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1Identification of novel nuclear localization signal within the ErbB-2 protein显示文摘ErbB2, a member of the receptor tyrosine kinase family, is frequently over-expressed in breast cancer. Proteolysis ofthe extracellular domain of ErbB2 results in constitutive activation of ErbB2 kinase. Recent study reported that ErbB2is found in the nucleus. Here, we showed that ErbB2 is imported into the nucleus through a nuclear localization signal(NLS)-mediated mechanism. The NLS sequence KRRQQKIRKYTMRR (aa655-668) contains three clusters of basicamino acids and it is sufficient to target GFP into the nucleus. However, mutation in any basic amino acid cluster of thisNLS sequence significantly affects its nuclear localization. Furthermore, it was found that this NLS is essential for thenuclear localization of ErbB2 since the intracellular domain of Erb2 lacking NLS completely abrogates its nucleartranslocation. Taken together, our study identified a novel nuclear localization signal and reveals a novel mechanismunderlying ErbB2 nuclear trafficking and localization.Qiao Qiao CHEN Xiao Ying CHEN Yun Yun JIANG Jing LIU 2005Cell Research2005,15,7:9
2丁酸钠和丙酸钠对工程CHO细胞生长代谢和嵌合抗体表达的影响显示文摘抗p185 erbB-2基因工程抗体是一种有潜力的抗肿瘤药物.以稳定表达抗p185嵌合抗体的重组工程CHO细胞株为对象,分别用不同浓度丁酸钠(0~2mmol/L)和丙酸钠(0~10mmol/L)对处在对数生长期的细胞进行处理,在连续5d的培养过程中,每隔24h取样测活细胞数量,并用ELISA检测上清中抗体含量,5d后结束培养用FACS检测细胞周期.同时还用丁酸钠和丙酸钠处理长至90%满度的细胞,然后每隔12h取样一次检测葡萄糖和乳酸的含量.结果表明丁酸钠和丙酸钠可以有效地提高嵌合抗体在工程CHO细胞中的表达,表达量最高时可达58.3~59.6mg/L,是对照组的1.5倍.同时抑制细胞生长和阻断细胞周期在G1期,并且可减少培养过程中葡萄糖的消耗和乳酸的生成.和丁酸钠相比,丙酸钠具有较小的细胞毒性,是一种有潜力的替代品.马军 董艳秋 邹珉 程联胜 刘兢 2005中国生物工程杂志2005,25,10:7
3抗HER-2嵌合抗体chA21对SKBR3细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用显示文摘目的探讨抗HER-2嵌合抗体chA21在体外抑制高表达HER-2的人乳腺癌SKBR3细胞增殖并诱导其凋亡的作用。方法采用MTT比色法、HE染色、透射电镜、流式细胞术(FCM)、原位末端标记技术(TUNEL)等方法观察和检测chA21对人乳腺癌SKBR3细胞增殖的抑制和凋亡的诱导。结果chA21(0.2~5.4mg.L^(-1))可抑制SKBR3细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用呈剂量和时间依赖性。结论chA21在体外可抑制SKBR3细胞的增殖,诱导其凋亡是其主要作用途径之一。薛花 吴强 胡向阳 凌晓光 杨枫 程联胜 刘兢 2007中国药理学通报2007,23,11:5
4富含二硫键的膜蛋白p185胞外区在大肠杆菌中的可溶性表达和性质鉴定显示文摘Her2/c_erbB_2基因(其产物为膜蛋白p185)是表皮生长因子受体(EGFR)基因家族的一员,在约30%的乳腺癌中发现了其过量表达。为了鉴定抗p185单克隆抗体的抗原表位并进一步研究它们的相互作用,采用PCR的方法从含Her2/c_erbB_2基因的pBabe/erbB_2质粒中扩增了p185胞外区的富含二硫键的第一、二结构域和第四个结构域。产物克隆到pGEX/4T_1载体后,转化大肠杆菌OrigamiB(DE3)pLysS菌株,用低浓度IPTG进行低温过夜诱导后将菌体压力破碎,SDS_PAGE检测表达上清,得到了可溶性表达的融合有GST的目的蛋白。经ELISA、Westernblot等方法鉴定,可溶性表达产物具有完全的抗体结合活性,且当用凝血酶把GST切掉后该活性仍然保留。p185胞外区融合蛋白的成功表达将为二硫键富含类蛋白的表达提供参考;并为将来具有肿瘤细胞生长抑制活性的抗p185单克隆抗体的抗原表位鉴定,以及为EGFR家族受体的结构和功能关系的研究打下基础。李良维 刘海波 胡思怡 梁顿 程联胜 刘兢 2005生物工程学报2005,21,4:4
5抗ErbB2嵌合抗体chA21大规模纯化工艺的建立及质量研究显示文摘自行研制的抗ErbB2嵌合抗体chA21具有抑制高表达ErbB2的乳腺癌细胞生长的作用。在前期小规模培养和纯化工作的基础上,以填充床生物反应器大规模培养CHO工程细胞株表达的上清为原料,采用亲和层析、凝胶过滤除盐、阳离子交换层析、分子筛等步骤,分离纯化嵌合抗体chA21,建立了大规模纯化工艺,并按照中国药典(2005年版第三部)对最终产品进行全面鉴定和质量控制。该工艺能有效解决抗体纯化过程形成的多聚体问题,去除内毒素和DNA残留;可以确保每批纯化20~40L培养上清,每批收获嵌合抗体可达5g以上,蛋白总回收率大于50%,纯度可达98%。研究结果表明,该抗体纯化工艺得率高,质量控制方法稳定可靠,适用于大规模生产。傅璐 黄辉 陈舒扬 初波 刘兢 2009中国生物工程杂志2009,29,7:3
6抗HER-2工程抗体chA21和Herceptin对人卵巢癌SKOV3裸小鼠移植瘤的抑制作用显示文摘目的研究抗HER-2工程抗体Herceptin及chA21对高表达HER-2的人卵巢癌SKOV3裸小鼠移植瘤的生长抑制作用及其机制。方法建立人卵巢癌SKOV3裸小鼠移植瘤模型,随机分组,Herceptin和chA21均按30 mg/kg体重每周两次静脉注射,连续6周给药,观察肿瘤生长变化,计算抑瘤率;利用组织芯片及免疫组化方法结合显微图像分析系统定量检测肿瘤细胞Ki-67和NFκB的表达。结果Herceptin(30 mg/kg)和chA21(30 mg/kg)能显著抑制SKOV3移植瘤的生长,抑瘤率分别为51.12%和30.53%。Herceptin组和chA21组肿瘤组织Ki-67和NFκB的表达显著低于对照组(P<0.01),而两组之间比较统计学无显著性差异(P>0.05)。结论chA21和Herceptin均能抑制高表达HER-2的SKOV3移植瘤的生长。通过抑制NFκB的表达而影响肿瘤细胞的增殖是其可能的共同分子机制之一。凌晓光 吴强 薛花 杨枫 程联胜 刘兢 2006西安交通大学学报(医学版)2006,27,2:3
7抗ErbB2嵌合抗体chA21对SKBR3细胞的增殖抑制以及对PI3K/Akt和Erk1/2信号转导途径的影响显示文摘目的检测抗ErbB2嵌合抗体chA21对高表达ErbB2乳腺癌细胞SKBR3的增殖抑制作用,并分析抗体对细胞膜上ErbB2分布以及对细胞PI3K/Akt和Erk1/2信号转导途径的影响,探讨chA21的抑癌机制。方法采用MTT检测chA21对SKBR3的增殖抑制作用,流式细胞术检测经chA21处理后细胞膜上ErbB2抗原的分布变化,Western blot检测抗体作用后对细胞PI3K/Akt和Erk1/2信号转导途径的影响。结果chA21可抑制SKBR3细胞的增殖,其作用呈剂量和时间依赖性。抗体作用后可下调细胞膜上ErbB2含量,并不同程度下调细胞的PI3K/Akt和Erk1/2的活化水平。结论chA21可抑制SKBR3细胞增殖,可能通过下调细胞膜上ErbB2分布而减少其介导的PI3K/Akt和Erk1/2信号转导途径的活化来实现的。朱娟娟 赵斌 刘兢 2009中国药理学通报2009,25,11:3
8抗P185工程抗体表达与纯化研究显示文摘人类的原癌基因Her-2编码一个185kDa的跨膜受体酪氨酸激酶,也称为p185,是肿瘤相关蛋白,在多种癌细胞,特别在乳腺癌中有高表达。构建了抗p185/HER-2的二价的嵌合抗体(scFv-Fc),并证明其保留了亲本抗体的特异结合活性,进而建立了高表达的细胞株。对该嵌合抗体进行滚瓶大规模培养,并对培养产物的纯化条件进行了摸索,建立了亲和层析和阳离子交换层析两步法。最终产物的纯度在95%以上,回收率为63%。摸索了嵌合抗体的冻干保存条件,抗体可以保持其稳定性和结合活性一年以上。嵌合抗体纯化工艺和保存条件的确定,为进一步的临床研究奠定了基础。乔婧娟 刘海波 朱娟娟 程联胜 刘兢 2006中国生物工程杂志2006,26,9:3
9基因工程抗体增强紫杉醇诱导乳腺癌细胞SKBr3凋亡的作用显示文摘目的探讨抗p185c-erbB-2/neu基因工程抗体增强化疗药物紫杉醇诱导p185高表达的人恶性乳腺癌细胞系SKBr3凋亡的效应及其机制。方法采用MTS法检测基因工程抗体、紫杉醇及两者联合对SKBr3细胞增殖的抑制作用;用AnnexinV-FITC/PI法和流式细胞术定量分析SKBr3细胞的凋亡率;用Western blot技术分别检测AKt的Ser473位点、NF-κBp65亚基的磷酸化水平;用EMSA分析SKBr3细胞核内NF-κB与DNA的结合活性。结果基因工程抗体可增强紫杉醇对SKBr3细胞增殖的抑制作用,并可诱导细胞凋亡;基因工程抗体联合紫杉醇并可显著抑制SKBr3细胞中AKt/NF-κB途径。结论紫杉醇诱导乳腺癌细胞SKBr3凋亡的同时,可能通过激活AKt/NF-κB途径使癌细胞对紫杉醇产生耐药性。抗p185c-erbB-2/neu基因工程抗体联合紫杉醇是通过抑制AKt/NF-κB途径而增强紫杉醇诱导癌细胞凋亡的作用。尹荟菁 程联胜 2007中国免疫学杂志2007,23,3:2
10抗HER-2嵌合抗体chA21对SKOV3细胞增殖的抑制及诱导其凋亡的作用显示文摘目的探讨抗HER-2嵌合抗体chA21在体外抑制高表达HER-2的人卵巢癌SKOV3细胞增殖并诱导其凋亡的作用。方法采用MTT比色法、HE染色、透射电镜、流式细胞术及TUNEL染色法等观察和检测chA21对人卵巢癌细胞SKOV3增殖抑制和凋亡的诱导作用。结果chA21(0.2mg/L^5.4mg/L)可显著抑制SKOV3细胞增殖并诱导其凋亡,其作用呈剂量和时间依赖性。结论chA21在体外可显著抑制SKOV3细胞的增殖,诱导凋亡可能是其主要的作用途径。薛花 吴强 胡向阳 凌晓光 程联胜 刘兢 刘爱萍 2006细胞与分子免疫学杂志2006,22,1:2
11抗ErbB2嵌合抗体chA21聚集现象的鉴定和分析显示文摘聚集现象是目前基因重组抗体面临的挑战之一。采用高效排阻色谱(HPSEC)、动态光散射(DLS)、SDS-PAGE和间接ELISA鉴定抗ErbB2嵌合抗体chA21聚集的形式和性质,并比较温度和添加剂对抗体聚集程度、抗原结合活性的影响,用圆二色谱(CD)检测不同聚集条件下蛋白构象的变化,最后将抗体酶解分离分析聚集的部位。结果表明:chA21在溶液中可形成二聚和更高形式的聚集,聚集体是通过非共价键相互作用形成,并仍保留抗原结合活性,聚集程度和活性受温度和添加剂影响,而蛋白质的构象相对稳定,抗体可变区的相互作用可能是引起聚集的主要原因之一。对抗体聚集现象的分析有助于建立稳定的抗体保存条件,并为今后抗体进一步改造提供依据。朱娟娟 荣子烨 江冰 刘兢 2008生物工程学报2008,24,11:2
12曲妥珠单克隆抗体生物学活性检测方法的建立及比较显示文摘目的建立4种检测曲妥珠单克隆抗体Trastuzumab生物学活性的方法,并进行比较。方法利用表面等离子共振技术(Surface plasmob resonance,SPR)建立Trastuzumab的BIAcore分析方法,同时建立抗体对人乳腺癌SKBR3细胞增殖抑制活性的检测方法、基于SKBR3细胞的抗体结合特性检测方法及抗体与ErbB2抗原结合活性的ELISA检测方法,验证各方法的重复性,并对不同检测方法进行比较。结果 BIAcore法的偶联最佳pH值为5.0,样品浓度为0.05~5.00 nmol/L,动力学常数(KD)为0.19 nmol/L;Trastuzumab体外抑制SKBR3细胞增殖的半数有效浓度(EC50)为0.145μg/ml(R2>0.98);基于SKBR3细胞的抗体结合特性的EC50值为0.124μg/ml(R2>0.98);Trastuzumab抗体与ErbB2抗原结合活性的EC50值为0.143μg/m(lR2>0.98);4种检测方法重复性较好,检测结果基本一致。结论 4种检测方法均能有效地反映Trastuzumab的生物学活性,为快速、简便地筛选曲妥珠单克隆抗体提供了多种检测方法。周朝明 马新兴 周婧怡 林军 2011中国生物制品学杂志2011,24,2:2
13生物技术和药物研究进展显示文摘以单克隆抗体研究为例,从一个侧面介绍了生物技术及药物研究在中国科学技术大学的发展.先后研制过多种单克隆抗体.其中,用人α干扰素单克隆抗体制备的人α干扰素单克隆抗体亲和胶,成功地应用于干扰素的工业生产,解决了国内干扰素生产中的关键技术问题,并依此技术成立了安徽省第一家具有自主研发生物技术药物产品的生物技术公司;肿瘤抗原p185erbB-2/HER-2单克隆抗体有一种已被开发成肿瘤蛋白免疫组化诊断试剂,于2004年获得国家新药证书,现已转化为产品,另一种同类单抗正在用于抗体治疗药物的研发.此外,基于蛇毒抗栓组分的研究成果,与香港兆峰集团合资成立了兆峰科大药业公司,研发的蛇毒溶栓素已获得国家一类新药证书.今后更多的研发成果将在生物技术医药产业中得到应用.刘兢 2008中国科学技术大学学报2008,38,8:2
14Rapid Purification of a New Humanized Single-chain Fv Antibody/Human Interleukin-2 Fusion Protein Reactive against HER2 Receptor显示文摘Human embryonic kidney 293 cells were transfected with plasmid pcDNA-H520C9scFv-rhIL- 2 containing a chimeric cDNA encoding the humanized 520C9 scFv/recombinant human IL-2 fusion protein (H520C9scFv-rhIL-2). The transfected cells in plateau growing phase were cultured in serum-free medium for three days. The supernatant was collected, concentrated and purified using an affinity column packed with CNBr-activated Sepharose 4B coupled with anti-rhIL-2 mouse monoclonal antibody. The purified fusion protein was analyzed by ELISA, SDS-PAGE and Western blot. The fusion protein showed only one band in both silver stained electrophoresis gel and Western blot developed by ECL chemiluminescence system. Its molecular weight was confirmed to be about 45 kD. This fusion protein possessed binding specificity against p185 positive SKOV3 and B16/neu cells, and it might stimulate IL-2-dependent CTLL-2 cell prolifera- tion as well.Wei-YunZHANG Tak-ChunYIP Cheuk-SangKWOK 2004Acta Biochimica et Biophysica Sinica2004,36,10:2
15高表达HER2的自发转移性乳腺癌小鼠模型的建立与应用显示文摘目的:建立高表达HER2的自发转移性乳腺癌小鼠移植瘤模型,用于抗HER2抗体等靶向药物的药效学活性和作用机制研究。方法将重组HER2全长基因转染含有荧光素酶基因的小鼠乳腺癌细胞系4T1-Luc,用G418加压筛选,采用流式细胞术和免疫印迹方法鉴定4T1-Luc稳转细胞株中HER2表达。将细胞注射BALB/c小鼠或裸鼠皮下乳房垫,待肿瘤生长稳定后随机分为4组给药,即 PBS 对照、chA21、Trastuzumab 和抗体联合组。每周2次测量肿瘤体积,并计算抑瘤率。实验结束时用活体动物成像仪监测体内肿瘤转移情况。结果经过 G418筛选获得了多个4T1-Luc/HER2稳转细胞株克隆,流式细胞术和免疫印迹均证实HER2高表达。这些克隆均具有良好的成瘤性,细胞注射1周后可见肿瘤稳定生长,2~3周后可观察到肿瘤转移到肺、面部、腹股沟等部位。在BALB/c小鼠中,抗体联合组抑瘤率达43.3%,与 PBS 对照组之间的差异有显著性( P 〈0.05),并且明显优于抗体单用组抑瘤率( chA21组为11.1%,Trastuzumab 组为23%)。而且,抗体联合组在小鼠肺部的肿瘤转移灶的数目和荧光强度与对照组相比明显降低。结论成功构建高表达HER2的4T1-Luc乳腺癌细胞系并建立自发转移性乳腺癌小鼠模型。初步研究结果表明抗HER2抗体chA21与Trastuzumab联合使用具有良好的抗肿瘤生长和转移的作用。刘卉卉 胡思怡 沈国栋 张志辉 费保珍 刘兢 胡世莲 2014中国药理学通报2014,30,11:1
16抗HER-2抗体chA21对人乳腺癌SKBR3细胞凋亡的诱导作用及其机制显示文摘目的探讨抗HER-2工程抗体chA21在体外对高表达HER-2的人乳腺癌SKBR3细胞凋亡的诱导作用及其分子机制。方法采用透射电镜和原位末端标记技术(TUNEL)观察和检测chA21对SKBR3细胞凋亡的诱导,采用免疫细胞化学技术检测凋亡相关基因bc l-2、bax、Fas及caspase-3表达的改变。结果chA21作用72 h,可见SKBR3细胞凋亡,chA21高浓度组(5.4mg/L)凋亡指数显著高于低浓度组(0.2 mg/L)(P<0.01);chA21处理组SKBR3细胞的bax、Fas及caspase-3表达增加,而bc l-2表达及bc l-2/bax比值降低,上述改变在chA21高、低两个浓度组间有显著差异(P<0.01)。结论chA21在体外可诱导SK-BR3细胞凋亡,其分子机制与调节凋亡相关基因bax、bc l-2、Fas及caspase-3的表达有关。薛花 吴强 胡向阳 凌晓光 丁向东 程联胜 刘兢 2006临床与实验病理学杂志2006,22,2:1
17IL-17A单克隆抗体生物学活性检测方法的建立显示文摘目的建立2种检测IL-17A单克隆抗体的生物学方法。方法(1)利用BIAcore T200系统,基于表面等离子共振技术(surface plasmob resonance,SPR)的分析方法检测IL-17A的生物学活性。(2)采用IL-6释放抑制法测定IL17-A单克隆抗体生物学活性。结果采用SPR法获得的偶联最佳pH值为5.0,动力学常数为0.10086 nmol·L^(-1),样品浓度为2.0625~33 nmol·L^(-1);IL-6释放抑制法检测的曲线拟合常数R2均满足>0.95,相对活性均在80%~125%,多次试验的RSD≤20%,满足重复性验证标准,符合要求。结论2种检测方法的结果均较好,可以有效地反映IL-17A的生物学活性,可以简单、快速用于检测IL^(-1)7A单克隆抗体生物活性。陈莹莹 于秀梅 张驰 杨丽君 吴洁 李宛宸 郭常闰 2023中国现代应用药学2023,40,6:1
18Effects of an Engineered Anti-HER2 Antibody chA21 on Invasion of Human Ovarian Carcinoma Cell In Vitro显示文摘Objective: HER-2 plays an important role in the development and progression of ovarian carcinoma. A number of monoclonal antibodies (MAbs) and engineered antibody fragments (such as scFvs) against the subdomain II or IV of HER-2 extracellular domain (ECD) have been developed. We investigated the effect of chA21, an engineered anti-HER-2 antibody that bind primarily to subdomain I, on ovarian carcinoma cell invasion in vitro, and explored its possible mechanisms. Methods: Growth inhibition of SK-OV-3 cells was assessed using a Methyl thiazolyl tetrazolium (MTT) assay. The invasion ability of SK-OV-3 was determined by a Transwell invasion assay. The expression of matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) and its tissue inhibitors (TIMP-2) was detected by immunocytochemical staining, and the expression of p38 and the phosphorylation of p38 were assayed by both immunocytochemistry and Western blot. Results: After treatment with chA21, the invasion of human ovarian cancer SK-OV-3 cells was inhibited in dose- and time-dependent manners. Simultaneously the expression of p38, phospho-p38, MMP-2 and the MMP-2/TIMP-2 ratio decreased, while TIMP-2 expression increased. Additionally, the decrease in phospho-p38 was much greater than that of p38. Conclusion: chA21 may inhibit SK-OV-3 cell invasion via the signal transduction pathway involving MMP-2, TIMP-2, p38 and the activation of p38MAPK.Yi Gao Qiang Wu Zheng-sheng Wu Gui-hong Zhang An-li Zhang 2011Chinese Journal of Cancer Research2011,23,2:0
19细胞动粒蛋白Hec1启动子的结构及功能分析显示文摘细胞的分裂是一个严格调控,高度有序的过程.为了将复制后的染色体均匀、准确地传递给两个子细胞,细胞在分裂中后期受到纺锤体检验点的严格监控.Hec1定位于动粒,是纺锤体检验点调控的关键蛋白之一,它通过螺旋-螺旋结构域与其他动粒蛋白相互作用调节姐妹染色体的精确分离.为研究Hec1转录水平的调控机理,采用BLAST工具,从GenBank中搜索到了人Hec1基因上游的序列,并利用在线工具http://gffzz33c5a3edcb4f45a2hko9k5xcq0wqp695o.ffgz.tsg.suse.edu.cn/research/db/TFSEARCH.html提供的转录因子结合位点搜索引擎,对其5′启动子调节区段进行了分析.分析结果表明:在Hec1基因上游-200~-1序列内,存在E2F、ATF4和cAMP应答元件结合蛋白(CREB)等转录因子调控元件.在结构分析的基础上,提取HeLa细胞基因组DNA,用PCR方法克隆了Hec1基因启动子,并构建了多个含启动子不同区段的pGL3荧光素酶报告基因表达质粒.瞬时转染HeLa细胞后的结果表明,-70~-63以及-155~-144之间的启动子区对维持荧光素酶活性最为关键.凝胶迁移实验证明,这两个区段分别能够和转录因子CREB以及ATF4结合.随后,采用野生型的以及含有133位磷酸化位点突变的CREB转染HeLa细胞,通过荧光定量PCR实验发现,Hec1的表达水平分别出现明显上升和下降.该结果表明,Hec1表达的调控是通过CREB的活化来完成的.李良维 刘兢 姚雪彪 程联胜 2006中国生物化学与分子生物学报2006,22,11:0
20^(125)I标记的抗p185抗体的体外代谢与体内生物学分布显示文摘目的:研究125I标记的抗p185抗体(鼠mAbA21、人鼠嵌合抗体A21scFv-Fc及单链抗体A21scFv)在体外的细胞代谢和在体内的生物学分布,为其在诊断和治疗高表达p185肿瘤的临床应用提供依据。方法:通过FACS检测抗体是否与高表达膜表面抗原p185的SKOV3特异结合。采用氯胺T法进行碘标记抗体,用细胞放射免疫分析实验,检测抗体在SKOV3细胞中的代谢。建立荷SKOV3裸鼠模型,以观察抗体的体内生物学分布。结果:体外细胞代谢实验表明,抗体在与细胞膜表面结合后,进而被内吞入细胞,在细胞内降解和脱碘,最后被分泌出细胞外。体内药物代谢实验表明,抗体在动物体内肿瘤部位出现选择性放射性浓聚,而无关抗体未出现放射性浓聚,呈全身分布。结论:mAbA21,A21scFv-Fc和A21scFv对于高表达p185的卵巢癌在体内和体外都具有亲和力,可望用作高表达p185肿瘤的诊断和治疗。汪海洋 刘海波 董艳秋 杨建虹 程联胜 刘兢 2005细胞与分子免疫学杂志2005,21,5:0
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