美国黑核桃SSR反应体系优化

查看全文 作　　者：赵鹏 [1,2,3 ]Keith [3]E.Wosete [1]程飞 [1,4]张硕新索引

机构地区：[1]西北农林科技大学林学院,杨凌712100;[2]西北大学生命科学学院西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验,陕西710069;[3]美国普渡大学森林与自然资源系,农业部阔叶树种改良与更新中心,印第安纳西拉法叶47907;[4]陕西秦岭森林生态系统国家野外科学观测研究站,宁陕711600

出　　处：《植物研究》索引2012年第32卷第2期,共9页

基　　金：美国印第安纳州自然保护局核桃遗传与保护研究项目(#2041-0006);西北大学科研启动基金(PR11055) 摘　　要：优化SSR-PCR反应体系是黑核桃(Juglans nigra L.)SSR基因鉴定和群体遗传等研究的基础。本研究通过对PCR反应中Mg2+浓度、牛血清白蛋白(Bovine Serum Albumin,BSA)浓度、Taq聚合酶用量、dNTPs浓度、引物浓度和模板DNA量的组合以及PCR程序组合试验,确定了黑核桃SSR的最佳反应体系,即在10μL的PCR反应体系中,含10 ng模板DNA,0.1 mg.mL-1牛血清蛋白(BSA),0.25 mmol.L-1 dNTPs,1.5 mmol.L-1 Mg2+1μL 10XTaq DNA聚合酶反应缓冲液,0.5 U Taq聚合酶,1.0 mmol.L-1单对引物(0.5 mmol.L-13对引物)。SSR-PCR反应扩增程序为:94℃变性3 min;93℃变性15 s,50℃或者53.5℃退火1 min,72℃延伸30 s,32个循环;72℃后延伸10min,置4℃保存。利用此反应体系对黑核桃进行PCR扩增并电泳检测,其结果清晰、稳定、可靠,适合进一步对黑核桃群体遗传、基因型鉴定和分子生态研究。 关键词：黑核桃微卫星反应体系群体遗传

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