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| 1 | 响应面优化贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)菌株YH-18产芽孢培养基和培养条件显示文摘【目的】贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)菌株YH-18是优良的抗病促生微生物,其制成的微生物菌剂具有无害、高效、环保等特点。通过优化菌株YH-18的培养基组分和培养条件,提高发酵液中的有效活菌数,以期增加发酵液中的芽孢数,延长储存时间,降低发酵成本,提高其在工业化生产发酵中的质量效益。【方法】以贝莱斯芽孢杆菌(B.velezensis)菌株YH-18发酵液芽孢数为质量指标,采用单因素分析法对发酵液培养基(碳源、氮源、无机盐及其浓度)和培养条件(温度、转速、初始pH、装液量、接菌量)进行初步筛选。将初筛结果结合响应面试验设计[plackett-burman(PB)、最陡爬坡试验、box-behnken design(BBD)],筛选出对贝莱斯芽孢杆菌菌株YH-18产芽孢影响最为显著的因素进一步验证,建立各显著性因素的二次回归方程模型,完成对菌株YH-18培养基组分和培养条件的系统优化。对比优化前后发酵液产品的去菌体滤液对根癌农杆病菌(Agrobacterium tumefaciens)菌株C58生长的抑制效果。每隔4个月测定优化后发酵液中的活菌数和芽孢数,考察优化发酵液的货架期。【结果】单因素试验初步筛选后得到培养基组分为1.0%(质量分数,后同)玉米浆干粉、1.0%葡萄糖、0.4%碳酸钙、0.4%磷酸氢二钾、0.2%的硫酸镁,培养条件为装液量50 mL三角瓶的40%、摇床转速200 r/min、培养温度33℃、接菌量0.5%、初始pH 7.3。将单因素试验后的结果进行PB试验筛选得到玉米浆干粉质量分数、装液量和接菌量是影响发酵液芽孢数最显著的3个因素。最陡爬坡试验确定了响应面试验因素水平的中心点为0.8%玉米浆干粉、接菌量1.1%、装液量32%。BBD试验最终确定,培养基组分(质量分数)为0.83%玉米浆干粉、1.0%葡萄糖、0.4%碳酸钙、0.4%磷酸氢二钾、0.2%的硫酸镁,培养条件为装液量31.53%、摇床转速200 r/min、培养温度33℃、接菌量1.12%、初始pH 7.3时,可获得较高发酵液芽孢产量。在本优化体系下,发酵液产品的芽孢数可达3.25×109cfu/mL,较LB基础培养基芽孢数提高了9.48倍。菌株优化后发酵液产品的去菌体滤液对根癌农杆病菌菌株菌株C58的抑制能力较未优化的明显增强,能在前16 h使根癌农杆菌菌株C58基本不生长,且在48 h后仍有较好的抑制效果。在50 L发酵罐中使用优化配方发酵得到的发酵液产品储存1 a后有效活菌数和芽孢数仍然分别为初始值的87.50%和89.74%,原始发酵方法的发酵液产品在储存4个月后有效活菌数仅为初始值的0.06%。【结论】确定了贝莱斯芽孢杆菌菌株YH-18摇瓶发酵产芽孢的最适培养基和培养条件。优化后显著提高了发酵液芽孢数,增强了发酵液去菌体滤液的抑菌能力,延长了产品储存时间,降低了生产成本,为贝莱斯芽孢杆菌菌株YH-18未来的工业化生产和推广应用提供了重要的技术支持。 | 石慧敏 叶建仁 王焱 陆蓝翔 史纪武 | 2023 | 南京林业大学学报(自然科学版)2023，47，1： | 6 |
| 2 | 注干施用甲维盐防治松材线虫病的研究显示文摘以树干注射方式对黑松基部按地径施用不同剂量的甲维盐,利用高效液相色谱法测定注药90d后和2年后树体内甲维盐含量;在林间注药黑松上人工接种松材线虫,调查防治松材线虫病的效果。结果表明,注药90 d后,按松树地径2 mL/cm注药量的甲维盐可输导至树体注干点以上不同部位至枝干顶梢,注药2年后,在注干点以上不同部位仍能检测出甲维盐残留;接种松材线虫1.5年后,注入无菌水和助剂的对照松树全部感病死亡,按松树地径1 mL/cm和2 mL/cm注入甲维盐处理的防效分别为25.0%和91.7%。 | 李长强 叶建仁 张婉君 汤雨葳 史纪武 | 2022 | 中国植保导刊2022，42，3： | 6 |
| 3 | 短小芽孢杆菌HR10产孢培养基及发酵条件优化显示文摘短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)HR10是一株具有促生抗逆作用的优良菌株。探究菌株HR10产孢的最佳发酵培养条件,对于在更大规模上进行生产发酵具有重要的指导意义。以稀释涂布平板法计数活菌数和芽孢数并计算芽孢率;对菌株HR10产孢培养基的碳源、氮源和无机盐进行单因素分析及正交试验,并采用摇瓶发酵法对影响菌株HR10产孢的几种发酵因子进行单因素优化。结果显示,菌株HR10的产孢培养基最佳组成成分为葡萄糖1%、糖蜜1%、豆饼粉2%、KCl 0.3%、MnSO40.4%。最佳发酵条件为温度37℃、pH 7、250 mL三角瓶装液量50%、接种量5%、转速220r/min、培养时间52 h。芽孢数达到2.37×10^(10)cfu/mL,芽孢率达94.46%。相比初始培养基芽孢数提高了60.77倍,为其工业化生产提供参考。 | 王朝恩 刘婉慧 陆蓝翔 付欢欢 石慧敏 史纪武 叶建仁 | 2021 | 微生物学杂志2021，41，2： | 8 |
| 4 | 不同浓度的牛卵泡液对牛卵母细胞体外核成熟率的影响显示文摘通过添加不同浓度的牛卵泡液(bFF),探讨了bFF对牛卵母细胞体外核成熟率的影响;并筛选出bTCM-199(10%)培养体系与TCM-199培养体系进行核成熟效果的对比试验。结果表明:20%、30%bFF组处在GV期和MⅠ期卵母细胞比率极显著高于10%组(P<0.01),而卵母细胞核成熟(处于MⅡ期)率10%组显著高于20%和30%组(P<0.01);TCM-199培养体系与bTCM-199(10%)培养体系2组减数分裂各阶段卵母细胞比率基本一致,前者卵母细胞核成熟(处于MⅡ期)率与后者差异不显著(P>0.05)。与bTCM-199(10%)培养体系相比,TCM-199培养体系成分简单,是理想的牛卵母细胞体外成熟培养体系。 | 于进亮 董雅娟 柏学进 董方圆 赵兴 史文升 封纪武 曹雷 | 2007 | 安徽农业科学2007，35，17： | 5 |
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