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| 1 | 西罗莫司诱导急性髓系白血病U937细胞白噬及凋亡显示文摘目的探讨西罗莫司对急性髓系白血病U937细胞的自噬以及凋亡的影响。方法常规方法复苏、传代培养U937细胞,然后分为4组:正常对照组和西罗莫司12h处理组、24h处理组和48h处理组,分别以2μmol/L西罗莫司处理12h、24h和48h后收集细胞,观察西罗莫司不同时间点处理后U937细胞形态和生长状态的变化。采用细胞增殖及毒性检测试剂盒(CCK-8)法检测细胞的生存率;AnnexinV—FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡;采用实时定量PCR(RT—PCR)方法检测西罗莫司处理U937细胞不同时间点后,自噬标志性蛋白微管相关蛋白轻链3Ⅱ(LC3-Ⅱ)基因mRNA表达水平的变化;Western blot方法检测西罗莫司处理U937细胞不同时间点LC3-Ⅱ蛋白表达水平的变化。结果倒置显微镜下可见西罗莫司处理12h、24h和48h后U937细胞数量逐渐减少,体积变小,细胞碎裂,细胞核固缩及细胞碎片增多;随着时间的延长,U937细胞生存率逐渐下降,与对照组比较差异有统计学意义(P=0.031);西罗莫司处理U937细胞12h、24h和48h后,U937细胞凋亡率逐渐增加,与对照组比较差异有统计学意义(P=0.027);西罗莫司处理U937细胞12h、24h和48h后,LC3-ⅡmRNA表达和蛋白的表达量均下调,与对照组比较差异有统计学意义(P=0.029)。结论西罗莫司可诱导U937细胞发生自噬和凋亡。自噬标志性蛋白LC3-Ⅱ在基因和蛋白水平上表达均下调,提示TC3-Ⅱ可能在调控白血病细胞自噬中发挥重要作用。 | 许文锋 冯晓勤 李春富 吴学东 何岳林 张玉明 裴夫瑜 | 2015 | 中华实用儿科临床杂志2015，30，17： | 2 |
| 2 | 线粒体自噬受体Nix蛋白的原核表达及其纯化显示文摘目的获得可用于蛋白晶体筛选的高纯度及构象均一的Nix蛋白。方法将Nix截断基因构建到原核载体并转化大肠杆菌。异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后通过GST柱亲和纯化目标蛋白。TEV酶切除GST标签后采用凝胶过滤层析进一步纯化。结果 Nix截断基因成功构建到p GEX-4T-2并诱导表达了目标蛋白。通过GST亲和层析得到了可溶性的携带GST标签的Nix(2∽135)蛋白。切除GST标签的Nix(2∽135)通过凝胶过滤层析得到了构象均一的单体蛋白。结论采用原核表达、亲和层析和凝胶过滤层析可获得纯度高且构象均一的单体Nix蛋白。 | 熊英环 林千文 吴湘涛 张星亮 | 2015 | 广东医学院学报2015，33，4： | 0 |
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