒对所有鸡进行攻毒,1周后以棉拭子进行泄殖腔病毒分离;免疫后1~6周每周对所有鸡翅静脉采血,分离血清,检测HI抗体。结果,100μg免疫组鸡病毒分离数为0/6,对照组为6/6;攻毒后1周免疫组鸡HI效价为1∶32~1∶64,对照组为1∶4~1∶16。表明所构建的HA基因表达质粒可作为基因疫苗诱导鸡产生免疫保护反应。 | 陈化兰 于康震 田国斌 唐秀英 卢景良 | 1997 | 中国兽医学报1997，17，6： | 27 |
| 4 | H_5和H_7亚型禽流感病毒HA基因的RT-PCR扩增及克隆显示文摘采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,以自行设计的H7和Н5亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因特异的两对引物,分别扩增了禽流感病毒A/AfricanStarling/983/79(H7N1)株和G株(广东鹅体分离株,H5N1)约1.7kb的HA全基因cDNA。将所扩增的两个基因cDNA未端经T4DNA聚合酶修饰后分别插入pUC18和pBluescript质粒中,得到了两个基因的重组质粒。 | 陈化兰 于康震 田国斌 唐秀英 卢景良 | 1997 | 中国畜禽传染病1997，，2： | 22 |
| 5 | 新城疫病毒F48E9株及东北地区流行株F基因遗传变异分析显示文摘采用异硫氰酸胍 /酚 /氯仿抽提一步法 ,提取新城疫病毒 ( NDV) F4 8E9株及 2个东北地区分离株 DB3、DB5基因组 RNA,并以其为模板经反转录合成 F基因 c DNA第 1链 ,再利用 PCR技术分段扩增出 F基因的c DNA。F4 8E9、DB3和 DB5株 F基因的 c DNA经酶切修饰后 ,插入 p UC1 9的多克隆位点中 ,转化感受态 E.coli DH5α。经相对分子质量比较、酶切分析及 PCR等鉴定方法筛选出 F4 8E9、DB3和 DB5株 F基因的阳性克隆。然后采用 Sanger′s双脱氧末端终止法对阳性重组子进行核苷酸序列测定 ,证实分别获得了 F4 8E9、DB3和 DB5株 F基因的全长 c DNA。利用 DNASIS及 MEGA分析软件 ,将上述 3个毒株的 F基因序列与基他 1 1株有代表性的 NDV的相应序列进行比较分析 ,并绘制了 1 4株 NDV F基因的系统发育进化树。结果表明 ,F4 8E9和 DB3株在核苷酸序列上相对独立于 Toyoda等所分的 A、B、C组 ,单独成为一组 ;DB5株与B1 Hitchner株同属 B组 ,说明它们具有较高的同源性。同时也证明我国有不同基因型的毒株在流行。从进化的角度来看 ,NDV各毒株间确实存在遗传变异 ,但 | 曹殿军 苑纯秀 郭鑫 闵平 孔宪刚 卢景良 | 2000 | 中国兽医学报2000，20，2： | 21 |
| 6 | 旋毛虫肌幼虫ES抗原特异性蛋白2个结构基因的分子克隆及其高效表达显示文摘旋毛虫肌幼虫排泄-分泌(ES)抗原来源于体外培养的旋毛虫肌幼虫的排泄-分泌物。为研制具有ES抗原功能的旋毛虫基因重组抗原,首先用AGPC法提取旋毛虫肌幼虫总RNA并进行变性琼脂糖凝胶电泳分析,发现它缺少真核生物所具有的28SrRNA。根据编码45000和49000蛋白的基因结构,设计并合成2对PCR引物,用RT-PCR方法分别扩增出了2个目的基因(TSPG和TSPGⅡ)。序列分析发现,TSPG在第458到505位之间的核苷酸编码框架与结构基因P45的不同,此外,还有多处出现与P45不同的碱基。在TSPGⅡ核苷酸序列中只有1个碱基与P49不同。根据可识别的糖基化位点判定,TSPG和TSPGⅡ各含有1个N-型连接的糖基化位点。将构建的3个重组质粒转化大肠杆菌,通过温度诱导培养,分别在大肠杆菌中表达出37000、46000和34000的重组蛋白,三者的表达水平分别为22%、10%和8%;Westernblot分析和ELISA检测表明,它们均可被猪旋毛虫病阳性血清和单克隆抗体识别,但特异性有所不同。将TSPGⅡ克隆至E.coli-Yeast穿梭载体pHIL-S1上,经内切酶消化和Southernblot杂交鉴定后,? | 阎玉河 童光志 卢景良 | 1997 | 中国兽医学报1997，17，6： | 20 |
| 7 | 鸡细胞因子研究进展显示文摘与人类和哺乳动物比较 ,以鸡为主的非哺乳动物细胞因子的研究不但在研究鸡免疫系统的发生及其免疫调节机理中具有重要作用 ,而且在与人类和哺乳动物的比较免疫学、生物发育和进化的研究中具有重要意义。本文从发现、生物学特性及分子特征等方面对鸡白细胞介素 - 1、6、8、骨髓单核细胞生长因子、转移生长因子_β家族、肿瘤坏死因子_α。 | 刘胜旺 孔宪刚 卢景良 | 2000 | 中国预防兽医学报2000，22，6： | 19 |
| 8 | 鸡IL-2基因的克隆及序列测定显示文摘根据已发表的鸡白细胞介素2(IL2)基因序列设计引物,用RTPCR方法从新城疫病毒感染的雏鸡脾淋巴细胞培养物中扩增出鸡的IL2基因cDNA,并进行序列测定,为进一步表达鸡IL2并深入研究其功能奠定了基础。 | 陈洪岩 刘胜旺 陈奖励 张宝山 卢景良 | 1999 | 中国兽医科技1999，29，7： | 18 |
| 9 | 鸡γ-干扰素基因的分子克隆与序列测定显示文摘应用逆转录 -聚合酶链式反应 ( RT-PCR)技术 ,从 Con A诱导培养 2 4 h的鸡脾淋巴细胞中扩增得到了大小约 50 0 bp的基因 ,将其平端连接到 p UC1 9质粒上 ,进行质粒 PCR和 Eco RI、Hind 双酶切鉴定后 ,筛选阳性重组克隆。序列分析表明 ,该基因阅读开放框架由 4 92个核苷酸组成 ,与马和人γ-干扰素基因序列的同源性分别为 3 5%和 3 2 %,与鸡 型干扰素基因的同源性仅为 1 5%,与国外报道的鸡 γ-干扰素基因序列完全一致。表明鸡脾淋巴细胞受到有丝分裂原刺激后 ,其 γ-干扰素基因 m RNA发生了表达 ,试验成功地克隆得到了鸡 | 刘胜旺 陈洪岩 孔宪刚 张宝山 马云燕 童光志 卢景良 | 2000 | 中国兽医学报2000，20，3： | 18 |
| 10 | 中国鸡传染性支气管炎病毒的变异显示文摘同IBV参考株比较,中国IBV流行株血清型内和血清型间在基因型和组织嗜性上均已发生变异;研究首次表明IBV血清型、基因型及组织嗜性间存在有规律的相关性;病毒免疫原S1基因的点突变在一定程度上可影响病毒的免疫原性。 | 江国托 刘思国 康丽娟 步志高 王秀荣 卢景良 王永坤 | 1998 | 中国畜禽传染病1998，20，6： | 16 |
| 11 | 鸡IL-2基因的克隆及序列测定显示文摘应用逆转录多聚酶链反应 (RT- PCR)技术 ,参照 Sundick发表的鸡白细胞介素 2 (IL- 2 ) c DNA基因序列 ,利用自行设计合成的 1对引物 ,从 Con A活化的 5周龄 HWL - SPF鸡脾细胞中 ,扩增出长 4 4 5bp的鸡IL- 2 c DNA基因 ,以 p UC119为载体 ,克隆了扩增片段 ,经酶切鉴定及 DNA序列测定 ,确认为鸡 IL- 2基因 ,该序列与 Sundick报道的结果一致。对氨基酸的比较发现 ,鸡 IL - 2与牛 IL - 2和 IL - 15之间分别存在着 2 4 %及4 4 %的同源性 ,该基因系国内首次获得经序列测定证实的鸡 IL- 2 c DNA基因 ,这为今后进一步进行鸡 IL- | 陈奖励 王欢 宋英晖 宋秀龙 陈红岩 姜永厚 卢景良 | 2000 | 中国兽医杂志2000，26，4： | 15 |
| 12 | 鸡新城疫病毒HN基因在重组鸡痘病毒中的表达及其保护性的研究显示文摘利用重组表达质粒HN-PEFL-29与鸡痘病毒FP9共转染鸡胚成纤维细胞,经蚀斑筛选,结合Southern杂交,获得含有外源HN基因的纯化重组病毒。将筛选到的重组病毒经4次传代,细胞可见明显病变。免疫荧光检测结合Western印迹表明该重组子表达产物主要位于细胞膜上,以糖基化(74kD)和非糖基化(68kD)2种形式存在,表达产物具有类似于天然NDVHN蛋白的红细胞吸附活性及神经氨酸酶活性,且这2种活性均可被NDVHN特异性单抗所抑制。对该表达产物的免疫活性研究表明:用重组病毒免疫4周龄SPF鸡的ELISA抗体水平和血凝抑制效价均高于FPV接种组,但低于LaSota弱毒活疫苗接种组。以NDV强毒株F48E9攻毒发现:接种重组病毒106pfu/只时,保护力可达80%,而104pfu/只时,保护率仅为60%,这表明该重组病毒对雏鸡具有一定的保护作用,且该保护作用与接种剂量有一定的相关性。 | 曹殿军 刘惠莉 王莉林 闵平 张莹 卢景良 | 1998 | 中国免疫学杂志1998，14，1： | 14 |
| 13 | 用 MTT 比色分析法检测牛白细胞介素-2的研究显示文摘以伴刀豆蛋白 A(Con A)活化的牛外周血单个核细胞(PBM)作应答细胞,对四甲基偶氮唑盐(MTT)比色分析法检测牛白细胞介素-2(IL-2)的各项参数作了系统探讨,首次建立了检测牛 IL-2的 MTT 比色分析法。结果表明,活化应答细胞时的细胞密度以2.5~5×10~6个/ml、Con A 浓度以12.5μg/ml、活化时间以48~72小时为宜;MTT 比色分析的最适条件为:应答细胞密度1~2×10~5个/孔,α-甲基-D-甘露糖苷(α-mM)终浓度为12.5mg/ml,样品与应答细胞作用时间为36~48小时,MTT 用量为50μg/孔,MTT 作用时间为2.5小时,结果证明,本方法可检出少至390个活应答细胞、0.03个单位(U)的重组人 IL-2(rhIL-2)和2^(-5)稀释的含牛 IL-2培养上清.本方法避免了传统~3H-胸腺嘧啶核苷(TdR)掺入法的诸多不便,是一种方便、敏感、可靠和安全的牛IL-2检测法. | 于康震 李节棠 郑永辉 卢景良 | 1991 | 中国畜禽传染病1991，，3： | 13 |
| 14 | 鸡传染性支气管炎病毒S1基因免疫对鸡的保护作用显示文摘将鸡传染性支气管炎病毒肾型 T 株 S1 基因c D N A 连接于pc D N A3 的 Hind I I I与 Ba m H I位点之间构建含有 C M V 启动子及 B G Hpoly A 信号序列的鸡传染性支气管炎病毒 S1 蛋白真核表达质粒。实验证明, S P F 鸡肌注免疫后血清 Ig G 抗体逐渐升高,至第35 日龄左右达到高峰,攻毒后血清 Ig G 抗体先下降而后升高,血清 Ig G 抗体升高幅度不及 I B 油苗免疫组。质粒 D N A 免疫鸡攻毒后有40 % 的鸡可耐过强毒的攻击,说明 S1 基因在体内获得了表达并使鸡产生了一定的免疫力。 | 陈洪岩 江国托 杨奇伟 陈奖励 张宝山 刘胜旺 卢景良 | 1999 | 中国预防兽医学报1999，21，4： | 12 |
| 15 | 间接免疫荧光抗体法对鸡传染性支气管炎病毒进行抗原定位显示文摘应用间接免疫荧光抗体(IFA)法对IBV感染后SPF鸡不同脏器进行了跟踪检测。结果发现,在IBV感染后的第7天,在气管、肾脏、脾脏、肺脏和肝脏等组织细胞中均不同程度地出现特异性的荧光。表明在感染的初期,IBV具有广泛的组织嗜性;在感染的第10天,只有肾脏、气管或肺脏中呈现荧光,而以肾脏中的荧光最强,特异性荧光持续时间最长的是肾脏,可达14天,病毒存在于肾小管间质内浸润的淋巴细胞和巨噬细胞胞浆中。实验结果证实,IFA方法具有直观、特异等特点,在抗原定位上具有独特的优点。 | 刘思国 尹训南 李广兴 康丽娟 江国托 孔宪刚 刘忠贵 卢景良 | 2000 | 中国预防兽医学报2000，22，S1： | 12 |
| 16 | 鸡传染性支气管炎病毒核蛋白基因重组真核表达载体的构建显示文摘将已经序列测定的鸡传染性支气管炎病毒 ( IBV) HB株的核蛋白基因亚克隆到表达载体 pc DNA3的Kpn 酶切位点 ,快速筛选鉴定出含有 HB核蛋白基因的重组质粒 ,经酶切、PCR及 Southern鉴定为正向插入了 HB核蛋白基因 ,将其命名为 pc DNA-N。对重组质粒进行大量扩增 ,应用聚乙二醇纯化后 ,对 SPF雏鸡进行了免疫攻毒试验 ,结果表明 ,IBV核蛋白在抗感染和抗致死方面具有一定的作用。 | 刘思国 康丽娟 江国托 孔宪刚 卢中冶 刘忠贵 卢景良 | 2001 | 中国兽医学报2001，21，1： | 12 |
| 17 | 嗜水气单胞菌HEC毒素基因的克隆及酶谱分析显示文摘嗜水气单胞菌HEC毒素是该菌重要的致病因子和保护性抗原。为了解其分子生物学特性,用SDS-蛋白酶K法提取了嗜水气单胞菌J-1株的染色体,经EcoRI酶切、琼脂糖凝胶电泳后作Southernblotting,用DIG标记的HEC毒素探针检测,其5.0kb的酶切片段呈阳性。回收该片段,与pUC19相连,转化大肠杆菌JM109。提取X-gal平板上白色菌落的质粒,经大小比较、EcoRI酶切分析及DIG标记HEC毒素核酸探针斑点杂交鉴定,获得pHEC11等含5.0kb目的DNA片段的重组质粒。pHEC11质粒经酶切、电泳,证实目的DNA片段中含有BamHI、SmaⅠ、PstⅠ及PvuⅡ等酶切位点,并绘制了其物理图谱。同时还构建了若干亚克隆,为研制嗜水气单胞菌基因工程苗提供了目的基因片段。 | 陈怀青 陆承平 袁世山 于康震 卢景良 | 1997 | 中国兽医学报1997，17，4： | 12 |
| 18 | 旋毛虫ES抗原特异性蛋白两个结构基因的序列分析及重组质粒的构建显示文摘目的:获取旋毛虫ES抗原的结构基因,对其鉴定和克隆,并研制旋毛虫基因重组抗原。方法:先用反转录PCR技术获取目的基因,经序列测定和酶切分析后,再用重组DNA技术分别将目的基因与融合表达载体pEX31C、pEX31B及表达载体pBV220连接,评价在大肠杆菌中的表达效果和鉴定表达产物的特异性。结果:获得了编码ES抗原特异性蛋白成分的两个结构基因(0.7kb和0.95kb),其序列与文献报道的稍有差异。共构建3个重组质粒并在大肠杆菌中表达出相应分子量大小的重组蛋白,均能被猪旋毛虫病阳性血清所识别,但非融合蛋白的特异性强于融合蛋白。在相同条件下,融合蛋白的表达量高于非融合蛋白,而表达蛋白的分子量大小与表达水平呈负相关性。结论:在大肠杆菌中表达的3种重组蛋白是研制旋毛虫基因重组抗原的良好候选抗原蛋白。 | 阎玉河 许威光 陈辉 马增全 李春华 张洪权 朱元晓 卢景良 | 1996 | 中国寄生虫学与寄生虫病杂志1996，14，1： | 11 |
| 19 | 从血清中分离纯化鸡IgG、IgM的实用方法显示文摘本试验用绵羊红细胞免疫鸡 ,免疫后 5天采血 ,制备富集IgM血清。应用硫酸铵粗提、Sepharose_4B分子筛层析方法 ,从富集IgM的鸡血清一次性分离提取高纯度的IgM及纯度较高的IgG ,并经DEAE_5 2纤维素离子交换层析进一步纯化 ,获得电泳纯的IgG。经鉴定该方法制备的IgG ,IgM完全可以满足免疫学实验要求 ,从一份血清样品中同时纯化IgM、IgG两种免疫球蛋白 。 | 孙建宏 曹殿军 刘培欣 闫丽辉 卢景良 | 2000 | 中国预防兽医学报2000，22，5： | 11 |
| 20 | 传染性支气管炎病毒中国地方分离株RFLP基因分型的研究显示文摘为初步确定我国不同地区流行的传染性支气管炎病毒(IBV)的基因分型,对分离自国内8个不同地域疫区的IBVQD、GZ、ZZ、TJ、DL、YC、JS1和JS2及参考株M41、H52和T的S1基因RT-PCR扩增cDNA进行HaeⅢ的RFLP分析。结果,QD与MD41、H52同属Massachussete基因型,GZ、ZZ、YC与T的基因型相同,DL、JS1和JS2则表现为各自独立的基因型,而TJ则为DL和T2种基因型毒株的混合感染,表明我国的广大地域内存在着Mass基因型、T基因型和可能的变异株IBV的流行。 | 步志高 江国托 刘思国 王秀荣 康丽娟 祁贤 陈万芳 卢景良 | 1997 | 中国兽医学报1997，17，6： | 11 |
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