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| 1 | 芍药苷对皮质酮致原代皮层细胞神经损伤的保护作用及机制研究显示文摘目的:探讨促丝裂原活化蛋白激酶(MEK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路在芍药苷拮抗皮质酮诱导的神经损伤作用及其机制,为抑郁症的预防与治疗提供新思路。方法:采用高浓度皮质酮制备原代皮层神经细胞抑郁症及神经损伤模型,细胞随机分为正常组、皮质酮组、芍药苷(1、10、50μmol/L)组、芍药苷(1、10、50μmol/L)+皮质酮组、U0126/PD98059组+正常组、U0126/PD98059组+皮质酮组、U0126/PD98059+芍药苷+皮质酮组,共14组。进行细胞纯度鉴定,观察细胞形态,检测细胞存活率,检测细胞ERK1、ERK2、CREB m RNA的表达,检测细胞p-ERK/ERK、p-CREB/CREB蛋白的表达。结果:培养的细胞胞体饱满,状态良好,纯度较高。与正常组比较,皮质酮组可降低细胞存活率(P<0.01),芍药苷各剂量组可不同程度使细胞存活率增加(P<0.01,P<0.05),U0126或PD98059能逆转芍药苷提高细胞存活率的作用。与正常组比较,皮质酮组细胞ERK1、ERK2、CREB m RNA含量显著降低(P<0.01,P<0.05);与皮质酮组比较,芍药苷50μmol/L+皮质酮组细胞ERK1 m RNA及芍药苷10μmol/L+皮质酮组细胞中ERK2、CREB m RNA含量显著升高(P<0.05)。与正常组比较,皮质酮组细胞p-ERK/ERK、p-CREB/CREB蛋白表达均下降(P<0.01);与皮质酮组比较,芍药苷各剂量组细胞p-ERK/ERK蛋白表达水平呈显著性升高(P<0.01);与芍药苷10μmol/L+皮质酮组比较,加入U0126/PD98059预处理后,细胞p-ERK/ERK、p-CREB/CREB蛋白表达水平下降。结论:芍药苷能拮抗皮质酮诱导的原代皮层神经细胞的神经损伤,其作用机制由MEK/ERK信号通路介导。 | 陈梦静 龚雪媛 龚恒佩 钟晓明 黄真 | 2018 | 中华中医药杂志2018，33，4： | 9 |
| 2 | 蜂胶的神经保护作用及成分研究显示文摘目的:探讨蜂胶对氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)致损N2a细胞的神经保护作用。方法:用体积分数70%的乙醇提取蜂胶,浓缩的乙醇浸膏依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和丙酮萃取,检测各萃取组分总酚、黄酮/醇、二氢黄酮/醇的含量;将N2a细胞随机分为正常组、OGD/R组、阳性对照组、石油醚萃取物组、二氯甲烷萃取物组、乙酸乙酯萃取物组及丙酮萃取物组,采用CCK-8法检测对细胞存活率的影响,并以吉姆萨染色法检测细胞凋亡情况。结果:不同萃取物组分中,二氯甲烷组分黄酮和二氢黄酮含量最高,分别达到15%和19%,其对受损N2a细胞保护作用也最强;乙酸乙酯组分的总酚含量最高,达到58%,也具有很好的神经保护作用。结论 :通过总酚、黄酮、二氢黄酮含量与受损N2a细胞保护作用的比较,发现神经保护作用与总酚、黄酮、二氢黄酮含量呈正相关,由此判断蜂胶提取物的神经保护作用成分主要为黄酮和二氢黄酮类成分。总酚中非黄酮类酚性成分也有神经保护作用。蜂胶提取物中多酚类物质含量很高,具有开发意义。 | 高丽苗 徐响 高蓬勃 孙丽萍 | 2017 | 中国食品学报2017，17，11： | 4 |
| 3 | 缺血预处理星形胶质细胞GDNF抑制p38MAPK信号通路减轻神经元凋亡显示文摘目的研究缺血预处理星形胶质细胞分泌GDNF抑制p38MAPK信号通路发挥脑保护作用。方法原代培养神经元及星形胶质细胞,给予缺血预处理,将星形胶质细胞培养基制备成条件培养基,沉默GDNF基因的培养基作为另一种条件培养基,将神经元分为对照组、预处理组、预处理+缺血组、缺血组,应用不同条件培养基孵育神经元,流式细胞术检测神经元凋亡,Western Blot法检测神经元p38MAPK及p-p38MAPK的表达。结果预处理+缺血组和缺血组神经元凋亡率明显增高(P<0.05),加入ACM2后凋亡率较ACM1和ACM3两组均减低(P<0.05)。每组神经元的p38MAPK蛋白表达均无明显变化(P>0.05);预处理+缺血组及缺血组p-p38MAPK的蛋白表达均明显高于对照组和预处理组(P<0.05),预处理+缺血组p-p38MAPK的蛋白表达均较缺血组低(P<0.05),加入ACM2组的p-p38MAPK蛋白表达低于ACM1和ACM3两组(P<0.05)。结论缺血预处理后星形胶质细胞分泌GDNF抑制p38MAPK信号通路的激活从而减少神经元凋亡,起到脑保护作用。 | 李昕华 徐晓燕 刘艳华 | 2020 | 中国实验诊断学2020，24，3： | 4 |
| 4 | 一种新生SD大鼠皮质源性神经元的培养方法显示文摘背景:神经元的体外原代培养在研究神经系统的发育、再生、信号转导机制、神经药理学以及基因表达方面具有极其重要的地位。目的:建立一种操作更加简单且能够得到较高纯度新生SD大鼠皮质神经元原代培养的方法。方法:取1 d新生SD大鼠皮质。传统方法实验组:取整个皮质;改良方法实验组:取SD大鼠表面2.0-3.0 mm处皮质。木瓜蛋白酶消化后离心,制备成单细胞悬液,以1×105/孔的浓度接种至含神经元培养液的24孔培养板进行原代培养。培养3 d时采用免疫细胞化学染色方法,使用神经元特异性标志物Tuj1与MAP-2双标记法鉴定所培养的细胞;采用倒置相差显微镜观察6,24,48,72 h及5,7 d细胞数和突起长度并记录。结果与结论:1所培养的细胞可表达神经元特异性标志物Tuj1与MAP-2,因此所培养细胞为神经元,可用于之后实验;2实验组培养至第3天时神经元的纯度已达到峰值92%,而普通实验组神经元的纯度为51%;32组细胞培养至6 h均已贴壁且长处小突起,培养至第3天时,细胞已初步形成神经网络,培养至5 d时神经网络密集;4研究所用方法简便能够稳定的培养出纯度较高的神经元,可以用于SD大鼠皮质源性神经元的相关实验研究。 | 王东艳 杨金伟 程敬茹 马微 李兴统 郭建辉 李力燕 | 2016 | 中国组织工程研究2016，20，51： | 4 |
| 5 | 蜂胶分级提取物的神经保护功效及成分研究显示文摘研究蜂胶中具有神经保护功效的活性成分,对N2a细胞进行氧糖剥夺(OGD)模拟体内缺血再灌注模型。采用CCK-8法检测细胞存活率并以其作为活性筛选指标,以吉姆萨染色法观测细胞形态学指标,对蜂胶分级醇提物进行抗脑缺血再灌注损伤的活性研究。结合HPLC进行成分分析。结果表明:蜂胶分级醇提物的最大作用质量浓度不超过20μg/m L,以ODG4h复糖复氧24 h为最佳模型条件,对蜂胶分级醇提物进行活性筛选,蜂胶70%醇溶物活性最高,5,10μg/m L和15μg/m L剂量组细胞存活率和细胞形态较模型组细胞均显示有极显著差异,且神经保护活性存在剂量依赖关系。HPLC分析表明,70%醇溶物中含量较高的黄酮类成分为白杨素和松属素,可作为评估蜂胶神经保护功效活性的指标。 | 王馨 徐响 高丽苗 俞斌 孙丽萍 | 2016 | 中国食品学报2016，16，1： | 3 |
| 6 | Bcl-2基因转染对体外培养大鼠大脑皮层神经细胞氧糖剥夺损伤的保护作用显示文摘目的研究bcl-2基因转染对体外培养大鼠大脑皮层神经细胞氧糖剥夺损伤的保护作用,为基因转染治疗脑血管病寻找实验依据。方法体外培养新生大鼠大脑皮层神经细胞,应用脂质体转染法将bcl-2基因转染入神经细胞,建立氧糖剥夺模型,实验分为正常对照组、氧糖剥夺组和bcl-2转染组(转染bcl-2基因24h后,进行氧糖剥夺),采用Western blot法、MTT法、流式细胞仪分别检测各组细胞的bcl-2蛋白表达、细胞活力及凋亡率。结果 SD大鼠大脑皮层神经细胞可纯化体外培养,纯度达到90%以上。成功建立了大鼠神经细胞体外氧糖剥夺模型,成功进行了质粒pc-DNA3.1-hbcl-2的转化、扩增及基因转染。对照组神经细胞bcl-2少量表达,氧糖剥夺组bcl-2蛋白微弱表达,转染组细胞bcl-2蛋白高表达,各组间差异均有统计学意义(均P<0.01)。MTT法检测结果显示,对照组细胞的吸光度值(A)为(0.851±0.034);氧糖剥夺组的A值为(0.648±0.030),与对照组相比明显降低(P<0.01);转染组的A值为(0.787±0.004),低于对照组(P<0.05),但明显高于氧糖剥夺组(P<0.05)。对照组神经细胞凋亡率为4.6%;氧糖剥夺损伤后细胞凋亡率明显增加,为19.6%;转染组细胞凋亡率与氧糖剥夺组相比有明显下降,为9.6%,差异有统计学意义(均P<0.01)。结论脂质体介导的bcl-2基因转染对氧糖剥夺损伤的大鼠大脑皮层神经细胞有明显保护作用。 | 张忠胜 梅元武 苏庆杰 容琼文 | 2012 | 华中科技大学学报(医学版)2012，41，4： | 2 |
| 7 | P38MAPK信号通路对缺血预处理减轻神经元凋亡作用机制的研究显示文摘目的探讨通过缺血预处理抑制P38丝裂素活化蛋白激酶(P38MAPK)信号通路以减轻神经元凋亡的机制.方法将原代培养的神经元及星形胶质细胞进行缺血预处理,将常规条件下培养的星形胶质细胞培养基作为条件培养基1(ACM1);在分泌GDNF最多时,将星形胶质细胞培养基制备成条件培养基2(ACM2);GDNF基因经转染质粒沉默后提取其培养基,作为条件培养基3(ACM3),将P38MAPK的抑制剂SB203580加入ACM3中,制备成ACM4.将对照组、预处理组、预处理+缺血组、缺血组神经元孵育在不同条件培养基中,AO/EB荧光染色检测神经元凋亡情况,Western blot法检测神经元p-P38MAPK及Caspase-3的表达.结果预处理+缺血组和缺血组神经元凋亡率明显增高(P<0.05),加入ACM2后神经元凋亡较ACM1和ACM3两组均减少(P<0.05).预处理+缺血组和缺血组凋亡的神经元明显多于另外两组(P<0.05),加入ACM1和ACM3两种培养基后凋亡率高于ACM2组(P<0.05).预处理+缺血组及缺血组p-P38MAPK及Caspase-3的蛋白表达均明显高于对照组和预处理组(P<0.05),预处理+缺血组p-P38MAPK及Caspase-3的蛋白表达均较缺血组低(P<0.05),加入ACM2组的p-P38MAPK及Caspase-3蛋白表达低于另外两组(P<0.05).结论星形胶质细胞经过缺血预处理后GDNF分泌增多,通过抑制P38MAPK信号通路及Caspase-3的表达减少神经元凋亡,进而发挥内源性神经保护机制. | 李昕华 刘艳华 蔺勇 | 2020 | 北华大学学报(自然科学版)2020，21，6： | 1 |
| 8 | 大鼠皮层小胶质细胞氧糖剥夺模型的制备显示文摘目的培养Wistar大鼠皮层小胶质细胞,建立氧糖剥夺模型。方法培养Wistar大鼠皮层小胶质细胞,应用OX42抗体进行鉴定,缺氧培养小胶质细胞后测定LDH漏出率。结果小胶质细胞培养至第8天OX42染色阳性细胞为(97.33±2.15)%;氧糖剥夺60min时,LDH漏出率明显增加(P<0.05)。结论成功培养大鼠皮层小胶质细胞,在培养第8天可制备氧糖剥夺模型。 | 李昕华 | 2011 | 中外医疗2011，30，35： | 1 |
| 9 | 益肺宣肺降浊方对星形胶质细胞-神经元氧糖剥夺损伤的缓解作用及其可能机制显示文摘目的 分析益肺宣肺降浊方对星形胶质细胞-神经元氧糖剥夺(OGD)损伤的缓解作用,并基于胆碱乙酰转移酶(ChAT)、α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7-nAChR)及炎症因子探讨其可能的作用机制。方法 (1)制备对照血清及益肺宣肺降浊方含药血清。(2)分离培养新生大鼠海马星形胶质细胞和神经元。将细胞分为对照组、OGD组、OGD+YFXF组、OGD+YFXF+山莨菪碱组。在对照组中,常规培养原代海马神经元和星形胶质细胞;在OGD组、OGD+YFXF组、OGD+YFXF+山莨菪碱组中,建立星形胶质细胞-神经元OGD模型,并分别使用含5%对照血清的高糖DMEM、含5%益肺宣肺降浊方含药血清的高糖DMEM、含5%益肺宣肺降浊方含药血清及100μg/mL山莨菪碱的高糖DMEM进行培养。(3)干预24 h后,观察各组细胞形态,检测星形胶质细胞和神经元的标志物表达情况,星形胶质细胞活性氧簇含量、ChAT活性、α7-nAChR和ChAT的mRNA和蛋白表达量,以及上清液乳酸脱氢酶(LDH)、白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和IL-6水平。结果 与对照组相比,OGD组星形胶质细胞及神经元标志物荧光强度减弱,神经元形态异常,星形胶质细胞的活性氧簇含量及上清液LDH、IL-1β、TNFα、IL-6水平增加,星形胶质细胞的ChAT活性降低且α7-nAChR、ChAT的mRNA和蛋白表达量下调(P<0.05)。与OGD组相比,OGD+YFXF组星形胶质细胞及神经元标志物荧光强度增强,神经元形态有所改善,星形胶质细胞的活性氧簇含量及上清液LDH、IL-1β、TNF-α、IL-6水平降低,星形胶质细胞的ChAT活性增强且α7-nAChR、ChAT的mRNA和蛋白表达量上调(P<0.05)。与OGD+YFXF组相比,OGD+YFXF+山莨菪碱组的星形胶质细胞和神经元的标志物荧光强度减弱,神经元形态异常,星形胶质细胞的活性氧簇含量及上清液LDH、TNF-α水平增加,星形胶质细胞的α7-nAChR mRNA和蛋白表达量降低(P<0.05)。结论 益肺宣肺降浊方可能通过上调海马星形胶质细胞中α7-nAChR的表达、增强ChAT活性、抑制炎症反应,来缓解星形胶质细胞-神经元OGD损伤,这或许是该方改善缺血再灌注损伤介导的血管性痴呆的作用机制。 | 朱健敏 陈炜 胡跃强 蒋凌飞 吴林 | 2023 | 广西医学2023，45，19： | 0 |
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