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| 1 | 人肾小管上皮细胞血清饥饿法同步化方法的研究显示文摘目的:探讨采用血清饥饿法建立将人肾小管上皮细胞(HKC)的同步化方法。方法:将HKC分为6个不同低血清浓度组及对照组,分别采用胎牛血清浓度为0、1、2、3、4、5和100 mL/L的DMEM培养液培养24 h。根据流式细胞术结果选择的最佳同步化HKC的胎牛血清浓度。将HKC的同步化处理时间分别延长为24 h、48 h和72 h,选择最佳同步化时间。用MTT法绘制生长曲线观察血清饥饿处理对HKC生长的影响。采用免疫细胞化学方法验证血清饥饿同步化处理HKC的效果。结果:选择无血清(0 mL/L)和1 mL/L为HKC最佳同步化的胎牛血清浓度,选择48 h为HKC同步化最佳时间。细胞生长曲线表明采用1 mL/L胎牛血清的DMEM培养液培养48 h后恢复正常培养的HKC细胞,其生长曲线更接近于正常培养的细胞。Brdu进一步证明,用1 mL/L胎牛血清的DMEM培养液培养48 h可以使90%以上的HKC细胞处于G0/G1期。结论:用1 mL/L胎牛血清的DMEM培养液培养48 h可获得90%以上的G0/G1期HKC。 | 何丽洁 王汉民 杨桂涛 陈光磊 陈威 杨东 刘宏宝 白淑蓉 沈青 | 2007 | 细胞与分子免疫学杂志2007，23，3： | 11 |
| 2 | 自然流产胚胎组织中人类纺锤体有丝分裂俘获缺陷基因的表达及意义显示文摘目的 探讨自然流产胚胎组织中人类纺锤体有丝分裂俘获缺陷(hsMAD)2基因的表达,以及hsMAD2基因表达降低与染色体数目异常的相关性。方法 采集2006年3月至2007年3月重庆医科大学附属第一、第二医院妇产科自然流产患者的胚胎组织标本33份,其中流产1次者23份,流产2次及以上者10份;同时采集人工流产患者的胚胎组织标本35份。采用FQ-PCR和蛋白印迹法检测自然流产和人工流产胚胎组织中hsMAD2基因的mRNA和蛋白表达水平;原代培养人工流产胚胎组织并经染色体分析筛选出5例具有正常核型的胚胎细胞,构建hsMAD2基因的短发夹RNA(shRNA)表达载体,转染筛选出来的胚胎细胞以抑制其内源性hsMAD2基因的表达,将细胞分为实验1组(转染重组干扰质粒pshRNA-hsMAD2-1)、实验2组(转染pshRNA-hsMAD2-2)、实验3组(转染pshRNA-hsMAD2-3)、对照1组(未做任何处理)、对照2组(转染pTZU6+1干扰质粒空载体)、无关对照组(转染pshRNA-N1)。用蛋白印迹法和定量PCR技术评价shRNA的干扰效果,四甲基偶氮唑蓝比色法测定胚胎细胞增殖抑制率,流式细胞技术检测胚胎细胞周期的分布,并计算染色体数目的变化。结果 (1)自然流产1次者、自然流产2次及以上者、人工流产者的胚胎组织中hsMAD2基因mRNA的表达量分别为0.00879±0.00035、0.00901±0.00033、0.00941±0.00026,3者分别比较,差异均无统计学意义(P〉0.05);hsMAD2蛋白的表达量分别为0.2791±0.0311、0.0431±0.0020、0.5790±0.0331,3者分别比较,差异均有统计学意义(P〈0.05)。(2)shRNA的重组质粒表达载体能明显抑制胚胎细胞中hsMAD2基因的表达,转染有效干扰质粒后,实验1组胚胎细胞的增殖抑制率为54%,分别与对照1组(4%)、对照2组(3%)比较,差异均有统计学意义(P〈0.05);G2/M期细胞比例实验1组为17.9%,与对照1组(8.2%)、对照2组(8.0%)比较均明显升高,差异均有统计学意义(P〈0.05);实验1组染色体异常率平均值为30.0%,与对照1组(4.8%)比较,差异有统计学意义(P〈0.01)。结论 hsMAD2基因的表达下调可能是导致患者染色体数目异常、胚胎发育异常乃至自然流产发生的重要原因之一。 | 蔡燕 王箭 袁泰先 施琼 翁亚光 王应雄 蒋洪彦 刘子杰 | 2008 | 中华妇产科杂志2008，43，5： | 1 |
| 3 | RNA干扰技术抑制人内皮细胞非肌肉肌球蛋白重链ⅡA(MYH9)表达的研究显示文摘目的:构建人MYH9(非肌肉肌球蛋白重链ⅡA)的siRNA表达体系,抑制原代人脐静脉内皮细胞(HUVEC)MYH9基因的表达。方法:针对人MYH9基因序列,构建siRNA表达质粒,通过酶切和测序鉴定确定其序列正确性。分别转染重组质粒pGCsi-MYH9-1/2/3至HUVEC细胞,通过半定量RT-PCR和蛋白质印迹,分别检测在转染后24h、48h、72h MYH9在mRNA转录水平及蛋白表达的变化。结果:在构建的3种重组质粒中,pGCsi-MYH9-2、pGCsi-MYH9-3在转染后24h均表现出一定的干扰作用,转染后48h干扰作用最强,转染后72h干扰作用减弱;pGCsi-MYH9-3的干扰作用最明显,转染后48h,能明显下调HUVEC的MYH9蛋白表达,抑制率平均可达71.2%,此时MYH9基因mRNA转录明显减少,抑制率为86.5%。结论:在转染后48h pGCsi-MYH9-3可明显抑制HUVEC细胞内源MYH9的表达,为进一步研究MYH9在相关疾病中的功能奠定基础。 | 黄娅琳 寇俊萍 宋佳希 余伯阳 | 2008 | 细胞与分子免疫学杂志2008，24，12： | 0 |
| 4 | RNA干扰技术及其在胃癌基因治疗中的应用进展显示文摘RNA干扰(RNAi)是指生物体内由双链RNA(dsRNA)介导同源mRNA的特异性降解,从而导致基因沉默的现象。目前,随着RNA干扰分子机制研究的不断深入,RNAi技术已广泛用于各种肿瘤的研究,尤其在胃癌治疗中的研究取得了重要进展,具有潜在、广阔的应用前景。 | 丁莺 吕宾 | 2008 | 国际消化病杂志2008，28，5： | 0 |
| 5 | MAD2基因沉默促进人食管鳞癌细胞系KYSE30细胞增殖和侵袭能力的实验研究显示文摘背景与目的:有丝分裂检测点缺陷可引起细胞染色体不稳定性而使细胞生物学行为改变,本实验探讨RNA干扰有丝分裂阻滞缺陷蛋白2(mitotic arrest deficient2,MAD2)基因表达对人食管鳞癌细胞系KYSE30细胞增殖和侵袭能力的影响。方法:利用脂质体转染的方法,将MAD2基因的siRNA转染食管鳞癌细胞KYSE30,并通过RT-PCR以及免疫印迹的方法进行siRNA效果鉴定。实验分为正常对照组、非特异干扰组、特异干扰组。MTT、克隆形成实验检测细胞增殖活性的变化,损伤刮擦实验和Transwell小室实验分别检测转染细胞株的迁移与侵袭能力。结果:siRNA作用48h组,MAD2蛋白的表达最低;相应地,迁移黏附能力增强,侵袭实验显示转染后细胞侵袭能力较转染前有显著加强。结论:MAD2基因沉默能够促进人食管鳞癌细胞系KYSE30的体外增殖和侵袭能力增强,并抑制凋亡,提示其变化对肿瘤的发生和转移发挥重要作用。 | 王莉 王如文 蒋耀光 秦叔逵 梁树辉 龚太乾 赵云平 谭群友 郭伟 范小青 | 2011 | 中国癌症杂志2011，21，7： | 0 |
| 6 | RNA干扰研究现状及其在胃癌诊治中的应用前景显示文摘中国是世界上胃癌的高发病区,其死亡率居我国恶性肿瘤之首。目前对胃癌主要采取手术为主、内镜下治疗及化疗、放疗等为辅的综合疗法。尽管由于内镜技术的发展,极大提高了早期胃癌的检出率和治愈率,但对于进展期胃癌来说,其预后仍然较差。因此,如何提高疗效、改善预后是胃癌研究的焦点。RNA干扰技术自问世以来,因其独特的原理和相比于其他基因治疗策略的优越性而被迅速应用于胃癌相关基因功能检测和基因治疗的研究中。 | 洪瑜 季峰 | 2007 | 浙江医学2007，29，9： | 0 |
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