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| 1 | 血清CA125对子宫内膜癌患者病理分期及组织学类型的影响显示文摘目的探讨血清糖蛋白抗原125(CA125)对子宫内膜癌患者的诊疗价值。方法随机选取2013年1月至2015年12月入本院行子宫内膜癌手术治疗的患者347例,根据临床分期分为三组:早期组(Ⅰ期)、中期组(Ⅱ期、Ⅲ期)、晚期组(Ⅳ期);提前一周对所有患者随机访问并取静脉血,实验室采用国际癌症协会推荐的免疫发光法进行检测血清CA125浓度;检测其与病理分期、病理分级和组织学类型的关系。结果不同病理分期的CA125阳性者间的阳性率差异有统计学意义(P<0.05),手术病理分期越晚,子宫内膜癌患者的阳性率越高;不同肌层浸润深度患者的CA125阳性率差异有统计学意义(P<0.05),肌层浸润深度>1/2与<1/2的阳性率分别为68.2%、45.2%,CA125的阳性率随肌肤浸润深度增加;病理分期和组织学类型可以影响子宫内膜癌患者血清CA125阳性率,其差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析显示,血清CA125阳性率与病理分级、组织学类型、肌层浸润深度和临床分期均有相关性(P<0.05)。结论患者手术前检测血清CA125对判定其临床分期、病理分级和组织学的类型有重要意义,对判断子宫内膜癌患者的病情有帮助。 | 李海鹏 | 2017 | 热带医学杂志2017，17，6： | 8 |
| 2 | Estrogen deficiency reversibly induces telomere shortening in mouse granulosa cells and ovarian aging in vivo显示文摘Estrogen is implicated as playing an important role in aging and tumorigenesis of estrogen responsive tissues;however the mechanisms underlying the mitogenic actions of estrogen are not fully understood.Here we report that estrogen deficiency in mice caused by targeted disruption of the aromatase gene results in a signi-ficant inhibition of telomerase maintenance of telomeres in mouse ovaries in a tissue-specific manner.The inhibition entails a significant shortening of telomeres and compromised proliferation in the follicular granulosa cell compartment of ovary.Gene expression analysis showed decreased levels of proto-oncogene c-Myc and the telomerase catalytic subunit,telomerase reverse transcriptase(TERT),in response to estrogen deficiency.Estrogen replacement therapy led to increases in TERT gene expression,telomerase activity,telomere length and ovarian tissue growth,thereby reinstating ovary development to normal in four weeks.Our data demonstrate for the first time that telomere maintenance is the primary mechanism mediating the mitogenic effect of estrogen on ovarian granulosa cell proliferation by upregulating the genes of c-Myc and TERT in vivo.Estrogen deficiency or over-activity may cause ovarian tissue aging or tumorigenesis,respectively,through estrogen regulation of telomere remodeling. | Sharyn Bayne He Li Margaret E.E.Jones Alex R.Pinto Michelle van Sinderen Ann Drummond Evan R.Simpson Jun-Ping Liu | 2011 | Protein & Cell2011，2，4： | 8 |
| 3 | LRPl6基因抑制IRS-1信号通路和过氧化物酶体增殖物激活受体γ转录活性导致C2-C12成肌细胞胰岛素抵抗显示文摘目的 探讨人白血病相关蛋白16(LRPl6)基因对C2-C12成肌细胞胰岛素抵抗的影响及机制.方法 构建过表达LRP16、抑制表达LRP16的细胞系和相应的对照细胞系.检测LRP16基因对C2-C12成肌细胞葡萄糖摄取率,胰岛素受体底物1(IRS-1)丝氨酸和酪氨酸磷酸化,磷脂酰肌醇3-激酶[P13K(p85)]表达,蛋白激酶B(Akt)磷酸化,过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)葡萄糖转运蛋白4(GLUT-4)表达以及PPARγ转录活性的影响.结果 过表达LRPl6基因的C2-C12成肌细胞胰岛素刺激的葡萄糖摄取率降低为对照组的46%(4700±97比10 200±347,P〈0.01),抑制表达LRPl6基因后升高为对照组的1.73倍(17 600±466比10 200 ±91,P〈0.05).过表达LRPl6促进IRS-1丝氨酸307位点磷酸化,抑制IRS-1的酪氨酸磷酸化、P13K(p85)表达、Akt的磷酸化和PPARγ、GLUT-4的表达.LRPl6剂量依赖性的降低PPARγ的转录活性,当pcDNA3.1-16为0.4和0.5 μg时,PPARγ的转录活性降低为对照组的43%(76±11比33±9,P〈0.01)和27%(21 ±9比76 ±11,P〈0.01).结论 LRPl6基因通过抑制IRS-1信号通路和PPARγ转录活性导致C2-C12成肌细胞胰岛素抵抗. | 臧丽 母义明 吕朝晖 薛冰 马晓丽 杨国庆 巴建明 窦京涛 陆菊明 | 2011 | 中华医学杂志2011，91，20： | 4 |
| 4 | SKOV3卵巢癌细胞中雌激素对LRP16的调控作用及其影响显示文摘目的:研究雌激素受体ER阳性的卵巢癌细胞系中,E2对LRP16的调控作用以及LRP16对细胞增殖的影响。方法:Northern Blot、Western Blot方法分别检测RNA、蛋白表达水平;生长曲线测定过表达或抑表达LRP16对SKOV3细胞生长特性的影响。结果:雌激素敏感的BG-1细胞系中,E2正调控LRP16的表达;而不同浓度雌激素处理雌激素不敏感SKOV3细胞,LRP16蛋白的表达下降,而ICI182780对其作用相反;LRP16对SKOV3细胞的生长、增殖有微弱的调节作用。结论:在雌激素不敏感的SKOV3细胞系中,E2对LRP16的调节作用及LRP16发挥的生长调节作用与雌激素敏感的BG-1卵巢癌细胞系及乳腺癌体外研究结果不同。提示雌激素不敏感浆液性卵巢癌中E2对LRP16的调控可能存在新的机制,可能用来解释部分卵巢癌对内分泌治疗敏感性不同的原因。 | 田丽媛 赵亚力 韩为东 孟元光 伍志强 杨洁 | 2010 | 现代肿瘤医学2010，18，1： | 4 |
| 5 | 宫颈癌组织中LRP16和CIAP2的表达及其意义显示文摘目的:探讨宫颈癌组织中LRP16和CIAP2蛋白的表达及其与临床病理特征的关系。方法:采用免疫组化的方法检测正常宫颈组织24例,宫颈上皮内瘤变(CIN)30例(CINⅠ+CINⅡ18例,CINⅢ12例),宫颈癌组织66例中LRP16和CIAP2的表达,分析其与患者年龄、宫颈癌临床分期、组织学分级、病理类型及有无淋巴结转移的关系。结果:LRP16在正常宫颈组织,CINⅠ+CINⅡ、CINⅢ,宫颈癌组织中的阳性表达率分别为16.67%,33.33%,66.67%,69.70%;CIAP2为8.33%,22.22%,50.00%,53.03%。宫颈癌组和正常宫颈组、CINⅠ-Ⅱ组相比较差异均有统计学意义(P<0.05),宫颈癌组和CINⅢ组比较差异无明显的统计学意义(P>0.05)。LRP16蛋白的表达水平与CIN及宫颈癌呈正相关,检测LRP16对了解CIN及宫颈癌生物学行为和评估预后具有一定的价值。LRP16和CIAP2的阳性表达率与临床分期、组织学分级和有无淋巴结转移均有相关性(P<0.05);LRP16和CIAP2的表达存在正相关性(P<0.05)。结论:LRP16和CIAP2在宫颈癌组织中表达水平的上调可能在宫颈癌的发生发展和转移浸润中起着重要的作用。 | 于丹 伍志强 梅倩 白桦 韩为东 孟元光 | 2015 | 现代肿瘤医学2015，23，5： | 4 |
| 6 | LRP16和E-cadherin在子宫内膜腺癌中的表达研究显示文摘目的:探讨LRP16和上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin)在子宫内膜腺癌中的表达与临床病理特征等因素间的关系。方法:采集泸州医学院附属医院2009年10月至2011年3月60例子宫内膜腺癌及20例正常子宫内膜组织,应用免疫组织化学S-P法检测子宫内膜腺癌组织中LRP16和E-cadherin的表达情况,分析二者与子宫内膜腺癌之间的关系。结果:子宫内膜腺癌组织中LRP16细胞核阳性表达率为73.33%(44/60),细胞浆阳性表达率95.00%(57/60);LRP16细胞核表达程度与癌细胞的组织学分级呈正相关(P<0.05),而与手术病理分期无相关性(P>0.05);LRP16细胞浆表达与癌细胞的分化程度无相关性(P>0.05),而与手术病理分期呈负相关(P<0.05)。子宫内膜腺癌组中E-cadherin的阳性表达率为86.67%,而正常组中为90.00%,二者差异无统计学意义(P>0.05)。子宫内膜腺癌中LRP16表达和E-cadherin的表达差异无明显相关性(P>0.05)。结论:LRP16的表达可能与子宫内膜腺癌的发生发展密切相关;E-cadherin的表达与子宫内膜腺癌的发生发展未发现明确相关关系,LRP16蛋白表达水平与E-cadherin的表达可能无相关性。 | 刘玲 詹平 汪春燕 聂丹 钱燕萍 毛熙光 | 2015 | 肿瘤预防与治疗2015，28，3： | 4 |
| 7 | 人白血病相关蛋白16在垂体泌乳素腺瘤患者中的表达及其与雌激素受体α表达水平的相关性分析显示文摘目的探讨人白血病相关蛋白16(LRP16)在垂体泌乳素腺瘤患者中的表达情况及其与雌激素受体α(ERα)表达水平的关系。方法选取2009年10月-2014年9月于解放军总医院神经外科术中切除并经病理证实的31例成人垂体泌乳素腺瘤标本(观察组)和22例成人非垂体泌乳素腺瘤标本(对照组)。免疫组织化学法检测两组标本的泌乳素(PRL)、LRP16和ERα表达水平。结果垂体泌乳素腺瘤30岁以下患者以女性多见,30岁以上患者以男性多见,且男性垂体泌乳素腺瘤患者均为肥胖或超重;31例垂体泌乳素腺瘤中有26例(83.9%,26/31)LRP16为阳性表达,明显高于非垂体泌乳素腺瘤组(22.7%,5/22),有28例(90.3%,28/31)ERα为阳性表达,明显高于非垂体泌乳素腺瘤组(31.8%,7/22)。垂体泌乳素腺瘤中LRP16与ERα的表达量和表达强度的变化趋势均同步,二者存在一定正相关关系。结论高体重指数(BMI)可能是男性垂体泌乳素腺瘤发生发展和预后不良的高危因素;LRP16可能通过ERα参与了垂体泌乳素腺瘤的增殖与形成。 | 苏星 王安平 宋志刚 赵坤 郭清华 母义明 | 2017 | 解放军医学杂志2017，42，7： | 3 |
| 8 | HeLa细胞中LRP16影响电离辐射诱导的NF-κB核转位显示文摘前期研究显示抑制LRP16的表达可以明显增加肿瘤细胞对辐射诱导凋亡的敏感性,但具体机制尚不清楚.大量研究表明,NF-κB信号通路在肿瘤产生辐射抵抗中起着重要的作用.为研究LRP16影响肿瘤细胞对辐射敏感性的可能机制,首先通过免疫荧光技术检测电离辐射刺激后不同时间点NF-κB的核转位情况;然后分别过表达和抑制LRP16的表达,采用Western印迹方法检测NF-κB在核蛋白与浆蛋白中的表达情况、IκB-α总体蛋白水平及磷酸化水平.结果发现,电离辐射后1 h,可见NF-κB明显入核;过表达LRP16可以促进NF-κB入核、提高IκB-α的磷酸化水平、促进IκB-α的降解;反之,抑制LRP16的表达可以抑制NF-κB入核、降低IκB-α的磷酸化水平、阻碍IκB-α的降解.上述研究结果表明,在HeLa细胞中LRP16可以影响电离辐射诱导的NF-κB核转位,该研究为LRP16参与肿瘤细胞产生辐射抵抗现象提供一种可能的机制. | 马晓星 伍志强 段玉坤 赵亚力 李小雷 韩为东 孟元光 | 2011 | 中国生物化学与分子生物学报2011，27，7： | 3 |
| 9 | Macro Domain家族成员LRP16是多种核受体的相互作用因子显示文摘LRP16基因是macro domain家族成员之一,C末端含有唯一的1个保守的功能结构域.既往研究表明,该基因具有雌激素反应性,并可通过与雌激素受体α(ERα)相互作用调控其转录活性.近期我研究组发现,LRP16可与雄激素受体(AR)的共激活因子ART-27相互作用.本研究首先通过GST pull-down方法验证LRP16/ART-27/AR三者之间相互作用关系,并用免疫共沉淀实验明确了LRP16与AR存在直接的相互作用,且这种相互作用并不依赖于ART-27的存在;采用GST pull-down进一步明确LRP16与AR相互作用的结构域.结果发现,LRP16通过C端的macro domain结构域与AR的LBD域相互作用;鉴于核受体家族有较高程度的氨基酸序列保守性与功能结构域的相似性,通过GST pull-down验证了LRP16与核受体超家族成员ERβ、GR、PPARα、PPARγ的相互作用,提示LRP16至少还可与ERα以外的5个核受体家族成员相互作用;进一步采用核受体荧光素酶报告基因转染细胞,通过检测荧光素酶活性证实LRP16可增强AR、GR、ERβ、PPARα、PPARγ的转录激活活性.本研究初步证实,macro domain家族成员LRP16可与多个核受体相互作用,并增强其转录激活活性,是核受体家族的共激活因子,为进一步研究LRP16在核受体转录调控中的生理病理学功能奠定基础. | 杨洁 赵亚力 伍志强 韩为东 | 2011 | 中国生物化学与分子生物学报2011，27，8： | 2 |
| 10 | 基于网络药理学结合分子对接方法探讨绞股蓝治疗非小细胞肺癌的作用机制显示文摘【目的】运用网络药理学结合分子对接的方法探讨绞股蓝治疗非小细胞肺癌(NSCLC)的分子作用机制。【方法】利用TCMSP和STITCH数据库预测绞股蓝的活性化合物和潜在靶点,通过GeneCards、OMIM和TTD数据库搜索NSCLC的相关靶点。应用STRING数据库和Cytoscape软件建立蛋白相互作用网络,并进行分子对接验证和筛选潜在的核心化合物。应用DAVID数据库对靶点进行基因本体论(GO)分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析,绘制最终通路图。【结果】谷甾醇、菠菜甾醇、胆甾醇可能是绞股蓝治疗NSCLC潜在的核心化合物,表皮生长因子受体(EGFR)、细胞周期蛋白D1(CCND1)、血管内皮生长因子A(VEGFA)和雌激素受体1(ESR1)可能是治疗的重要靶点。此外,绞股蓝可能通过调节磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K)-苏氨酸激酶(Akt)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、雌激素(Estrogen)、肿瘤坏死因子(TNF)、低氧诱导因子1(HIF-1)等信号通路来发挥治疗NSCLC的作用。【结论】应用网络药理学和分子对接方法可揭示绞股蓝治疗NSCLC的潜在作用机制,为进一步的深入研究提供了理论参考。 | 陈江锋 林芝娴 韩孙亚 郭勇 | 2020 | 广州中医药大学学报2020，37，3： | 2 |
| 11 | 非小细胞肺癌中雌激素受体α与β的表达及临床意义显示文摘目的探析非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中雌激素受体α(estrogen receptor alpha,ERα)、雌激素受体β(estrogen receptor beta,ERβ)的表达及临床意义。方法采用免疫组织化学SP法检测144个非小细胞肺癌组织标本、32个癌旁正常肺组织标本(距肿块5 cm以上)及17个肺良性病变组织标本中ERα、ERβ的表达。结果 ERα和ERβ在肺良性病变组织、癌旁肺组织、NSCLC组织中表达率分别为82.23%、84.38%、87.50%和47.06%、53.13%、66.67%,两者组间比较差异均无统计学意义(P>0.05);NSCLC组织中ERα、ERβ阳性表达与患者性别、癌细胞分化程度、病理类型、淋巴结转移、TNM分期等因素无相关(P>0.05),NSCLC患者年龄≥60岁的癌组织中ERβ阳性表达率77.27%高于年龄<60岁患者50.00%,差异有统计学意义(P<0.01),然而NSCLC组织中ERα阳性表达率在年龄方面比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 ERα、ERβ在NSCLC组织中阳性表达与患者性别、癌细胞分化程度、病理类型、淋巴结转移、TNM分期等因素均无明显相关,ERβ在NSCLC组织中阳性表达可能与年龄相关。 | 井晓婷 何芳 钱盼盼 张培蓓 叶贤伟 余红 张湘燕 | 2018 | 中国现代医生2018，56，16： | 2 |
| 12 | 人类白血病相关性基因LRP16及与肿瘤关系的研究进展显示文摘 | 尹肖云 孟元光 赵亚力 韩为东 | 2008 | 现代肿瘤医学2008，16，10： | 1 |
| 13 | shRNA慢病毒载体稳定抑制LRP16表达的HepG2细胞的构建及鉴定显示文摘目的:构建LRP16基因抑制表达的Hep G2稳定细胞系,鉴定其LRP16基因抑制表达的效果。方法:构建LPP-HSH008357-LVRH1GP-200短发卡RNA(sh RNA)慢病毒表达载体,用该抑制表达慢病毒感染Hep G2细胞系,通过荧光筛选及药筛,获得LRP16基因稳定抑制表达细胞系;最终运用Q-PCR和Western blot鉴定该稳定细胞系中LRP16的表达。结果:构建了LRP16基因抑制表达及抑制表达对照的Hep G2稳定细胞系,并通过Q-PCR和Western blot进行了鉴定。Q-PCR结果显示相对于对照稳转株(LPP-CSHCTR001-LVRH1GP-100),抑制表达稳转株(LPP-HSH008357-7-LVRH1GP-200)LRP16基因的抑制效率是4组抑制表达细胞中效果最理想的一组,其抑制效率高达98%;Western blot结果也显示该抑制表达稳转株(LPP-HSH008357-7-LVRH1GP-200)的LRP16蛋白表达量明显低于野生型Hep G2细胞及对照稳转株(LPP-CSHCTR001-LVRH1GP-100),其结果与Q-PCR一致。结论:构建并鉴定了人LRP16基因抑制表达Hep G2稳定细胞系及其相应的对照稳转株。 | 李婷 王安平 汪保安 哈斯 母义明 | 2016 | 现代生物医学进展2016，16，8： | 1 |
| 14 | 抑制LRP16基因的表达显著下调TNF-α介导的NF-κB转录活性显示文摘LRP16是1个雌激素(E2)通过其受体α(ERα)诱导表达的靶基因.研究表明,LRP16可以作为多种核受体(包括AR、ERα)的转录共激活因子.采用荧光素酶报告检测显示,抑制LRP16基因表达显著削弱了TNF-α(10 ng/mL)介导的NF-κB转录活性;采用免疫荧光和Western印迹法研究抑制LRP16对NF-κB/p65亚基核转位的影响,结果显示,抑制LRP16表达并不能参与影响p65亚基核转位.上述结果提示,LRP16可能以核激活因子角色参与了NF-κB介导的信号途径.RT-PCR实验检测抑制LRP16基因表达对TNF-α诱导NF-κB靶基因调控作用,检测的靶基因包括IκB、A20、IL-8、FLIP、XIAP.结果表明,在这些靶基因中只有XIAP、cIAP2产生了明显的下调趋势.因此,LRP16是NF-κB的1个共激活因子,通过调控NF-κB与靶基因的结合能力,从而增强了NF-κB的转录活性. | 李小雷 伍志强 马晓星 赵亚力 韩为东 | 2011 | 中国生物化学与分子生物学报2011，27，7： | 1 |
| 15 | 角蛋白KRT18对LRP16亚细胞定位的影响显示文摘目的:通过构建LRP16绿色荧光蛋白(GFP)融合子,观察LRP16蛋白在乳腺癌MCF-7、小鼠成纤维NIH3T3细胞株中的亚细胞定位,研究角蛋白18(Cytokeratin18,KRT18)对LRP16亚细胞定位的影响,并利用Western-blot对KRT18能够调控LRP16核浆穿梭进一步验证。方法:构建真核表达载体pEGFP-LRP16,经脂质体介导pEGFP-LRP16质粒单独转染,与携带KRT18基因的Flag-pCDNA3-KRT18质粒共同转染NIH3T3、MCF-7细胞,荧光显微镜观察LRP16的亚细胞分布变化。Western-Blot法进一步验证在KRT18过表达和小干扰(siRNA)技术沉默掉KRT18后对内源性LRP16蛋白核浆分布的影响。结果:成功构建pEGFP-LRP16融合载体,荧光显微镜观察LRP16蛋白在MCF-7细胞呈核型分布为主,在NIH3T3细胞呈浆型分布为主。与KRT18共同转导后LRP16亚细胞分布趋向细胞浆。Western blot分析证实角蛋白18会介导内源性LRP16由核向浆穿梭的生物学功能。结论:KRT18通过与LRP16相互作用将LRP16扣留在细胞浆,是影响LRP16亚细胞分布的关键因子。为进一步研究KRT18对LRP16翻译后核功能执行的调控机制奠定了基础。 | 尹肖云 伍志强 孟元光 赵亚力 杨洁 韩为东 | 2010 | 现代肿瘤医学2010，18，1： | 1 |
| 16 | 小鼠LRP16基因打靶载体的构建和同源重组型胚胎干细胞筛选(英文)显示文摘背景:LRP16基因是一个雌激素反应基因,其表达水平与乳腺癌细胞增殖及侵袭密切相关。目的:构建针对小鼠LRP16基因的打靶载体,转染胚胎干细胞(EmbryonicStemCell)并筛选同源重组克隆。设计:通过SA-RIES-βgeo插入小鼠LRP16基因组DNA构建插入失活型打靶载体。单位:日本九州大学第三内科生物调控研究室与解放军总医院分子生物室。材料:本实验所用主要材料由日本九州大学生物调控研究室提供。实验所用鼠基因组文库(mousegenomiclibraryinpBeloBAC11Vector)购自invitrogen公司,TopF10感化态细菌购自北京天为时代公司,pCDNA3.1(+)由本室保存。鼠胚胎干细胞株由日本九州大学提供。方法:实验主要工作于2004-11/2005-05在日本九州大学生物调控研究室与解放军总医院分子生物室完成。PCR方法筛选129品系小鼠基因组文库中LRP16克隆,在第5外显子内插入SA-RIES-βgeo序列,构建插入失活型打靶载体并转染胚胎干细胞,经G418筛选,挑取抗性克隆,Southernblot方法鉴定同源重组胚胎干细胞克隆。主要观察指标:具有同源重组的胚胎干细胞克隆。结果:将包含第5至11外显子的LRP16基因组片段亚克隆到pBluescriptSKII+载体,SA-IRES-βgeo序列的正确插入第五外显子中,打靶载体成功转染胚胎干细胞,Southernblot结果显示具有一个打靶序列同源重组型插入的胚胎干细胞克隆。结论:成功构建了第五外显子插入失活型LRP16基因打靶载体并筛选到同源重组型胚胎干细胞。 | 伍志强 韩为东 赵亚力 司艺玲 母义明 孟元光 Masatoshi Nomura | 2008 | 中国组织工程研究与临床康复2008，12，12： | 1 |
| 17 | 白血病相关蛋白LRP16过表达HepG2稳定细胞系的构建及鉴定显示文摘目的:构建白血病相关蛋白16(LRP16)过表达的Hep G2稳定细胞系,鉴定LRP16过表达的效果。方法:把EX-Y2069-Lv201过表达质粒载体包装成LPP-Y2069-Lv201-400过表达慢病毒,感染Hep G2细胞系,通过荧光筛选及药物筛选,获得LRP16稳定过表达细胞系;应用q PCR和Western印迹鉴定该稳定细胞系中LRP16的表达。结果:q PCR结果显示过表达稳转株(LPP-Y2069-Lv201-400)中LRP16基因的表达量为对照稳转株(LPP-NEG-Lv201-100)的128.64倍;Western印迹结果显示过表达稳转株的LRP16表达量明显高于对照稳转株,结果与q PCR一致。结论:构建并鉴定了人LRP16基因过表达Hep G2稳定细胞系。 | 李婷 王安平 李萍 王双双 母义明 | 2015 | 生物技术通讯2015，26，5： | 1 |
| 18 | LRP16短发夹RNA慢病毒载体的构建及LRP16稳定抑制细胞的建立显示文摘目的:构建靶向LRP16基因的短发夹RNA(shRNA)慢病毒表达载体,鉴定其在HeLa细胞中对LRP16的抑制效果。方法:构建pWPT-U6-LRP16shRNA-CMV-GFP慢病毒载体,通过病毒感染、细胞筛选、Western印迹等步骤,获得LRP16基因稳定抑制的细胞株。结果:构建了具有LRP16干扰效果的慢病毒载体,感染HeLa细胞后获得了稳定沉默LRP16及对照的细胞株;经克隆筛选,在荧光显微镜下观察到近似100%感染细胞发出绿色荧光;Western印迹证实pWPT-U6-L374-CMV-GFP和pWPT-U6-L668-CMV-GFP均可显著抑制HeLa细胞株中LRP16蛋白的表达,其中pWPT-Gsi-L374-GFP的抑制效果更好。结论:构建了靶向人LRP16基因shRNA慢病毒载体及LRP16稳定抑制的HeLa细胞系。 | 王春萌 柏苗苗 伍志强 李小雷 李祥 梅倩 韩庆旺 韩为东 | 2014 | 生物技术通讯2014，25，1： | 0 |
| 19 | LRP16转基因小鼠的繁殖与鉴定显示文摘目的繁殖和鉴定携带有外源LRP16基因的转基因小鼠,为体内研究LRP16的生物学功能提供动物模型。方法首先将构建好的LRP16转基因重组质粒转染到293T细胞,鉴定该质粒是否可以有效表达目的蛋白,随后利用原核显微注射方法将线性化的重组质粒注射入品系为FVB的小鼠受精卵中,获得F0代小鼠。应用PCR方法对F0代小鼠进行鉴定,并将阳性F0代小鼠继续繁殖。结果 LRP16转基因重组质粒在293T细胞中可以有效表达,经PCR鉴定获得3只阳性F0代小鼠,阳性率为6.23%,选取其中1只整合有LRP16基因的F0代雄鼠,通过其与野生型FVB小鼠杂交获得7只F1代子鼠,其中4只为阳性鼠,阳性率为57.14%。从F1代中再次选取其中1只阳性雄鼠与野生型小鼠杂交繁殖获得5只F2代子鼠,PCR鉴定结果显示2只为阳性,阳性率为40%。结论 LRP16基因成功整合到小鼠基因组中,并且能够稳定遗传,为后续在动物整体水平研究LRP16的功能奠定了基础。 | 王春萌 柏苗苗 伍志强 李小雷 李祥 梅倩 韩为东 | 2014 | 解放军医学院学报2014，35，3： | 0 |
| 20 | Gateway技术构建转基因重组质粒pRP.EX3d-EF1A-LRP16-His-IRES-eGFP显示文摘目的构建转基因重组质粒pRP.EX3d-EF1A-LRP16-His-IRES-eGFP,为转基因鼠的建立奠定基础。方法利用重叠PCR技术扩增attB1-LRP16-His-attB2,经BP反应,将LRP16基因插入到载体pDown上,pUp-EF1A、pDown-LRP16-His、pTail-IRES-eGFP和PRP.Des3d经LR反应,将LRP16转移到pRP.EX3d上,转化Stbl3细胞,用氨苄西林进行抗性筛选,经PCR鉴定后将阳性克隆送测序。结果测序及酶切结果验证获得正确的pRP.EX3d-EF1A-LRP16-His-IRES-eGFP重组质粒。结论成功构建pRP.EX3d-EF1A-LRP16-His-IRES-eGFP重组质粒,可用于下一步LRP16转基因小鼠的构建。 | 柏苗苗 王春萌 伍志强 梅倩 李小雷 李祥 赵亚力 韩为东 | 2014 | 解放军医学院学报2014，35，3： | 0 |
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