Cloning, expression and biocharacterization of OfCht5, the chitinase from the insect Ostrinia furnacalis

查看全文 作　　者：Qingyue Wu Tian Liu Qing [1]Yang

机构地区：[1]Department of Bioscience and Biotechnology, Dalian University of Technology, Dafian, China

出　　处：《Insect Science》索引2013年第20卷第2期,共11页

摘　　要：Chitinase 在几丁质催化 -1,4-glycosidic 连接并且由于它吸引了研究兴趣为 N 乙酰的准备是一个潜在的杀虫剂目标和一个酶的工具 -- D-glucosamine。一只单个昆虫包含编码 chitinases 的多重基因,它在域体系结构,表达式模式,生理的角色和生物化学的性质变化。此处, OfCht5, glycoside hydrolase 家庭从普遍鳞翅类的害虫 Ostrinia furnacalis 的 18 chitinase,被克隆,在酵母 Pichia pastoris 表示了并且生物化学地在一次尝试描绘了便于害虫控制和 biomaterial 准备。互补 DNA 顺序分析显示 OfCHT5 由 1 665-bp 核苷酸的一个开的读物框架组成了。系统发生的分析建议 OfCht5 属于这个组我昆虫 chitinases。在 Pichia pastoris 的 OfCht5 的表示与甲醇在正式就职的 120 h 以后导致了最高特定的活动。通过纯化的二步,由铵硫酸盐降水和金属 chelating 层析组成, recombinant OfCht5 的大约 7 mg 从 1 L 文化上层清液被净化到同质。OfCht5 有效地把胶体的几丁质变换成 chitobiose,但是向几丁质举办了相对低的活动。什么时候 chitooligosaccharides [(GlcNAc ) n, n= 36 ] 被用作底层, OfCht5 被观察拥有最高催化的效率参数向(GlcNAc ) 4 并且 predominantely hydrolyzed 从非减少的结束的第二张 glycosidic 契约。和 -N-acetyl-D-hexosaminidase OfHex1, OfCht5 在产出 N 乙酰的几丁质降级完成了它的最高的效率 -- D-glucosamine,珍贵药理学试剂和食物补充,在在 9 的范围的 OfCht5 对 OfHex1 的臼齿的集中比率以内:115:1。这个工作为杀虫剂和另外的应用提供一种选择给 chitinase 的存在准备。 关键词：昆虫几丁质酶亚洲玉米螟 D-氨基葡萄糖克隆 DNA序列分析金属螯合层析材料制备毕赤酵母

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