Sox4表达抑制对宣威地区女性肺癌细胞凋亡影响及其机制的探讨

查看全文 作　　者：周永春 [1,2 ]陈艳 [1,2 ]王熙才 [1,2 ]黄尤光 [1,2 ]金从国 [1,2 ]姚乾 [1,2 ][3]杨世华刘馨 [1,2 ][1,2]黄云超索引

机构地区：[1]昆明医科大学第三附属医院;[2]云南省肿瘤研究所,云南昆明650118;[3]昆明理工大学生命科学与技术学院,云南昆明650500

出　　处：《中华肿瘤防治杂志》索引2013年第20卷第8期,共8页

基　　金：国家自然科学基金(30872555);云南省卫生厅应用基础研究项目(2010NS078);云南省科技厅-昆明医科大学联合专项基金(2012FB067) 摘　　要：目的:研究靶向抑制sox4基因的表达对宣威地区女性肺癌细胞凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法:构建靶向抑制转录因子sox4的shRNA重组载体pGFP-V-RS-sox4shRNA并转染宣威地区女性肺癌细胞XWLC-05,以转染pGFP-V-RS-scramshRNA的XWLC-05细胞及亲本XWLC-05细胞作为对照,研究sox4表达抑制对Caspase-3表达、细胞形态、细胞周期和凋亡率等凋亡指标的影响。使用Caspase-3抑制剂z-VAD-FMK处理转染细胞,检测上述细胞凋亡指标。结果:成功构建了能高效抑制sox4基因表达的pGFP-V-RS-A-sox4shRNA重组载体;转染后48及72h,实验组细胞sox4mRNA表达水平分别为0.09±0.018及0.44±0.06,比转染后24h降低了88%和40%,与同一时段中的阴性对照及空白对照组相比表达水平明显降低(P<0.05),其中以转染后48h的抑制最为明显,而Caspase-3mRNA表达与阴性对照及空白对照组相比均明显升高(P<0.05),以48h升高最明显;空白对照组与阴性对照组间比较,转染48及72h后sox4mRNA(P=0.071;P=0.063)和Caspase-3mRNA(P=0.103;P=0.229)的表达水平差异无统计学意义;抑制sox4基因的表达后细胞出现典型的凋亡形态学改变;流式细胞术(FCM)检测显示,转染干扰质粒后48h,细胞出现明显的亚二倍体峰,实验组细胞的凋亡率平均为(34.8±3.37)%,显著高于阴性对照组(0.45±0.05)%及空白对照组(0.44±0.06)%,P均为0.000。经z-VAD-FMK阻断Caspase-3酶活性后,实验组细胞中活化的Caspase-3(13.6±1.76)%显著低于阴性对照组(50.5±6.15)%,差异有统计学意义,P=0.000;实验组细胞的凋亡率(10.8±1.05)%也明显低于阴性对照组细胞(38.3±3.16)%,P=0.000。结论:抑制sox4的表达可促进宣威地区女性肺癌细胞凋亡;转录因子sox4可能通过抑制Caspase-3依赖的凋亡途径而促进宣威地区女性肺癌的发生发展。 关键词：sox4 女性肺肿瘤宣威细胞凋亡基因表达

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