沙门菌细聚合菌毛作为新型载体表达外源基因片段

查看全文 作　　者：[1]部小霞;Aaron [2]White;[1]王玲;[1]刘树林

机构地区：[1]北京大学医学部病原生物学系,卫生部中日友好医院检验科100083;[2]加拿大卡尔加里大学微生物学系

出　　处：《中华微生物学和免疫学杂志》索引2006年第26卷第11期,共5页

基　　金：国家教育部留学回国人员科研启动基金;国家自然科学基金(30370774);高等学校博士学科点专项科研基金资助课题(20030001029) 摘　　要：目的用减毒Salmonella typhimurium ST14028-3b菌株的细聚合菌毛(thin aggregative fim- briae)构建表达HIV-1 2F5抗原表位的载体。方法通过两步重叠PCR法(two step overlap extension PCR)构建重组体agfA::2F5,将重组体克隆至具有分离缺陷的温度敏感性低拷贝质粒pHSG415中,构成重组质粒pHSGAgfA2F5,然后经电穿孔法转化入ST14028-3b菌株中,经温度和抗生素选择压力进行等位基因置换,通过PCR筛选出含有外源基因的突变株,测序验证其序列的正确性。最后,用Western blot法检测菌毛蛋白的表达,黏附试验来证明含有外源基因的菌株Bu96的黏附能力。结果序列分析表明基因置换后的突变株在菌毛基因上含有外源基因2F5,且不含有质粒pHSG415的复制子序列。Western blot结果显示菌毛蛋白表达,黏附试验表明了菌株Bu96的黏附能力。结论利用具有分离缺陷的温度敏感性低拷贝质粒pHSG415,在ST14028-3b的细聚合菌毛编码基因agfA上插入表达2F5或其他外源基因的方法可行。本方法的最大优点在于不需要使用专门的菌株或抗生素抗性标记重组基因来进行位点特异性基因置换,同时也避免了在染色体上非目的DNA的出现。 关键词：基因置换外源基因的表达沙门菌细聚合菌毛质粒pHSG415

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