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| 1 | 中国禽流感流行株的分离鉴定显示文摘分别从广东、四川、新疆等地禽流感(AI)血检阳性、发病率高、产蛋率下降的鸡群中采集186份病料,先后分离到6株A型流感病毒。这些分离株可在鸡胚中传代,可凝集鸡红细胞,血凝价达160~1280倍。不被新城疫、减蛋综合症、败血支原体阳性血清所抑制。用这些分离毒株制成琼脂扩散(AGP)抗原与禽流感标准阳性血清可出现白色沉淀线。分别将分离毒株与AI标准分型血清H1~H14、N1~N9进行HI、NI试验,结果川和川农株均为H4N6,西昌1和2株及Sh株均为H9N2,新疆石河子(石)株为H14N5。分离株分别做脑内接种致病指数(ICPI)、静脉接种致病指数(IVPI)测定,结果所有分离株ICPI介于024~148之间,IVPI介于015~056之间.通过电镜观察,可见直径为80~120nm球状或杆状典型的禽流感病毒.经联机检索,从新疆石河子AI阳性鸡场产蛋下降的鸡群中分离出的H14N5株为国内外首次从鸡中分离出的H14亚型禽流感病毒。将某单位送检的禽流感鹅体分离株(G1株和G2株)做了血清型和毒力测定,试验结果认定,G1和G2株均为A型禽流感病毒H5N1亚型,G1、G2株对鸡均达到高致病力毒株标准。 | 唐秀英 田国斌 赵传删 周金法 于康震 | 1998 | 中国畜禽传染病1998，20，1： | 130 |
| 2 | 禽流感与养禽业发展和人类健康显示文摘 | 于康震 崔尚金 付朝阳 唐秀英 | 2000 | 中国预防兽医学报2000，22，4： | 102 |
| 3 | 我国禽流感防制研究进展显示文摘 | 于康震 付朝阳 崔尚金 步志高 唐秀英 | 2001 | 中国兽医学报2001，21，1： | 109 |
| 4 | 中国猪源H5N1和H9N2亚型流感病毒的分离鉴定显示文摘猪是禽流感病毒'禽_猪_人'传播链中重要的中间宿主,了解猪流感的疫情动态将为动物流感及人流感的疾病预测及防制提供重要依据。1999~2001年间进行的血清学和病毒学监测发现我国猪群存在大范围的H1和H3亚型猪流感感染(李海燕等,2002)。2002~2003年,我们进一步对来自全国14个省市的1936份血清进行了H9亚型猪流感的检测,同时在广东、福建等省进行了H5亚型猪流感的检测。2002年辽宁、广东、山东及重庆猪血清中出现H9亚型流感抗体,阳性率分别为7.3%、6.8%、5.1%和1.6%。2003年采集的猪血清H9亚型流感抗体均为阴性,同时发现广东、福建两省2003年出现H5亚型流感阳性猪群,阳性率分别为4.7%和8.2%。从2001~2003年收集和送检的样品中分离鉴定了6株H9N2亚型和2株H5N1亚型猪流感病毒,部分序列分析发现H9和H5亚型猪流感病毒均与我国分离的禽流感病毒高度同源。本研究进一步确证了我国猪群中存在H9N2亚型流感病毒,并且首次发现我国猪群已出现H5N1亚型流感病毒,为人类流感及动物流感的防制敲响了警钟。对这两个亚型流感病毒所具有的公共卫生和兽医公共卫生危害性应予以高度重视。 | 李海燕 于康震 杨焕良 辛晓光 陈君彦 赵朴 毕英佐 陈化兰 | 2004 | 中国预防兽医学报2004，26，1： | 106 |
| 5 | 部分省市猪群猪流感的血清学调查及猪流感病毒的分离与鉴定显示文摘对黑龙江、吉林、辽宁、安徽、山东、内蒙、河南、河北、江苏、安徽、浙江、湖北、福建、广东、海南、上海等省、市猪群进行了猪流感的血清学和病原学调查研究。从 130 6份猪鼻棉拭子样品和死亡猪肺、气管样品中分离到 39株H3N2亚型猪流感病毒 ,12株 H1亚型猪流感病毒及其它亚型猪流感病毒 ,病毒粒子在透射电镜下呈现典型的正粘病毒特征 ,有囊膜和纤突 ,多为椭圆形、圆形、或杆形 ,直径约 80~ 12 0 nm。对 1997- 2 0 0 1年 3895份猪血清的血清学调查结果表明 ,近年中国多个地区猪群存在抗SWTN77(H1)、SWCO77(H3)、DKAT6 9(H1)、TKUK6 3(H3)流感病毒抗体 ;1998年来自河北的猪血清中抗 SWTN77阳性率高达 33.3% ;1999年来自内蒙的猪血清中抗 TKUK6 3和SWCO77阳性率分别为 13.3%和 2 6 .7% ;2 0 0 0- 2 0 0 1年调查的所有省市的猪群中均存在抗SWCO77抗体 ,阳性率从 3.2 %~ 10 0 %。说明近年我国猪群中 | 李海燕 于康震 辛晓光 李雁冰 蔡雪辉 杨焕良 毕英佐 王自振 | 2003 | 动物医学进展2003，24，3： | 118 |
| 6 | '97香港禽流感显示文摘’97香港禽流感于康震陈化兰唐秀英(中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室,哈尔滨150001)’97香港禽流感以“杀人”为特征,令全世界哗然,被美国新闻机构评为1997年世界三大科技新闻之一,国际科技界也予以极大关注,面临新的挑战... | 于康震 陈化兰 唐秀英 | 1998 | 中国畜禽传染病1998，20，3： | 68 |
| 7 | 猪流感病毒的分离鉴定显示文摘用SPF鸡胚从我国东北地区猪群中分离出 3株H3 N2 猪流感病毒 (SIV) ,分别命名为A/Swine/Heilongjiang/ 1/ 2 0 0 0、A/Swine/Heilogjiang/ 2 / 2 0 0 0和A/Swine/Heilogjiang/ 3/ 2 0 0 0。SIV分离株第 8代病毒液对 0 .5 %豚鼠红血球的血凝价分别为2 0 48log2 、2 0 48log2 、40 96log2 ;将其制成琼扩 (AGP)抗原与禽流感标准阳性血清均出现清晰白色沉淀线 ;与流感病毒H3 亚型标准阳性血清的血凝抑制 (HI)价分别为 8log2 、7log2 、7log2 ,但不能被鸡新城疫阳性血清抑制。这 3株SIV都为热不稳定型 ;均能凝集驴、绵羊、鸡、兔、豚鼠、小鼠、大鼠、人O型血红血球 ,对马、牛红血球均不凝集 ;感染一个病毒最小致死量的鸡胚平均死亡时间分别为 86 .4、12 9.6和 91.2小时 ;每 0 .2ml病毒液鸡胚半数感染量分别为 4.75lg、4.5lg、和 6 .0lg ;对鸡的静脉内接种致病指数和脑内接种致病指数各为 0 .5 6、0 .32、0 .5 2和 0 .77、0 .38、0 .5 2 ;对小鼠的半数致死量分别为 2 .6lg、2 .0lg和 2 .5lg ;试验感染小鼠、豚鼠和猪均可发病并出现死亡。存活动物接种后第 6天和第 14天的血清 ,其HI价均在 8log2 以上 ,而AGP均为阴性。 | 李海燕 李雁冰 于康震 毕英佐 辛晓光 秦运安 谷守林 冯菊艳 唐秀英 李维义 | 2002 | 中国预防兽医学报2002，24，1： | 61 |
| 8 | 禽流感RT-PCR诊断法的建立显示文摘根据禽流感病毒(AIV)A/Chicken/Breslin/1902(H7N7)株的血凝素(HA)基因参考序列设计合成一对H7HA特异引物,并应用SDS-蛋白酶K法提取病毒RNA,建立了逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测AIVRNA的方法。应用此法对鸡胚培养的AIV尿囊液、SPF感染鸡粪便进行了检测,并与琼脂扩散试验和电镜技术作了对比。特异性试验以新城疫病毒(NDV)、传染性法氏囊病病毒(IBDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、减蛋综合征病毒(EDS-76V)等的感染鸡胚尿囊液作为对照。结果表明,AIV尿囊液RT-PCR全部阳性,SPF感染鸡粪便87份,RT-PCR检出69份阳性,样品处理浓缩后琼脂扩散检出11份,电镜检测了23份样品,仅检出2份阳性。非特异性对照样品经RT-PCR检测全部阴性。将AIV感染鸡胚尿囊液作10倍系列连续稀释,可检出稀释度为10-2的病毒尿囊液。RT-PCR最早检出时间为感染后第3天,而琼扩和电镜均是7天。该法具有高度的特异性和灵敏性,且节约时间(只需8小时左右)。 | 崔尚金 陈化兰 唐秀英 邓国华 田国斌 于康震 | 1998 | 中国畜禽传染病1998，20，2： | 54 |
| 9 | DNA免疫诱导鸡对禽流感病毒的免疫保护反应显示文摘为研究DNA疫苗对禽流感病毒(AIV)的保护作用,将禽流感病毒A/Afri.Star./Eng-Q/983/79(H7N1)株血凝素基因cDNA置于SV40启动子和增强子下游,构建了HA基因表达质粒pSVH7。以此质粒肌注免疫3周龄SPF鸡,免疫后第4周用100倍最小鸡胚感染量的HA基因同源病毒人工感染,1周后用棉拭子取样进行泄殖腔病毒分离。免疫后每周及攻毒后第1、2周采血,微量血凝抑制法检测抗体。病毒分离阴性结果:100μg/只组为6/6,10μg/只组为4/6,1μg/只组为5/8,空白对照组为0/6。攻毒后1周相对应的4组血凝抑制价依次为:1∶32~64,1∶16~64,1∶4~64,1∶4~16,表明所构建的H7亚型HA基因表达质粒可诱导鸡产生有效的免疫保护反应。 | 陈化兰 于康震 田国滨 唐秀英 卢景良 | 1998 | 中国农业科学1998，31，5： | 55 |
| 10 | 禽肺病毒的分离鉴定显示文摘禽肺病毒(APV)于1978年首次发现于南非,可引起火鸡鼻气管炎和鸡肿头综合症,至今未见其在中国存在的报道。我们从黑龙江省某肉种鸡场患肿头综合症的鸡中分离到了1株病毒。经鉴定,该病毒分离株缺乏血凝活性,具有典型的副粘病毒形态特征,可诱导特异性抗APV抗体的产生。因此可认定该病毒为1个APV分离株(命名为APV/Chicken/China/1/98)。 | 沈瑞忠 曲立新 于康震 李建伟 张建林 谷守林 徐宜为 唐桂运 | 1999 | 中国预防兽医学报1999，21，1： | 54 |
| 11 | 禽流感病毒重组核蛋白ELISA诊断技术的研究显示文摘用表达禽流感病毒 (AIV)核蛋白基因的杆状病毒感染Sf9昆虫细胞 ,以其表达产物制备抗原 ,建立了以杆状病毒系统表达的AIV核蛋白为抗原的禽流感间接酶联免疫吸附试验诊断技术 (rNP_ELISA)。其抗原最适包被量为 0 .6 μg/孔 ,待检血清最适稀释度为 1:2 0 0 ,酶标抗体使用浓度为 1:10 0 0。根据对 140份SPF鸡血清检测结果的统计分析 ,确定其判定标准为OD值大于 0 .15的血清样品为阳性。用rNP_ELISA检测 15 0份SPF鸡血清、194份非免疫鸡血清及 30份其它 15种鸡疫病阳性血清均为阴性 ;检测A型AIV15个不同亚型 (H1~H15 )毒株的特异性血清均为阳性 ;对人工接种AIV的SPF鸡第 3天即能检出抗体 ,到第 16 2天试验结束时检测仍为阳性。其批内和批间重复试验的变异系数分别在 2 .9%~ 7.2 %和 3 .4%~ 9.8%之间。对3138份鸡血清进行监测 ,rNP_ELISA与全病毒间接ELISA(AIV_ELISA)、琼脂扩散试验 (AGP)及血凝抑制试验 (HI)的符合率分别为 99.9%、97.1%、98.8% ;并能 10 0 %检出AGP阳性及疑似、HI阳性的血清样品。试验证明 ,rNP_ELISA是检测A型禽流感病毒血清特异性抗体的一种特异、敏感、微量、快速。 | 李海燕 于康震 辛晓光 邓国华 | 2000 | 中国预防兽医学报2000，22，3： | 56 |
| 12 | 间接酶联免疫吸附试验检测禽流感抗体的最佳工作条件显示文摘禽流感病毒(AIV)感染的鸡胚尿囊液经差速离心后,再经蔗糖密度梯度离心,提纯AIV,纯化的AIV经NP40处理并反复冻融,即为AIELISA抗原,用该抗原包被聚苯乙烯微量反应板。将健康鸡IgG提纯后免疫兔,制备兔抗鸡IgG,用过碘酸钠法制备辣根过氧化物酶标记的兔抗鸡IgG。确立了间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测禽流感抗体的最适工作条件,即:抗原包被浓度1.9~3.8μg/ml,每孔100μl,4℃冰箱过夜;用含0.5%牛血清白蛋白(BSA)的磷酸盐缓冲液,37℃封闭60分钟;待检血清最佳稀释度为180~1640,作用60分钟;酶标抗体作12000稀释,作用60分钟。根据对52份SPF鸡血清的检测结果制定了判定标准。 | 李海燕 辛晓光 田国斌 张晶 于康震 | 1998 | 中国畜禽传染病1998，20，4： | 46 |
| 13 | 禽流感油乳剂灭活疫苗的研究显示文摘将6种不同亚型的禽流感病毒(AIVH2N9、H3N8、H5N1、H5N2、H7N1、H9N2)分别接种鸡胚,收获尿囊液,经甲醛灭活,以矿物油为佐剂制成油乳剂灭活疫苗。疫苗接种4和8周龄SPF鸡,注苗后均无不良反应。每种亚型疫苗免疫后14天和21天攻毒保护率均达90%-100%。分别用H5N1和H9N2亚型灭活疫苗免疫8周龄SPF鸡、25和28周龄健康商品蛋鸡,免疫后7天产生免疫力,14天保护率达100%,21天后抗体达高峰,仔鸡接苗后最高血凝抑制(HI)几何平均滴度(GMT)为7.3-8.0log2,蛋鸡为8.0-10.5log2。免疫后180天,抗体效价不低于6.5log2。免疫后180天分别以AIV攻击,H5亚型疫苗组,用强毒攻击无一发病和死亡,对照鸡全部发病死亡;H9亚型疫苗组,对照鸡在攻毒后72小时停产,免疫鸡无一发病且产蛋正常,对同源攻毒的保护率达100%。 | 唐秀英 田国斌 于康震 冯菊艳 | 1999 | 中国预防兽医学报1999，21，6： | 46 |
| 14 | 百合地黄汤治疗更年期抑郁症的临床疗效及对神经内分泌系统的影响显示文摘目的:探讨百合地黄汤治疗更年期抑郁症的临床疗效及对神经内分泌系统的影响。方法:将86例更年期抑郁症患者随机分为两组,每组43例,对照组予氟哌噻吨美利曲辛片治疗,治疗组在其基础上予百合地黄汤治疗,观察比较两组的临床疗效、汉密尔顿抑郁量表(HAMD)评分、匹兹堡睡眠质量评分及神经内分泌系统的改善情况(5-HT、NE、E_2、FSH、LH)等指标。结果:治疗组临床总有效率为90.7%,明显高于对照组的81.4%,提示治疗组汉密尔顿抑郁评分(HAMD)及匹兹堡睡眠质量评分均优于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);疗程结束,两组血清5-HT和NE水平较治疗前均显著升高,而治疗组升高幅度较对照组更显著,差异有统计学意义(P<0.05);两组血清E_2水平均较治疗前升高(P<0.05),FSH及LH水平较治疗前下降(P<0.05),组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:百合地黄汤治疗更年期抑郁症临床疗效确定,可有效提高患者睡眠质量,通过调节神经内分泌系统来缓解临床不适症状。 | 郭利红 姚华强 康震 | 2016 | 中医药导报2016，22，8： | 42 |
| 15 | 在DNA芯片平台上探测AIV不同亚型cDNA显示文摘对以基因芯片技术为基础的检测H5、H7、H9亚型禽流感病毒的快速诊断技术进行了研究。试验中所使用的病毒为A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)、A/African starling/983/79(H7N1)和 A/Turkey/Wisconsin/1/66(H9N2)。通过RT-PCR获得大约500 bp的禽流感病毒基因cDNAs片段,克隆,从重组质粒扩增DNA片段,并点到玻璃载体上,制成芯片。在病毒RNA反转录过程中,用Cy5标记样品 cDNAs。样品 cDNAs是一个包括禽流感病毒HA和M基因的混合物。依据M基因鉴别型,依据HA基因鉴别亚型。扫描芯片上探针结合位点,杂交信号与预期设想基本一致。结果显示,DNA芯片技术可以提供一种有效的AIV诊断方法。 | 王秀荣 邓国华 于康震 石锐 刘丽玲 乔传玲 陈化兰 孔宪刚 | 2005 | 中国农业科学2005，38，2： | 32 |
| 16 | 一株鹅源高致病力禽流感病毒分离株血凝素基因的分析显示文摘禽流感病毒(AIV)的表面结构蛋白血凝素(HA)在决定病毒致病力、受体结合特性、宿主范围等方面起着关键作用。本研究对初步鉴定为高致病力毒株的AIV鹅体分离株A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)的HA基因进行了克隆并测序。结果表明,这一在无胰酶条件下可在单层鸡胚成纤维细胞培养物上形成蚀斑的毒株在其HA裂解位点附近有连续6个碱性氨基酸的插入物,从而揭示了其高致病力的分子基础。进一步的序列比较发现这一毒株与1997年香港流感病毒A/Hongkong/156/97(HK/97)的HA基因核苷酸和氨基酸同源率分别高达98.0%和98.2%,且其6个糖基化位点、2个受体结合位点及裂解位点碱性氨基酸插入物的序列均完全一致,提示该毒株与HK/97具有相似的生物学特性。 | 陈化兰 于康震 步志高 | 1999 | 中国农业科学1999，32，2： | 31 |
| 17 | 禽流感抗体斑点-ELISA诊断技术的研究显示文摘以混合纤维素酯微孔滤膜为固相载体,用自制的禽流感全病毒抗原和酶标抗体,建立了禽流感抗体斑点 E L I S A 检测法,其抗原最适包被量为 0.06μg/点;血清抗体最佳稀释度为 1100;酶标抗体作 1200 稀释;出现明显清晰的斑点者判为禽流感抗体阳性。该方法对 S P F鸡血清及新城疫、传染性法氏囊病等其它 11 种鸡疫病阳性血清均为阴性,对不同亚型特异性的禽流感病毒( A I V)分型血清、琼扩( A G P)阳性血清及血凝抑制( H I)阳性而 A G P疑似的血清样品均呈阳性;对人工接种 A I V 的 S P F鸡第 3 天即能检出抗体阳性,第 5~117 天可全部检出。与间接 E L I S A 法比较,不仅其特异性、敏感性、重复性相一致,而且结果可用肉眼判定,更适合现地禽流感抗体监测及流行病学调查。 | 李海燕 辛晓光 田国斌 张晶 于康震 | 1999 | 中国预防兽医学报1999，21，5： | 34 |
| 18 | 禽流感病毒分离株A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)全基因克隆及序列分析显示文摘本研究用无特定病原体 (SPF)鸡胚增殖禽流感病毒鹅体分离株A/Goose/Guangdong/1/96 (H5N1) (GD1/96 ) ,提取病毒基因组总RNA ,运用反转录_聚合酶链反应 (RT_PCR)技术分别扩增该病毒分离株的 8个基因片段的cDNA ,分别克隆后进行序列测定。序列分析结果表明 ,所扩增到的 8个片段均包含相应的病毒基因的完整开放阅读框架。GD1/96株与 1997年香港禽流感事件中的 4株香港流感病毒分离株 (分别来自人、鸡、鸭和鹅 )的HA基因的高度同源性说明它们可能起源于同一种系 ,但NS基因的差异说明它们分属于不同的基因群系。GD1/96株与香港流感病毒分离株的核苷酸和推导的氨基酸序列的同源性较低 ( 6 3.9%~ 98.1%) ,而香港流感病毒分离株之间的核苷酸和氨基酸序列的同源性很高 ( 96 .5 %~ 10 0 %) ,且香港各流感病毒分离株的NA均缺失 5 7个核苷酸 ( 19个氨基酸 )残基。因此 ,内地H5N1分离株GD1/96与 | 张建林 于康震 陈化兰 唐秀英 田国斌 | 2000 | 中国预防兽医学报2000，22，3： | 32 |
| 19 | 表达载体pCAGGS显著增强禽流感DNA疫苗的免疫保护效果显示文摘目的将A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)[GD/1/96(H5N1)]的HA基因插入鸡β-actin启动子高效真核表达载体pCAGGS,构建了DNA疫苗质粒pCAGGHA5,以提高H5亚型禽流感DNA疫苗的表达水平和免疫保护效果。方法将pCAGGHA5和表达GD/1/96(H5N1)HA基因的质粒pCIHA5通过间接免疫荧光法和Western-blot分析检测转染293T细胞后瞬时表达的HA抗原蛋白,随之将pCAGGHA5及pCIHA5分别以100μg和10μg剂量一次免疫3周龄SPF鸡,4周后用100LD50的HPAIVGD/1/96(H5N1)鼻腔途径进行攻击。结果间接免疫荧光法和Western-blot分析表明2种表达质粒均可正确表达H5亚型HA抗原蛋白,载体pCAGGS表达水平显著高于载体pCI;免疫SPF鸡后,100μgpCAGGHA5可形成5/5的免疫保护,100μgpCIHA5可形成2/4的免疫保护,10μgpCAGGHA5可形成对免疫鸡5/5的免疫保护,而10μgpCIHA5则基本不能形成免疫保护,pCAGGHA5诱导的HI抗体水平远远高于pCIHA5。结论鸡β-actin启动子表达载体pCAGGS可显著提高HA基因体外表达水平和H5亚型禽流感DNA疫苗诱导的保护性抗体免疫反应水平,增强免疫保护效果。 | 姜永萍 张洪波 步志高 李呈军 赵有淑 王秀荣 于康震 陈化兰 | 2006 | 中国农业科学2006，39，4： | 29 |
| 20 | 禽流感病毒及其分子生物学研究进展显示文摘 | 陈化兰 于康震 | 1997 | 国外兽医学(畜禽传染病)1997，17，1： | 30 |
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