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| 1 | 反式-4-羟基-L-脯氨酸的研究进展显示文摘反式-4-羟基脯氨酸是胶原蛋白中特有的一种氨基酸,在动物体内具有重要的生理功能与独特的生物活性,广泛地应用于医药、化工、美容、疾病诊断等领域.介绍了反式-4-羟基脯氨酸的代谢、功能和应用,并着重对反式-4-羟基脯氨酸的生产方法进行综述,在此基础上探讨了生产反式-4-羟基脯氨酸的研究方向,为利用全细胞催化法和发酵法生产反式-4-羟基脯氨酸提供参考依据,同时展望了未来工业化生产反式-4-羟基脯氨酸发展方向. | 朱亚娟 彭青 陈艳 张振宇 柳鹏福 吴杰群 储消和 | 2018 | 发酵科技通讯2018，47，2： | 5 |
| 2 | 重组大肠杆菌多基因串联表达合成反式-4-羟基-L-脯氨酸显示文摘[目的]得到表达多个基因的重组大肠杆菌,以期实现葡萄糖为碳源生产反式-4-羟基-L-脯氨酸。[方法]以菌液为模板,PCR得到不同来源的proB、proA、proC、p4h基因,重叠PCR串联相邻基因,所得片段通过无缝组装与p ET-28a载体连接,并在大肠杆菌BL21中表达,筛选阳性表达菌株,电泳及测序验证,重组菌在30 ml MCG培养基摇瓶中发酵,分光光度法和HPLC检测产量。[结果]0.5 mmol/L IPTG诱导24 h,5组串联基因成功在大肠杆菌中表达,并以葡萄糖为碳源,获得产物反式-4-羟基-L-脯氨酸,培养基不添加L-脯氨酸时E.coli BL21/p ET-28a-BAHHbs、E.coli BL21/p ET-28a-HBACkp和E.coli BL21/p ET-28a-HBAmg产量达到0.28 g/L、0.16 g/L和0.29 g/L,添加4 mmol/L的L-脯氨酸时,分别为0.64 g/L、0.55 g/L和0.74 g/L。[结论]proB、proA、proC及p4h基因成功在大肠杆菌中表达,5株重组菌在30℃摇瓶中诱导表达24 h得到产物反式-4-羟基-L-脯氨酸,其中E.coli BL21/p ET-28a-HBAmg产量达到0.74 g/L,为今后在发酵罐中生产奠定基础。 | 盛花开 衣玉兰 李志敏 叶勤 | 2016 | 生物技术2016，26，1： | 4 |
| 3 | putA与vgb基因对反式-4-羟基-L-脯氨酸产量的影响显示文摘反式-4-羟基-L-脯氨酸是在自然界中分布最广泛的一种羟脯氨酸,在医药、化工、食品和美容业等领域有广泛应用。为了在生物转化法生产反式-4-羟基-L-脯氨酸的过程中减少菌体对底物脯氨酸的降解,利用Red/ET同源重组系统敲除putA基因,并比较野生型菌株与缺失型菌株在不同培养基中的反式-4-羟基-L-脯氨酸产量,再引入vgb基因,考察该基因对反式-4-羟基-L-脯氨酸产量的影响。结果表明:putA基因的缺失能阻止菌体降解脯氨酸;碳源充足的情况下,GC培养基更有利于反式-4-羟基-L-脯氨酸的生产;putA基因缺失型菌株能将被消耗的脯氨酸全部转化为反式-4-羟基-L-脯氨酸;vgb基因的存在能显著提高反式-4-羟基-L-脯氨酸的产量。 | 张胜利 林凡 刘合栋 张震宇 孙付保 夏紫薇 | 2016 | 食品与生物技术学报2016，35，12： | 3 |
| 4 | 重组大肠杆菌产普鲁兰酶发酵条件优化显示文摘在7L发酵罐规模,利用自诱导培养方式,对重组大肠杆菌产普鲁兰酶发酵条件进行优化研究,主要考察了发酵过程中控制溶解氧浓度、pH和采用补料策略对菌体生长和普鲁兰酶表达的影响。结果表明,最佳发酵培养条件:溶氧浓度维持在20%-30%;pH保持在7.60;第9h时,以0.8g/(L·h)的速度流加甘油;在20h,以0.2g/(L·h)的速度流加乳糖。此条件下,重组菌的细胞浓度OD600nm从12.58上升到42.25,提高了3.36倍;普鲁兰酶酶活力从356U/ml上升到1200U/ml,提高了3.37倍。 | 王小兰 穆晓清 徐岩 聂尧 | 2015 | 食品与发酵工业2015，41，7： | 2 |
| 5 | 提高产反式-4-羟脯氨酸工程菌产量的发酵策略显示文摘为了实现羟脯氨酸的高产,首先以缺陷型菌株E.coli JM109ΔargB/pUC19-BH作为实验菌,通过单因素优化及正交试验,优化得到新的培养基配方及培养条件。其次通过基因工程手段引入透明颤菌血红蛋白VHB基因,构建菌株E.coli JM109ΔargB/pUC19-BHV,进行高密度发酵。结果显示,发酵培养基为:麦芽糖10 g/L,甘油5 g/L,胰蛋白胨22 g/L,K2HPO44 g/L,FeSO4(Fe2+∶VC=1∶1)5 mmol/L,MgSO4·7H2O 1.7 g/L,Nacl 3 g/L,Cacl20.005 g/L;培养条件为:初始pH 8.5,温度30℃,接种体积分数4%,转速220 r/min。此条件下,菌株E.coli JM109ΔargB/pUC19-BH羟脯氨酸产量约为1602 mg/L,约为优化前的1.4倍.在7 L罐发酵培养,菌株E.coli JM109ΔargB/pUC19-BHV的羟脯氨酸产量约为18.3 g/L,与JM109ΔargB/pUC19-BH相比,提高了13.2%,说明VHB基因的引入有利于羟脯氨酸产量提高. | 王晓姣 杨慧敏 张震宇 孙付保 周豪 | 2019 | 食品与生物技术学报2019，38，11： | 0 |
| 6 | 以甘油为碳源发酵高产反式-4-羟脯氨酸菌株的选育及营养优化显示文摘以低品级甘油为碳源进行微生物发酵合成反式-4-羟脯氨酸(Trans-4-hydroxy proline,Hyp)的探索。从实验室构建的重组菌E.coli BL21(DE3)/p UC19-ptrp2-Hyp出发,通过易错PCR随机突变和常压室温等离子体复合诱变处理,利用单菌落琼脂块和氨基酸显色相结合高通量筛选出1株以甘油为唯一碳源的Hyp高产菌P71。与葡萄糖培养基相比,该菌株更适合在甘油上生长并转化L-脯氨酸合成Hyp,发酵20 h产Hyp高达1.20g/L,比生长在葡萄糖培养基上高70%以上;比其出发菌株在葡萄糖培养基上产量提高了1倍以上。通过培养基成分系统优化,发现胰蛋白胨、Fe SO4和L-脯氨酸是3大主要影响因素,最适加量分别为7.01 g/L、11.51 g/L和1.41 mmol/L;在该条件下突变菌株摇瓶发酵12 h产Hyp达1.61 g/L,比优化前提高了50%。 | 王金霞 黄建华 于林 张震宇 岳春 孙付保 | 2016 | 食品与发酵工业2016，42，7： | 0 |
| 7 | 乳糖诱导脯氨酸羟化酶高效表达研究显示文摘研究了乳糖诱导重组大肠杆菌表达脯氨酸羟化酶与L-脯氨酸生物转化。结果表明,将种子液按1%的比例接种于含有0.8%乳糖发酵培养基中,在28℃、140 r/m条件下,培养约2 h,在分光光度计波长为600 nm,OD值为0.6~0.8条件下,再诱导培养13 h,离心收集菌体,按质量体积比1 g∶100 m L(菌体量∶转化液)向菌体中加入转化液,在28℃条件下能高效进行L-脯氨酸转化生成L-羟脯氨酸,转化率达到98.6%。本研究为L-脯氨酸生物转化实现工业化生产奠定了基础。 | 马乐辉 李存会 | 2018 | 煤炭与化工2018，41，7： | 0 |
| 8 | 反式-4-羟基-L-脯氨酸发酵菌株的筛选显示文摘为选育出反式-4-羟基-L-脯氨酸发酵生产的优良菌株,以8株产反式-4-羟基-L-脯氨酸的大肠杆菌(Escherichia coli)为出发菌株,对其生长特性、发酵效率进行了比较分析,筛选出2株遗传稳定性好、生产效率高的菌株Hyp-Y1801、Hyp-Y1808,其发酵效价分别为50.4、47.5 g/L,对实现反式-4-羟基-L-脯氨酸的工业化生产具有重要意义。 | 李春玲 丁亚莲 谢文静 牛春 张萍 | 2019 | 中国兽药杂志2019，53，1： | 0 |
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