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| 1 | 有序PLCL电纺膜复合人诱导多能干细胞来源心肌细胞构建心肌补片的初步研究显示文摘目的探索应用有序PLCL电纺膜复合人诱导多能干细胞来源心肌细胞构建心肌补片的可行性。方法采用静电纺丝装置制备有序PLCL电纺膜,以扫描电镜观察其表面结构,以拉伸试验测定其机械强度。在该材料上种植人诱导多能干细胞来源的心肌细胞,评估其对心肌细胞分化的影响。将电纺膜移植到大鼠心脏表面观察电纺膜体内生物相容性。结果扫描电镜显示,电纺膜表面纤维有序排列。拉伸试验显示,在干燥和湿润情况下电纺膜都具有良好机械性能。细胞试验显示,有序PLCL电纺膜对心肌细胞具有引导作用,在形态上能够促进心肌细胞向更加成熟方向分化,且细胞能高表达成熟相关标志物连接蛋白CX43。体内试验提示,电纺膜可操作性高,具有良好的生物相容性。结论有序PLCL电纺膜具有有序排列的表面微结构、合适的力学性能,在体内外均具有良好的生物相容性,未来有望用于构建组织工程心肌补片,以治疗心肌损伤。 | 谭瑶 颜冰倩 艾雪峰 宫艺其 王会景 陈颖 刘明璐 徐徐 王伟 付炜 | 2020 | 组织工程与重建外科杂志2020，16，6： | 6 |
| 2 | 麻黄碱及阿托品对人诱导多能干细胞来源心肌细胞动作电位的影响显示文摘目的探讨麻黄碱及阿托品对人诱导多能干细胞来源心肌细胞动作电位的影响,为人诱导多能干细胞来源心肌细胞的临床应用提供依据。方法利用免疫荧光鉴定人诱导多能干细胞多能性,并利用CHIR99021及IWP-2小分子在体外将其分化为心肌细胞。利用免疫荧光及膜片钳对获得的心肌细胞进行形态学及电生理鉴定。随后通过灌流系统添加500μmol/L麻黄碱及100μmol/L阿托品,并用膜片钳记录动作电位的变化。结果人诱导多能干细胞高表达多能性标志物oct4、sox2、nanog及tra-1-60。分化得到的心肌细胞高表达ctnt、α-actinin、mlc2v等心肌特异性标志物,同时具有自发节律的动作电位。麻黄碱及阿托品能够显著加快自发动作电位的频率,但对动作电位去极化幅度、最大去极化速率及90%动作电位时程无明显影响。结论麻黄碱及阿托品能够加快人诱导多能干细胞来源心肌细胞自发动作电位的频率,证明其具有良好的药物反应性。 | 宫艺其 杨礼 艾雪峰 颜冰倩 谭瑶 王会景 徐徐 付炜 王伟 | 2020 | 组织工程与重建外科杂志2020，16，2： | 4 |
| 3 | 静电纺有序rGO/PLCL支架对hiPSC-CPC心肌分化影响的初步研究显示文摘目的探索静电纺丝技术制备的有序rGO/PLCL支架对hiPSC-CPC心肌分化的影响。方法采用静电纺丝技术制备有序rGO/PLCL支架。使用扫描电镜观察支架表面结构;通过拉伸试验测定材料机械性能;利用XRD测定支架成分;通过电阻率测定评估支架导电性;种植hiPSC-CPC评估该材料对心肌分化、增殖、形态的影响;通过qPCR、RNA-seq探索rGO对hiPSC-CPC心肌分化基因水平的影响。结果扫描电镜显示,支架材料表面纤维有序排列。拉伸试验显示,在干燥和湿润情况下支架都具有良好机械性能,rGO的加入增加了支架材料的应变能力。XRD验证了rGO/PLCL的成分组成。电阻率测定提示rGO的加入显著增加了支架的导电性。细胞试验显示支架对细胞具有引导作用,rGO的添加使更多的心肌细胞趋于成熟细胞形态,rGO的加入对细胞增殖无明显影响。qPCR结果提示rGO的加入上调了肌节成熟相关基因cTNT、MYH7/MYH6以及细胞间通信相关的连接蛋白CX43的表达。RNA-seq检测提示rGO主要通过下调与细胞外空间、细胞外区域、钙离子结合、细胞外基质组成和排列、细胞黏附等相关基因的表达来影响细胞分化。结论有序rGO/PLCL支架具有有序排列的表面微结构、合适的力学性能以及良好的导电性和生物相容性,能够引导细胞排列,有利于改善hiPSC-CPC分化形成的心肌细胞的形态,以及促进肌节成熟相关基因的表达。 | 谭瑶 颜冰倩 艾雪峰 宫艺其 王会景 陈颖 刘明璐 徐徐 王伟 付炜 | 2021 | 组织工程与重建外科2021，17，1： | 3 |
| 4 | 氯化铯增加人诱导多能干细胞来源心肌细胞自发动作电位的节律性显示文摘目的探讨氯化铯对人诱导多能干细胞来源心肌细胞自发动作电位以及起搏电流的影响。方法利用CHIR99021和IWP-2小分子在体外将人诱导多能干细胞分化为心肌细胞。通过免疫荧光和动作电位测定对转化心肌细胞进行形态学和电生理鉴定。利用膜片钳系统记录氯化铯对培养60 d人诱导多能干细胞来源心肌细胞自发动作电位及起搏电流的影响。结果免疫荧光显示人诱导多能干细胞来源心肌细胞高表达心肌肌钙蛋白T(cardiac troponin T,cTnT)心肌标志物,电生理鉴定提示其具有自发动作电位,2 mM氯化铯增快自发动作电位的频率(P=0.003,n=5)。2 mM氯化铯提高动作电位的静息电位(P<0.001,n=5),提高动作电位的阈电位(P<0.001,n=5),降低动作电位的振幅(P=0.002,n=5),缩短动作电位复极90%(APD90)的时间(P<0.001,n=5)。2 mM氯化铯抑制人诱导多能干细胞来源心肌细胞起搏电流的平台期电流以及尾电流有统计学意义(P<0.05,n=5)。结论氯化铯增加人诱导多能干细胞来源心肌细胞自发动作电位的自发节律性,并抑制其起搏电流。 | 杨礼 宫艺其 吴蕾 张侃 付炜 王伟 郑吉建 朱明 | 2020 | 老年医学与保健2020，26，5： | 2 |
| 5 | 艾司洛尔对人诱导多能干细胞来源心肌细胞自发动作电位的影响显示文摘目的探讨艾司洛尔对人诱导多能干细胞来源心肌细胞(hiPSC-CM)自发动作电位的影响。方法选择培养60 d的hiPSC-CM,提取单个心肌细胞,应用膜片钳技术建立全细胞记录模式。采用动作电位细胞外液或起搏电流细胞外液将艾司洛尔稀释至100μmol/L,灌流速度3 ml/min,灌流量10 ml。分别于给药前(T_0)、给药后5 min(T_1)和冲洗后5 min(T_2)时记录自发动作电位的频率、静息电位、阈电位、振幅、90%复极时间、超极化电位、超极化后复极时间和起搏电流。结果与T_0时比较,T_1时hiPSC-CM自发动作电位的频率升高,振幅和超极化电位降低,90%复极时间和超极化后复极时间缩短(P<0.05),hiPSC-CM起搏电流-钳制电压曲线无明显移位(P>0.05)。与T_1时比较,T_2时hiPSC-CM自发动作电位的频率降低,振幅和超极化电位升高,90%复极时间和超极化后复极时间延长(P<0.05),hiPSC-CM起搏电流-钳制电压曲线无明显移位(P>0.05)。不同时点hiPSC-CM自发动作电位的静息电位和阈电位比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论艾司洛尔可增加hiPSC-CM的自发动作电位节律,其机制可能与起搏电流无关。 | 杨礼 宫艺其 吴蕾 张侃 付炜 王伟 郑吉建 | 2020 | 中华麻醉学杂志2020，40，10： | 2 |
| 6 | 脂质体方法用于modRNA转染各种类型细胞的初步研究显示文摘目的筛选更优的脂质体转染试剂,探讨其用于modRNA转染各种类型细胞并表达所需目的蛋白的可行性。方法分别用RNAiMax及MessageMax将modGFP转染入MEF细胞,应用荧光显微镜、流式细胞分析仪检测并比较两种转染试剂的转染效率和蛋白表达效果。将更优的转染试剂用于modGFP转染其他各种类型细胞的实验中,采用同样的方法分析modGFP的转染效率及蛋白表达情况。将modGFP与modmCherry共转MEF细胞,荧光显微镜观察共转的情况。将modnGFP及modmTBX5转染MEF细胞,荧光显微镜观察核内蛋白的表达情况。结果MEF细胞转染modGFP 24 h后,流式分析发现MessageMax的转染效率为(83.33%±3.23%),略高于RNAiMax的(78.77%±6.12%),两者没有统计学差异,但是流式分析和荧光显微镜观察均表明MessageMax转染后1周内的蛋白翻译表达效率更高,是更高效的modRNA转染试剂。MessageMax能将modGFP高效转染入3T3细胞、Hela细胞及MCF-7细胞中,并实现modGFP和modmCherry在MEF细胞中的共转及核内因子nGFP和mTBX5在MEF细胞核中的定位。结论相比于RNAiMax,MessageMax转染modRNA效果更佳,既能实现包括核内蛋白在内的各种目的蛋白在各类细胞中的高效、快速表达,也能实现多因子同时转染、共同表达。 | 颜冰倩 王会景 艾雪峰 宫艺其 谭瑶 徐徐 王伟 付炜 | 2019 | 组织工程与重建外科杂志2019，15，6： | 1 |
| 7 | 儿童心脏移植后住院时间延长对预后影响的研究显示文摘目的探究导致儿童心脏移植后住院时间延长(PLOS)的危险因素及PLOS对患儿预后的影响。方法回顾性分析国际器官移植数据库2003至2017年间的4 953例儿童心脏移植病例的临床数据,PLOS定义为术后住院≥60 d。用多因素Logistic模型分析术后PLOS发生的相关因素,用Kaplan-Meier曲线比较术后是否PLOS对生存率的影响。用Cox回归模型确定影响PLOS组术后1年生存率的独立预测因素。结果 PLOS组移植后的生存率显著低于非PLOS组的患儿,其中移植后前6个月的死亡率最高。PLOS的发生和多个因素独立相关,其中先天性心脏病、术后透析和再次心脏手术不仅是术后PLOS发生的独立危险因素,还是PLOS患儿术后1年死亡率增加的独立危险因素。结论多个因素影响儿童心脏移植后PLOS的发生,进而导致移植预后不佳。 | 颜冰倩 王会景 艾雪峰 宫艺其 谭瑶 徐徐 王伟 付炜 | 2020 | 中国体外循环杂志2020，18，3： | 1 |
| 8 | 采用Accutase酶分离适合膜片钳记录的人诱导多能干细胞来源心肌细胞及其电生理学特性分析显示文摘目的 采用Accutase酶分离适合膜片钳记录的人诱导多能干细胞来源心肌细胞,并对其电生理学特性进行分析。方法 将人诱导多能干细胞在体外分化为心肌细胞。选择培养28~32天活性良好的心肌细胞,免疫细胞化学检测心肌细胞肌钙蛋白(cTNT)和肌动蛋白(α-actin)表达,膜片钳全细胞技术记录人诱导多能干细胞来源心肌细胞的动作电位。记录动作电位前采用Accutase酶将人诱导多能干细胞来源心肌细胞消化成单个心肌细胞,依据消化时间不同随机分为A、B、C、D、E组,各组消化时间依次为0.5、1、2、5及10 min,每组分别记录5~6个来自不同培养皿的细胞自发动作电位。对自发动作电位的频率、静息电位、阈电位、振幅、最大去极化速率、复极时间、超极化电位和最大自动除极速率进行分析。结果 免疫荧光显示人诱导多能干细胞来源心肌细胞高表达心肌特异性标志物cTnT和α-actin;细胞消化前,肉眼下可见人诱导多能干细胞来源心肌细胞有自发跳动;各组细胞全细胞记录模式建立前的巨阻封接形成时间随着消化时间延长逐渐缩短[(4.80±1.10) min、(2.10±0.55) min、(2.20±0.84) min、(2.30±0.45) min、(0.75±0.27) min,P<0.01]。各组间建立全细胞记录模式的细胞膜电容和串联电阻无差异。消化后膜片钳全细胞模式记录显示人诱导多能干细胞来源心肌细胞有自发动作电位,并有明显平台期,随着消化时间延长,平台期逐渐缩短[各组90%复极时间依次为:(0.77±0.02) s、(0.78±0.06) s、(0.65±0.03) s、(0.45±0.01) s、(0.35±0.03) s,P<0.01]。结论 采用Accutase酶对人诱导多能干细胞来源心肌细胞进行分离有助于膜片钳记录。相比其他消化时间,Accutase酶消化1 min记录人诱导多能干细胞来源心肌细胞动作电位相对省时,同时可获得最佳动作电位形态。 | 邓玲玲 陈颖 宫艺其 付炜 王伟 郑吉建 张军 郑洁 杨礼 | 2022 | 中国心脏起搏与心电生理杂志2022，36，6： | 0 |
| 9 | 中国儿童体外膜肺氧合技术应用现状调查显示文摘目的了解中国儿童体外膜肺氧合(ECMO)技术开展情况及治疗结果。方法采用问卷调查的方式,对全国2017年6月30日之前在18岁以下儿童中ECMO使用情况进行调查。调查中将患者分为两个年龄段:新生儿和儿童;安装ECMO的原因包括心脏原因、呼吸原因和心肺复苏。问卷中各医院按不同年龄段、不同安装原因填写安装例数、撤离例数和成功出院例数,并了解各医院常规参加ECMO管理的临床科室数量。结果共回收43家三级医院所填写的问卷,其中开展儿童(含新生儿)ECMO技术的医院为30家,包括综合医院14家、心胸专科医院5家、儿童医院和妇儿医院11家。最早开展儿童ECMO技术的时间是2004年。至调查截止日,共开展儿童(含新生儿)ECMO共800例,其中儿童数量658例,明显多于新生儿的142例。儿童因心脏原因开展453例,撤离287例(63.4%),出院215例(47.5%);儿童因呼吸原因开展79例,撤离47例(59.5%),出院36例(45.6%);儿童因心肺复苏开展126例,撤离62例(49.2%),出院48例(38.1%)。新生儿因心脏原因开展79例,撤离39例(49.4%),出院26例(32.9%);新生儿因呼吸原因开展40例,撤离26例(65.0%),出院21例(52.5%);新生儿因心肺复苏开展23例,撤离10例(43.5%),出院6例(26.1%)。开展ECMO技术的30家医院中,常规参与ECMO的临床科室为(4.03±1.87)个。结论国内儿童ECMO技术开展虽晚,但已经有一定的病例数积累,虽然临床结果同国际水平仍有一定的差距,但各医院已初步形成ECMO团队。 | 宫艺其 艾雪峰 王伟 洪小杨 刘晋萍 周成斌 赵喆 林茹 贺骏 陈瑾 缪娜 赵宇东 黄国栋 | 2018 | 中华医学杂志2018，98，26： | 13 |
| 10 | 应用石墨烯改良PLCL/Gel纳米纱支架材料的可行性分析显示文摘目的探索应用石墨烯(Gr)改良聚-L-丙交酯-己内酯/明胶(PLCL/Gel)纳米纱支架材料的可行性。方法采用自制的静电纺丝装置分别制备PLCL-Gel和Gr-PLCL-Gel水纺纳米纱支架材料。使用体视显微镜、扫描电子显微镜观察支架材料形态结构;通过拉伸试验观察该材料机械强度;采用CCK-8实验评价支架生物相容性,并将支架植入大鼠皮下,观察细胞浸润情况。结果拉伸试验显示,加入石墨烯可明显提高支架的力学性能。两组支架都无明显细胞毒性,在体内外实验中均表现出良好的生物相容性,体内实验表明石墨烯在一定程度上减轻了炎症反应。结论应用石墨烯改良PLCL/Gel纳米纱支架材料,可以获得具有合适力学性能、亲水性、生物相容性的纳米纱支架材料,在组织工程皮肤等方面具有应用潜能。 | 艾雪峰 朱晶晶 颜冰倩 宫艺其 谭瑶 王会景 徐徐 付炜 莫秀梅 王伟 | 2020 | 组织工程与重建外科杂志2020，16，2： | 3 |
| 11 | Torin1、Nutlin-3a促进人诱导多能干细胞来源早期心肌细胞成熟的初步研究显示文摘目的探索Torin1、Nutlin-3a对促进人诱导多能干细胞来源早期心肌细胞成熟的影响。方法将Torin1和Nutlin-3a作用于3T3细胞,通过细胞免疫荧光、流式细胞分析技术等验证其抑制细胞增殖的效果;再将药物作用于人诱导多能干细胞来源的早期心肌细胞,利用Western blot检测心肌细胞成熟相关蛋白的表达情况;利用qRT-PCR检测心肌细胞成熟相关基因mRNA的表达情况;利用细胞免疫荧光染色观察心肌细胞的形态、肌节发育情况;利用膜片钳电生理技术评估心肌细胞动作电位的相关指标,包括频率、振幅、动作电位时程等,评价其成熟情况。结果细胞免疫荧光、流式细胞分析技术显示,Nutlin-3a和Torin1可以抑制3T3细胞的增殖,使细胞退出细胞周期。Western blot检测结果显示,Nutlin-3a组和Torin1组cTnT、cTnI蛋白表达量相比DMSO组有增高的趋势。qRT-PCR结果表明,Torin1处理后的心肌细胞增殖存在减少趋势,并且可能更多地以脂代谢为能量代谢方式,心肌特异性标志表达量增高提示心肌细胞内结构可能更加成熟。免疫荧光染色结果显示,与对照组相比,实验组细胞形态趋近长棒型,其中Torin1组心肌细胞肌节更加丰富,排列更加规整,更加接近成熟心肌细胞形态。膜片钳电生理实验结果分析显示,Torin1组和Nutlin-3a组振幅、最大去极化速率、动作电位平台期、APD30、APD70、APD90、阈电位绝对值相比对照组有增大的趋势,Torin1组和Nutlin-3a组动作电位频率相比对照组有减少的趋势,表明Torin1和Nutlin-3a处理人诱导多能干细胞来源的早期心肌细胞,可能促进心肌细胞动作电位成熟。结论用Torin1和Nutlin-3a处理人诱导多能干细胞来源的早期心肌细胞,可一定程度上改善细胞成熟的相关指标,mTOR信号通路可能是心肌细胞成熟的关键调控通路。 | 陈颖 杨礼 宫艺其 谭瑶 王会景 刘明璐 卢婷婷 罗润娇 王伟 付炜 | 2021 | 组织工程与重建外科2021，17，6： | 2 |
| 12 | p53 modRNA促进人诱导多能干细胞来源早期心肌细胞分化成熟的初步研究显示文摘目的探索p53 modRNA对促进人诱导多能干细胞来源早期心肌细胞分化成熟的影响。方法将p53 modRNA转染至人诱导多能干细胞来源的早期心肌细胞,利用qRT-PCR检测心肌细胞成熟相关基因mRNA的表达情况;利用Western blot检测心肌细胞成熟相关蛋白的表达情况;利用细胞免疫荧光染色观察心肌细胞的形态、肌节发育情况。结果qRT-PCR结果表明,p53 modRNA处理过后的心肌细胞增殖相关基因表达减少,脂代谢基因表达水平增高,且心肌特异性基因表达量增高,提示心肌细胞内结构可能更加成熟。Western blot结果显示,转染组cTnI蛋白表达量相比未转染组有增高趋势。免疫荧光染色结果显示,与未转染组相比,转染组细胞形态趋近长棒型,心肌细胞肌节排列更加整齐且数量丰富,更接近成熟心肌细胞形态。结论用p53 modRNA处理人诱导多能干细胞来源的早期心肌细胞,可一定程度上改善细胞成熟的相关指标。 | 陈颖 杨礼 宫艺其 谭瑶 王会景 刘明璐 卢婷婷 罗润娇 王伟 付炜 | 2022 | 组织工程与重建外科2022，18，2： | 1 |
| 13 | 中国儿科心脏围手术期体外生命支持技术开展情况显示文摘目的总结中国大陆地区(不包括港澳台)在儿童心脏直视手术围术期开展体外生命支持(ECLS)技术的情况。方法采用问卷方式,调查全国儿童心内直视手术心肺转流(体外循环)年手术量超过300例的医院在2017年6月30日前儿童心脏直视手术围术期开展ECLS技术的情况。结果共有43家国内开展儿童心内直视手术的主要医院参与本次问卷调查。其中有30家已开展儿童心脏直视手术围术期的ECLS技术,共使用体外膜肺氧合(ECMO)技术457例,其中儿童(29 d^18岁)ECMO 375例(不包括心脏移植),成功撤离229例(61%),成功出院166例(44%);新生儿(1~28 d)实施ECMO 77例(不包括心脏移植),成功撤离37例(48%),成功出院25例(32%),ECMO存活率低于儿童,但无明显差异;儿童心脏移植后实施ECMO 5例,成功撤离4例(80%),成功出院4例(80%)。使用心室辅助装置(VAD)进行治疗的患儿共39例,其中使用左心室辅助装置(LVAD)治疗的患儿38例,右心室辅助装置(RVAD)1例。结论我国儿童心脏直视手术围术期应用ECLS技术已有十几年,但地区间、各医院的差异仍较明显,发展水平不均衡。ECLS虽成功率接近国际水平,但总体技术水平与国际相比仍有差距。 | 艾雪峰 宫艺其 洪小杨 王伟 刘晋萍 周成斌 章晓华 赵喆 陈瑾 缪娜 林茹 卢婷 贺骏 黄国栋 | 2018 | 中国体外循环杂志2018，16，1： | 9 |
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