猪传染性胃肠炎病毒S基因B、C位点的克隆及原核表达载体的构建

查看全文 作　　者：[1]张春叶;[1]沈红;[1]李焕荣;[2]路苹

机构地区：[1]北京农学院动物科学技术系,北京102206;[2]农业应用新技术北京市重点实验室,北京102206

出　　处：《动物医学进展》索引2008年第29卷第9期,共5页

基　　金：农业应用新技术北京市重点实验室开放课题(KF2004-04);北京市教委科研计划资助项目(KM200810020001) 摘　　要：参考GenBank上公布的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因B、C抗原位点序列,应用Prim-er6.0设计一对含酶切位点的引物,用于RT-PCR扩增B、C抗原位点目的片段,将扩增产物连接于peasy-T克隆载体上,构建克隆载体,用EcoRⅠ和XhoⅠ对表达载体PET-32a(+)和重组质粒进行酶切,将酶切产物亚克隆至PET-32a(+)多克隆位点上,连接、转化至BL21(DE3),构建B、C位点的原核表达载体,并对阳性重组质粒进行酶切、PCR和测序鉴定。所扩增的目的片段的大小为357 bp,与原核表达载体连接后,经核苷酸及推导的氨基酸序列分析表明,该基因与其他猪传染性胃肠炎病毒相应基因具有很高的同源性,说明成功地构建了TGEV S基因B、C抗原位点的原核表达载体。TGEV S基因B、C抗原位点原核表达载体的成功构建,为TGEV诊断方法的建立提供良好的技术基础。 关键词：猪传染性胃肠炎病毒 S基因B C抗原位点克隆原核表达载体

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