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| 1 | 兔关节软骨细胞的分离、培养和形态学特征显示文摘[目的]探讨兔关节软骨细胞的分离、培养方法,观察单层高浓度培养时细胞表型表达情况。[方法]无菌条件下,从2周龄新西兰白兔的颞颌关节及四肢关节髁突面削取软骨片,采用机械-酶消化法分离软骨细胞,经台盼蓝拒染计数,将细胞按1×106个/孔接种于6孔培养板,传代培养,描绘生长曲线。利用相差显微镜及透射电镜观察细胞形态。应用甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原免疫组化对细胞进行鉴定。[结果]每克软骨能获取1.5×106个软骨细胞,活性率为95%。培养2-3 d,细胞贴壁、变形,呈多角形;8 d左右,细胞融合成层。透射电镜观察显示细胞核圆形,有丰富的粗面内质网、高尔基体及分泌的基质成分。甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原染色阳性。细胞传至5代后,出现“成纤维细胞样”。[结论]本研究建立了简单易行的软骨细胞分离、培养方法;初代、第2代细胞生长良好,适合于实验研究;软骨细胞5代培养后,细胞表型发生改变。 | 张志光 郑卫平 苏凯 许跃 | 2004 | 中山大学学报(医学科学版)2004，25，1： | 14 |
| 2 | 不同年龄兔软骨细胞培养和形态学研究显示文摘目的:研究兔关节软骨细胞的分离、培养方法,观察不同年龄兔软骨细胞的形态学特性。方法:无菌条件下,从不同年龄新西兰白兔的四肢关节髁突面削取软骨片,采用机械-酶消化法分离软骨细胞,经台盼蓝拒染计数,传代培养。应用甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原免疫组化对细胞进行鉴定,利用相差显微镜及透射电镜观察细胞形态,激光共聚焦扫描显微镜检测软骨细胞直径。结果:培养2 d^3 d,细胞贴壁、变形,呈多角形;8 d左右,细胞融合成层。甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原染色阳性。透射电镜观察显示,随兔年龄改变,关节软骨细胞的超微结构也有所差异。用激光扫描共聚焦显微镜对其直径进行检测,显示三组细胞的直径两两之间都有差别,即成年软骨细胞直径大于幼年软骨细胞直径,小于老年软骨细胞直径(P<0.001)。结论:本研究建立了简单易行的软骨细胞分离、培养方法;初代、第2代细胞生长良好,适合于实验研究;不同年龄兔软骨细胞的形态结构有所改变,为了解骨性关节炎的发展变化提供一定依据。 | 李昊 | 2008 | 山西职工医学院学报2008，18，1： | 7 |
| 3 | 兔关节软骨细胞原代培养及生物学鉴定显示文摘目的探讨兔膝关节软骨细胞体外分离培养及鉴定方法,分析软骨细胞在体外不同阶段的生物学特性。方法取4周龄健康新西兰兔膝关节软骨,以机械分离和酶消化相结合的方法获取膝关节软骨细胞,经体外培养、传代。观察不同培养阶段细胞形态和生长,CCK-8法测定细胞增殖并绘制生长曲线,甲苯胺蓝和Ⅱ型胶原免疫荧光染色鉴定软骨细胞。结果兔软骨细胞经两步消化,可获取高纯度的软骨细胞,细胞活性率可达95%以上,甲苯胺蓝染色及免疫荧光呈阳性结果。原代细胞和第一代细胞呈多角形,传代4~5代后,细胞形态逐渐由多角形变为梭形,基质分泌氨基多糖和胶原染色变浅。结论成功建立了简单易行的软骨细胞分离、培养方法,通过传代可以获取大量实验细胞,但仅限于5代以内软骨细胞适用于组织工程研究。 | 赵海洋 马子君 路屹 陈传好 | 2015 | 中国老年学杂志2015，35，4： | 6 |
| 4 | 碱性成纤维细胞生长因子对离体和在体关节软骨细胞影响的实验研究显示文摘目的 观察bFGF对离体和在体关节软骨细胞的影响。方法 分离培养家兔关节软骨细胞 ,采用MTT法观察bFGF对离体培养关节软骨细胞增殖的影响 ,利用创伤性关节软骨损伤动物模型 ,观察bFGF对在体关节软骨细胞的作用。结果 经bFGF处理的关节软骨细胞增殖明显增强 ,并呈明显的量效关系 ,其峰值浓度为 10ng ml。将此浓度应用于在体条件 ,发现实验组修复组织填充快 ,质量好 ,为透明软骨性修复。结论 bFGF不仅促进离体培养软骨细胞增殖 ,在体条件下依然能有效地促进软骨细胞的增殖 。 | 陈昕 赵雷 闫晓明 周余来 颜炜群 | 2004 | 中国实验诊断学2004，8，4： | 5 |
| 5 | 关节软骨修复与细胞因子显示文摘 | 周斌 姚昉 王春 | 2004 | 中国骨伤2004，17，1： | 5 |
| 6 | 体外培养豚鼠膝关节软骨细胞的生物学特性及其鉴定显示文摘目的探索豚鼠膝关节软骨细胞的分离、培养和鉴定方法,观察豚鼠膝关节软骨细胞的生物学特性。方法无菌条件下,从2周龄豚鼠的膝关节面削取软骨片,采用机械-酶消化法分离软骨细胞,经台盼蓝拒染计数,将细胞按1×106个/孔接种于25 cm2细胞培养瓶,传代培养,描绘生长曲线。利用相差显微镜及透射电镜观察细胞形态。应用甲苯胺蓝染色、1,9-二甲基亚甲蓝(1,9-Dimethylmethylene blue,DMB)染色、阿利新蓝染色、Ⅱ型胶原免疫组化及透射电镜对细胞进行鉴定。结果甲苯胺蓝染色、DMB染色或阿利新蓝染色时均可异染;II型胶原免疫组化染色时,软骨细胞胞浆被染成棕黄色,胞核不着色。透射电镜分析显示细胞核圆形,有丰富的粗面内质网、高尔基体及分泌的基质成分。生长曲线分析显示第3、4代细胞生长速度稳定,细胞传至第5代以后,出现'成纤维细胞样'。结论本研究建立了简单易行的豚鼠膝关节软骨细胞分离、培养和鉴定方法;第3、4代细胞生长速度稳定,适合于实验研究;软骨细胞5代培养后,细胞表型发生改变。 | 王宁 董妙珠 施志冲 洪新宇 仲伟鉴 肖萍 | 2010 | 职业卫生与应急救援2010，28，6： | 2 |
| 7 | 微量元素铜对软骨细胞胰岛素样生长因子mRNA基因表达的影响显示文摘分离培养仔猪关节软骨细胞,从中提取总RNA,采用RTPCR法扩增出关节软骨细胞中胰岛素样生长因子Ⅰ(IGFⅠ)的cDNA,与pMD18T载体相连,转化JM109大肠埃希氏菌,提取质粒,经鉴定,所扩增的片段为目的片段。在此基础上培养仔猪关节软骨细胞,并在培养液中添加不同水平的铜,分别在第0、12、24、48h收集软骨细胞,提取总RNA,采用RTPCR法扩增出IGFⅠ的cDNA,以βactin为内参,用凝胶分析系统对扩增出的cDNA进行扫描分析,计算IGFⅠmRNA基因表达的相对水平。结果,在细胞培养液中添加不同水平的铜能促进软骨细胞中IGFⅠmRNA基因表达,其中以铜浓度31.2μmol/L的效果最好。表明铜对软骨细胞的增殖作用是通过促进IGFⅠmRNA的表达来实现的。 | 钱剑 刘国文 王哲 | 2005 | 中国兽医科技2005，35，7： | 2 |
| 8 | 细胞因子对软骨细胞的调控作用显示文摘关节软骨缺损是临床常见的病变,其修复是骨科领域疑难问题之一.现有许多修复软骨缺损的方法,其中自体软骨细胞移植是最理想的方法.骨组织工程使其变为现实,而细胞的体外培养是关键的一步,细胞因子对软骨细胞的增殖、分化起重要的调控作用.影响软骨细胞代谢的细胞因子种类很多,本文就国内外研究中常见的细胞因子做一综述. | 王国金 卫小春 | 2004 | 生物骨科材料与临床研究2004，1，6： | 2 |
| 9 | 抑肽酶、氨甲环酸对体外纤维蛋白胶支架中软骨细胞增殖的影响显示文摘目的通过在纤维蛋白胶(FG)中引入不同浓度的抑肽酶和氨甲环酸,探索二者对FG支架中软骨细胞繁殖、表型维持、基质分泌的影响。方法构建标准FG支架细胞复合物和不同浓度抑肽酶及氨甲环酸的改良FG支架细胞复合物,进行体外三维立体培养、扩增。观察软骨细胞在FG支架上的形态变化,绘制细胞生长曲线,观察光镜和透射电镜下组织形态学改变并采用免疫组化S-P法检测Ⅱ型胶原。结果标准组及实验1、2、4、5组镜下可见软骨细胞在空泡内分裂增殖;标准组及实验1、5组透射电镜下可见基质的外分泌;标准组及实验1、2、4、5组在1、2周Ⅱ型胶原免疫组化检测可见空泡内软骨细胞周围出现阳性棕色颗粒;标准组及实验1、5组3条细胞生长曲线相近。结论支架中抑肽酶和氨甲环酸的浓度低于10 000 KIU/ml和20 mg/ml时,对软骨细胞繁殖、表型维持、基质分泌无不良影响。 | 张力 田京 王亮 于博 李奇 | 2009 | 山东医药2009，49，36： | 1 |
| 10 | 尺骨冠状突骨折对肘关节稳定性影响显示文摘目的用实验方法分析尺骨冠状突骨折不同类型对肘关节稳定性的影响。方法选取上肢尸体标本4对,用生物力学机测试各种冠状突骨折时肘关节外翻及外旋稳定性。结果肘关节伸直外翻位移及外旋转角在冠状突无骨折、Ⅰ型骨折、Ⅱ型骨折,各组间无显著差异,冠状突Ⅲ型骨折时显著增大。结论冠状突骨折情况下,Ⅰ型、Ⅱ型骨折时肘在伸直外翻位及在伸直外旋位是稳定的,应以保守治疗为主,Ⅲ型骨折时不稳定,应该手术修复冠状突骨折。 | 宋景仑 王鹏程 张奉琪 王俊江 宋向青 | 2008 | 中国医疗前沿(学术版)2008，3，1： | 0 |
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