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| 1 | 大鼠睾丸支持细胞的分离、纯化和鉴定显示文摘目的 培养高纯度的大鼠睾丸支持细胞,并应用检测ABP mRNA原位杂交方法加以鉴定。方法 选用18~22d龄SD雄性大鼠睾丸,采用0.25%胰蛋白酶、0.1%透明质酸酶、0.1%胶原酶三酶依次消化法分离支持细胞,置于32℃5%CO2的培养箱培养,48h后用20mmol/L Tris—HCl低渗处理培养细胞。培养1周后应用伊红染色、吖啶橙荧光染色、Feulgen染色对所培养的支持细胞进行鉴定,同时应用原位杂交检测ABP mRNA方法鉴定分离培养的支持细胞。结果 培养1周后所获培养的支持细胞纯度达95%以上。分离培养的支持细胞ABP mRNA表达阳性,其形态结构特征与用其他方法鉴定为支持细胞的形态结构特征一致。结论 采用三酶连续消化及低渗处理法分离培养的支持细胞纯度高,而且应用原位杂交方法检测ABP mRNA是一种新的、特异、有效的鉴定支持细朐及萁功能的方法. | 黄东晖 赵虎 田永红 熊承良 王玲 | 2007 | 解剖学报2007，38，2： | 20 |
| 2 | 一种获得高纯度睾丸支持细胞的分离方法显示文摘背景:研究证实睾丸支持细胞具有免疫抑制功能,可以被用于在睾丸以外的部位为移植细胞提供免疫豁免环境。最近的研究还表明支持细胞分泌的多种活性物质对其他细胞有促进作用。但至今其分离纯化方法还不完整,且细胞纯度不太理想。目的:探讨一种获取高纯度睾丸支持细胞的方法。方法:迅速分离出生后20d雄性SD大鼠睾丸生精小管,采用酶消化法将细胞悬液接种于多聚赖氨酸包被的培养板内培养7d后,采用Tris-HCL低渗缓冲液处理生精细胞和成纤维细胞,采用FasL免疫组织化学、Hoechst33342复染鉴定睾丸支持细胞的纯度。结果与结论:支持细胞贴壁性比较强,培养24h后,大多数细胞开始贴壁,细胞形状呈圆形或椭圆形,培养液中漂浮着较多生精细胞。培养48h后,胞质逐渐增多,折光性减弱。三四天后支持细胞胞质铺展,细胞间隙变小。4~6d后胞质完全铺开,细胞相互连接,铺展成膜状单层。此时,质核比为(7~9)∶1,细胞为多边形,其形态和胞质面积不再改变;睾丸支持细胞的纯度为(95.64±2.76)%。结果证明该方法是一种相对简便易行且经济﹑稳定﹑有效的睾丸支持细胞分离方法。 | 麦海星 陈立军 曲楠 赵立 黄晨 王亚林 李学超 | 2010 | 中国组织工程研究与临床康复2010，14，31： | 8 |
| 3 | Protection of human islets from induction of apoptosis and improved islet function with HO-1 gene transduction显示文摘Background Islet transplantation represents an ideal therapeutic approach for treatment of type 1 diabetes but islet function and regeneration may be influenced by necrosis or apoptosis induced by oxidative stress and other insults. Heme oxygenase-1 (HO-1) is the rate-limiting enzyme in the catabolism of heme into biliverdin, releasing free iron and carbon monoxide. It has also been reported to be an antioxidant enzyme which can improve the function of grafted islets by cytoprotection via free radical scavenging and apoptosis prevention. In the present study, we investigated whether transduction of HO-1 genes into human islets with an adenovirus vector has cytoprotective action on islets cultured in vitro and discuss this method of gene therapy for clinical islet transplantation. Methods Cadaveric pancreatic islets were isolated and purified in vitro. Transduction efficiency of islets was determined by infecting islets with adenovirus vector containing the enhanced green fluorescent protein gene (Ad-EGFP) at multiplicities of infection (MOI) of 2, 5, 10, or 20. Newly isolated islets were divided into three groups: EGFP group, islets transduced with Ad-EGFP using MOI=20; HO-1 group, transduced with adenovirus vectors containing the human HO-1 gene using MOI=20; and control group, mock transduced islets. Insulin release after glucose stimulation of the cell lines was determined by a radioimmunoassay kit and the stimulation index was calculated. Flow cytometry was used to detect apoptotic cells in the HO-1 group and in the control group after induction by recombinant human tumor necrosis factor-α (rTNFα) and cycloheximide (CHX) for 48 hours. Results Adenovirus vectors have a high efficiency of gene transduction into adult islet cells. Transduction of islets with the Ad-EGFP was most successful at MOI 20, at which MOI fluorescence was very intense on day 7 after transduction and EGFP was expressed in cultured islet cells for more than four weeks in vitro. The insulin release in the control group was (182.36±58.96) mIU/L after stimulation by high glucose media (16.7 mmol/L),while insulin release from the HO-1 group and the EGFP group were (270.09±89.37) mIU/L and (175.95±75.05) mIU/L respectively. Compared to the control group and the EGFP group, insulin release in the HO-1 group increased significantly (P<0.05). After treatment with rTNFα and CHX the apoptotic ratio of islet cells was (63.09± 10.86)% in the HO-1 group, significantly lower than (90.86 ± 11.25)% in the control group (P<0.05). Conclusions Transduction of human islets with Ad-HO-1 can protect against TNF-α and CHX mediated cytotoxicity. The HO-1 gene also appears to facilitate insulin release from human islets. Transduction of donor islets with the adenovirus vector containing an HO-1 gene might have potential value in clinical islet transplantation. | LI Yong-xiang LI Ge DONG Wei-ping LU Da-ru TAN Jian-ming | 2006 | Chinese Medical Journal2006，，19： | 8 |
| 4 | 成人睾丸支持细胞分离方法的建立及在胰岛移植中的应用显示文摘目的:建立成人睾丸支持细胞简便高效分离方法,并应用于胰岛移植。方法:A组采用胰蛋白酶、DNA酶、胶原酶、透明质酸酶一步消化法;B组采用胰蛋白酶和DNA酶第一步消化,胶原酶和透明质酸酶第二步消化;C组采用胰蛋白酶和DNA酶第一步消化,透明质酸酶第二步消化,胶原酶第三步消化。采用形态学观察和免疫组化鉴定支持细胞;MTT法和流式细胞术(FCM)测定3组支持细胞的活性和纯度;Western blot检测3组支持细胞Fas-L的表达;比较3组支持细胞与胰岛共移植至糖尿病鼠的效果。结果:经鉴定,分离的细胞具有支持细胞的特征;方法A和B分离的支持细胞数量较多,方法B和C分离的支持细胞杂质较少;MTT法检测结果显示,B组支持细胞活性显著高于A组和C组(P<0.05);Western blot结果显示,B组支持细胞Fas-L的表达水平显著高于A组和C组(P<0.05);FCM检测3种方法分离的S支持细胞纯度分别为(85.2±1.8)%、(92.3±2.5)%、(93.1±2.6)%,B组和C组的支持细胞纯度显著高于A组(P<0.05);将3组支持细胞与胰岛共移植至糖尿病鼠模型肾包膜下,B组胰岛移植物存活时间显著高于单独胰岛移植组和A、C两组(P<0.05)。结论:采用两步消化法能够获得纯度和活性较高的支持细胞,其与胰岛共移植能够显著延长移植物存活。 | 李杨 薛武军 宋焕瑾 冯新顺 田晓辉 丁小明 宋勇 丁晨光 | 2010 | 细胞与分子免疫学杂志2010，26，6： | 6 |
| 5 | 人参皂甙Rb1和Rg1对小鼠睾丸支持细胞增殖的影响显示文摘观察人参皂甙Rb1(ginsenoside Rb1,GRb1)和Rg1(ginsenoside Rg1,GRg1)对体外培养的小鼠睾丸支持细胞(sertoli cell)增殖的影响,探讨二者的药理作用机制.取原代培养传代一次第3天的支持细胞,加入不同浓度的GRb1和GRg1,利用MTT比色分析法和BrdU增殖细胞标记法,检测不同浓度GRb1和GRg1对体外培养支持细胞增殖的影响.结果显示,20 mg/L GRb1对支持细胞增殖有明显促进作用,而不同浓度的GRg1对支持细胞的增殖无明显影响.GRb1能维持小鼠支持细胞的存活,并在适当浓度范围内可以明显促进支持细胞的增殖,而GRg1对支持细胞的增殖无明显影响. | 郭淑华 | 2009 | 河北师范大学学报(自然科学版)2009，33，2： | 4 |
| 6 | 大鼠睾丸支持细胞体外培养及FSH对其增殖的影响显示文摘为探索睾丸支持细胞体外纯化培养的方法,并观察不同水平FSH对支持细胞增殖能力的影响,本研究采用胶原酶Ⅰ和胰蛋白酶序贯两步消化法和低渗处理法分离、纯化睾丸支持细胞,Fas-L免疫荧光法对纯化后的支持细胞进行鉴定。取培养第2代第2天已完全贴壁的支持细胞,在其培养液中添加不同浓度FSH,培养16 h后,MTT法检测FSH对支持细胞增殖能力的影响。结果表明,该方法培养的支持细胞纯度高,且FSH的添加可显著促进支持细胞的增殖(P<0.01),为支持细胞高效制备提供可行性。 | 李玉荣 白瑜 尹晓敏 周向梅 韩利方 赵德明 | 2008 | 河北农业大学学报2008，31，3： | 3 |
| 7 | 小鼠睾丸支持细胞的分离培养与生物学研究显示文摘[目的]分离得到高纯度的小鼠睾丸支持细胞(Sertoli cell),用以研究它对精原干细胞(SSCs)生长的影响。[方法]取鼠龄3~7d的雄性ICR小鼠睾丸,采用胶原酶、透明质酸酶、胰蛋白酶和DNA酶消化分离Sertoli细胞及SSCs,经多次差异离心贴壁及低渗处理法进行纯化,用Sertoli细胞作饲养层观察SSCs的生长情况。[结果]Sertoli细胞纯度达90%,且以Sertoli细胞作饲养层培养SSCs,与对照相比,能明显促进sscs的增殖。[结论]四酶消化低渗处理法可获得高纯度的Sertoli细胞,且Serto]i细胞能明显促进SSCs的增殖。 | 刘慧莲 | 2008 | 安徽农业科学2008，36，3： | 2 |
| 8 | 瘦素(leptin)对ECV-304细胞氧化应激的保护作用显示文摘目的:研究外源性瘦素(leptin)在细胞氧化应激中对细胞存活率的影响,探讨leptin在抗氧化应激方面的作用。方法:利用H2O2诱导人脐静脉内皮细胞系ECV-304细胞建立细胞氧化应激模型,设立正常对照、单纯损伤和不同浓度leptin干预组,每组7例,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率;比色法测定细胞上清液中丙二醛(MDA)和乳酸脱氢酶(LDH)的含量。结果:与正常对照组相比,加入外源性leptin的三组正常ECV-304细胞存活率无显著变化,但25μg/Lleptin组有升高的趋势,100μg/Lleptin组有降低的趋势。与单纯损伤组相比,加入外源性leptin的三组损伤ECV-304细胞存活率显著升高(P均<0.05)。与单纯损伤组相比,加入外源性leptin的三组ECV-304细胞上清液中MDA生成量和LDH释放量显著下降(P均<0.05)。结论:leptin对ECV-304细胞的氧化应激具有剂量依赖性的保护作用。 | 荣飞 颜光涛 林季 徐小玉 薛辉 平帅 | 2007 | 放射免疫学杂志2007，20，5： | 2 |
| 9 | 醋酸铅对大鼠睾丸支持细胞活性及抑制素B mRNA水平的影响显示文摘目的:观察醋酸铅对体外培养大鼠睾丸支持细胞活性和抑制素B(INHB)mRNA水平的影响。方法:建立大鼠睾丸支持细胞体外培养模型,分别给予不同浓度(0、10-8、10-7、10-6和10-5mol/L)的醋酸铅处理细胞,培养24h后采用MTT法测定细胞活性;同法分组,采用RT-PCR检测INH B mRNA的表达。结果:各组细胞活性比较,差异无统计学意义(F=2.451,P=0.064);各组细胞INH B mRNA的相对表达量比较,差异有统计学意义(F=9984.370,P<0.001),醋酸铅浓度在10-8和10-7mol/L时,睾丸支持细胞细胞INH B mRNA的表达水平低于对照组(P<0.05)。结论:醋酸铅对大鼠睾丸支持细胞可能有毒性作用。 | 苏晓东 李春阳 高慧艳 赵士光 陈小玉 | 2010 | 郑州大学学报(医学版)2010，45，3： | 1 |
| 10 | GDNF对小鼠睾丸支持细胞增殖的影响显示文摘探讨胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrphic factor,GDNF)对小鼠睾丸支持细胞(sertoli cell)增殖的影响.对5-10 d的昆明小鼠睾丸Sertoli细胞进行分离培养,利用MTT法检测不同质量浓度GDNF(5,10,20,50μg/L)对Sertoli细胞增殖的影响,流式细胞仪测定DNA含量、分析细胞生长周期的变化.结果表明:5,10μg/L GDNF对Sertoli细胞的增殖有促进作用(p〈0.05),20μg/L GDNF对Sertoli细胞增殖有明显促进作用(p〈0.01);流式细胞仪检测表明GDNF促进了Sertoli细胞由G0期进入S期和G2期,细胞增殖指数(PI)增加,S期细胞指数(SPF)增加.说明GDNF对体外培养的Sertoli细胞具有促进增殖的作用. | 刘慧莲 | 2008 | 河北师范大学学报(自然科学版)2008，32，3： | 1 |
| 11 | 不同方法分离的成人睾丸支持细胞与胰岛共移植的效果对比显示文摘目的比较成人睾丸支持(Sertoli)细胞不同分离方法的效果,建立成人Sertoli细胞简便高效的分离方法。方法将质量相等的睾丸组织按照不同分离方法随机分为3组:A组采用胰蛋白酶、DNA酶、胶原酶和透明质酸酶一步消化法;B组采用胰蛋白酶和DNA酶第一步消化,胶原酶和透明质酸酶第二步消化;C组采用胰蛋白酶和DNA酶第一步消化,透明质酸酶第二步消化,胶原酶第三步消化;D组为对照组。采用形态学观察和免疫组化鉴定Sertoli细胞;MTT法和流式细胞仪法测定3组Sertoli细胞的活性和纯度;应用生存分析方法比较3组Sertoli细胞与胰岛共移植至糖尿病鼠的效果。结果分离获得的细胞经形态学和免疫组化鉴定,具有Sertoli细胞的特征,A、B、C三组Sertoli细胞的纯度分别为(85.17±1.8)﹪、(92.33±2.5)﹪和(93.12±2.6)﹪,B组和C组的Sertoli细胞纯度显著高于A组(t=7.35,t=7.95,P=0.00,P=0.00)。B组Sertoli细胞活性于培养14d时达到峰值,此后缓慢下降。B组Sertoli细胞活性显著高于A组和C组(t=4.02,t=2.77,P=0.00,P=0.01),且B组Sertoli细胞与胰岛共移植术后胰岛移植物存活时间显著高于A、C、D组(F=165.548,P=0.000)。结论采用两步消化的方法能够获得纯度和活性较高的Sertoli细胞,其与胰岛共移植能够显著延长移植物存活。 | 李杨 薛武军 田晓辉 宋焕瑾 宋勇 丁小明 冯新顺 丁晨光 | 2011 | 中华细胞与干细胞杂志(电子版)2011，1，2： | 0 |
| 12 | 睾丸sertoli细胞免疫抑制及营养作用的研究进展显示文摘睾丸支持细胞(sertoli cell,SC)的结构首先由意大利组织学家Enricol sertoli在1865年进行了描述,多年以来,SC作为生精细胞的支架,为生精细胞提供免疫屏障及营养支持的作用已经得到人们的认可,随着免疫学及分子生物学的不断深入研究,各种免疫特殊组织,如睾丸、眼前房、脑、胎盘滋养层等,受到人们的广泛关注,特别是近代人们通过对凋亡机制和各种信号传导通路的研究,加深了对SC细胞特殊免疫状态及营养作用在分子水平的认识,最近研究发现SC免疫豁免的功能和营养作用可应用与某些细胞的培养与移植,SC可以延长某些移植物的存活时间及功能状态,同时SC还可以和某些细胞在体外共培养,改善细胞的生存状态和功能。 | 辛民志 宋纯 段秀庆 | 2012 | 医学研究杂志2012，41，9： | 0 |
| 13 | 人参皂甙Rb1对体外培养的小鼠支持细胞增殖作用的研究显示文摘观察人参皂甙Rb1(ginsenoside Rb1,GRb1)对体外培养的小鼠支持细胞增殖能力的影响,探讨其促进精子发生的作用机制.采用多次贴壁法纯化原代培养的支持细胞,取体外培养第2代第3天的支持细胞,利用MTT比色分析法和Brdu增殖细胞标记法,检测不同质量浓度GRb1对体外培养支持细胞增殖的影响.20 mg/LGRb1对支持细胞增殖有明显促进作用.GRb1能维持小鼠支持细胞的存活,并在适当质量浓度范围内可以明显促进支持细胞的增殖,从而为进一步探讨GRb1的药理作用及精子发生的机理提供一些研究基础. | 刘慧莲 | 2007 | 河北师范大学学报(自然科学版)2007，31，1： | 0 |
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