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| 1 | 运动对Mstn基因编辑与非编辑牛血清代谢的影响显示文摘肌肉生长抑制素(myostatin,Mstn)基因是目前研究较为透彻、并具有良好应用前景的肌肉发育抑制因子。Mstn基因具有较为广泛的内分泌特性,不仅负调控肌肉发育,而且调节糖、脂、蛋白等代谢过程。本研究分别以Mstn基因编辑牛(Bos taurus)与正常对照牛为研究对象,分析这两类牛血清中的糖、脂类和氨基酸等关键代谢物含量在运动和摄食影响下的变化情况。结果表明,Mstn-/+牛的空腹血糖显著低于对照组(P<0.05),运动后Mstn-/+牛和对照牛血糖含量均下降,且Mstn基因突变加快了这一变化过程。血清中胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白的含量变化相对稳定,无论是运动还是摄食都不能改变Mstn-/+牛和对照牛的差异趋势。血清中游离脂肪酸的检测结果显示,空腹状态下,运动会显著降低Mstn-/+牛血清中饱和脂肪酸含量,同时升高不饱和脂肪酸的水平(包括单不饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸)。从血清中氨基酸水平来看,Mstn突变提高了牛血清中的必需氨基酸和非必须氨基酸的浓度,而运动和摄食不会显著影响血清中氨基酸的水平。本研究结果对于深入了解Mstn基因功能,探索Mstn的代谢调控机制具有一定的指导意义。 | 周新宇 魏著英 陈晨 谷明娟 朱琳 武云喜 张莹 白春玲 李光鹏 | 2020 | 农业生物技术学报2020，28，12： | 4 |
| 2 | CRISPR/Cas9技术在家禽育种方面的应用显示文摘作为一种重要的基因工程技术,基因编辑自出现以来一直倍受关注。近年来,基因编辑技术发展更为迅速,从锌指核酸酶技术(ZFN)的开发利用到转录激活因子效应物核酸酶(TALEN)技术的熟练运用,再到规律成簇间隔短回文重复序列(CRISPR)技术的发现,基因编辑技术在不断地自我更新和完善的过程中推动着生命科学的发展和进步。综述了基因编辑技术的发展以及CRISPR/Cas9系统的组成和作用机制,介绍了其在家禽功能基因研究上的应用,及其在具有经济价值的基因模型制备中的应用,并探讨了目前CRISPR/Cas9技术在家禽方面存在的一些不足之处,旨在为家禽育种相关研究提供参考。 | 庄重 赵龙 白皓 毕瑜林 黄应权 陈国宏 常国斌 | 2022 | 中国农业科技导报2022，24，1： | 2 |
| 3 | CRISPR/Cas系统在禽畜中的应用前景显示文摘CRISPR/Cas系统是一种能对基因组进行高效编辑的新技术,与锌指核酸酶和转录激活效应因子核酸酶相比,该系统简单方便、易掌握。该技术将在禽畜的遗传育种、性状改良、疾病防治等研究中发挥着积极的作用。随其不断发展与应用,将迅速地推动禽畜业的发展。本文主要针对CRISPR/Cas系统的基本结构、作用原理及这一技术在禽畜上的应用前景进行简要论述。 | 朱建勇 | 2015 | 畜牧与兽医2015，47，3： | 2 |
| 4 | CRISPR/Cas9基因编辑技术在绵羊中的应用研究进展显示文摘随着基因编辑技术的迅速发展,研究者利用基因编辑技术在越来越多的领域中取得了许多突破性的进展。目前,众多的基因编辑工具中CRISPR/Cas9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein 9)系统应用最为广泛。CRISPR/Cas9及其衍生出的碱基编辑器(base editor,BE)和先导编辑器(prime editor,PE)系统使研究者可以在目标基因组中简单、高效地完成碱基的删除、插入和替换等修饰。CRISPR/Cas9相关基因编辑技术在生产具有特定遗传特征的动物方面有巨大的潜在价值。绵羊作为具有许多重要经济性状的家畜,是理想的基因工程研究大动物模型。CRISPR/Cas9相关基因编辑技术已经用于绵羊基因组工程研究,如生产具有优良特性的品种,利用乳腺生产疾病治疗药物,构建用于人类疾病和再生医学研究的动物模型。作者从CRISPR/Cas9基因编辑技术的原理出发,着重阐述了利用CRISPR/Cas9系统进行基因编辑的具体流程,并概述了CRISPR/Cas9系统在绵羊研究和生产中的应用情况。 | 徐鑫 刘明军 | 2022 | 中国畜牧兽医2022，49，11： | 1 |
| 5 | 山羊CSN2基因内含子7靶向的CRISPR-Cas9系统高效切割位点筛选显示文摘【目的】使用CRISPR-Cas9系统在山羊CSN2基因座内含子7上筛选出高效的切割位点.【方法】根据'20N+NGG'原则在CSN2内含子7序列中设计了5个sgRNA靶向位点.分别连接具有sgRNA到和Cas9表达框的PX330-P2A-eGFP载体上,通过脂质体转染到实验室保存山羊胎儿成纤维细胞系中,PCR扩增转染阳性的细胞基因组CSN2内含子7序列,连接到Pmd19-T载体中,测序比较不同的sgRNA介导切割产生的突变.【结果】使用5个sgRNA均可以在山羊CSN2基因内含子7上造成有效切割,产生碱基删除或者插入突变.实验设计的5个sgRNA介导的CRISPR-Cas9系统效率均在30.7%以上,效率最高的2号位点(sgRNA2)介导的切割效率达到了61.5%.【结论】研究确定了CRISPR-Cas9系统在山羊CSN2基因内含子7内进行高效切割的sgRNA,为之后在该基因位点进行高效的非同源介导基因敲入奠定了基础. | 申培磊 高珊 贾启鹏 张勇 | 2017 | 甘肃农业大学学报2017，52，1： | 1 |
| 6 | 绵羊胚胎FGF5基因单碱基突变体系的建立显示文摘研究旨在利用单碱基编辑技术定点修饰绵羊(Ovis aries)成纤维细胞生长因子5(fibroblast growth factor 5,FGF5)基因第1外显子以引入终止密码子,获得定点编辑类型的绵羊胚胎,为培育具有长毛性状的绵羊提供试验材料。首先设计合成4个单导向RNA(single guide RNA,sgRNA)寡核苷酸链(sgRNA-T1~sgRNA-T4),构建4组不同的重组表达载体;将构建好的pGL3-U6-sgRNA-PGK-puromycin和pCMV-AncBE4max-P2A-GFP质粒以共转染的方法分别转入4组绵羊成纤维细胞,随后用CruiserTM酶对转染的细胞进行活性检测并在胚胎水平进行测序验证。结果显示,sgRNA-T1和sgRNA-T4组细胞的PCR产物可被CruiserTM酶酶切,且测序结果表明都具有靶向效果,编辑效率分别为68.75%和47.37%。利用显微注射技术将不同浓度的AncBE4max mRNA与有效sgRNA混合注射到绵羊孤雌激活胚胎中,并检测胚胎卵裂率、囊胚率和编辑效率,结果显示,胚胎水平的最佳注射浓度组合为AncBE4max(ng/μL)∶sgRNA(ng/μL)=100∶50,从该浓度组中随机挑选的单枚胚胎测序结果显示,引入终止密码子的编辑效率为80%。而sgRNA-T1在不同浓度组合的注射胚胎中均未检测到编辑。本研究针对FGF5基因的第1外显子,通过在成纤维细胞转染表达载体,成功筛选到高效靶向绵羊FGF5基因的2个sgRNA(T1、T4);通过显微注射绵羊孤雌激活胚胎,成功在胚胎上实现FGF5基因第1外显子打靶位点C→T的转变,为后期FGF5基因定点编辑羊的生产奠定基础。 | 蒙亚琦 姚旭东 任秀美奥 郭延华 唐红 张译元 王立民 周平 | 2021 | 中国畜牧兽医2021，48，10： | 1 |
| 7 | Myostatin基因编辑家畜研究进展显示文摘肌肉生长抑制素基因(Myostatin,MSTN)是转录生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)超家族成员,是骨骼肌生长的负向调节剂。MSTN基因突变会引起成肌细胞数量增加,进而导致动物前后肢、肩、臀等部位的肌肉群异常发达而呈现“双肌”性状(double muscle phenomenon,DMP)。MSTN基因展现出的可以作为家畜育种的分子标靶基因的潜力,使得MSTN基因及其调控的研究成为家畜育种中生长发育与产肉性状相关研究中的热点。近年来,利用基因编辑技术对猪、牛、羊等家畜的MSTN基因进行编辑以提高其产肉性能取得了积极的进展。文章对MSTN基因进行概述,并对MSTN基因在猪、牛、羊中的基因编辑实例进行总结,为今后家畜MSTN基因编辑提供参考。 | 金晨 王若茜 刘通 李运生 | 2022 | 黑龙江动物繁殖2022，30，5： | 0 |
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