一种新的DyP-type过氧化物酶在大肠杆菌中的重组表达、纯化及鉴定

查看全文 作　　者：[1]汪立群 Alan [1]K.Chang [1]袁文杰 [1]白凤武索引

机构地区：[1]大连理工大学生命科学与技术学院,辽宁大连116024

出　　处：《生物工程学报》索引2013年第29卷第6期,共13页

摘　　要：染料脱色过氧化物酶(DyP-type过氧化物酶)是含有亚铁血红素,能降解各种有毒染料的一类蛋白。为了研究运动发酵单胞菌Zymomonas mobilis ZM4(ATCC 31821)中一种新的DyP-type过氧化物酶的特点和功能,以Z.mobilis基因组DNA为模板,通过PCR扩增目的基因,克隆到大肠杆菌表达载体pET-21b(+)中。通过ZmDyP与其他DyP-type过氧化物酶的比对,发现它们存在着共同保守氨基酸D149、R239、T254、F256和GXXDG结构基序,说明ZmDyP是Dyp-type过氧化物酶家族的一个新成员。经IPTG诱导大肠杆菌中pET21b(+)-ZmDyP表达,并将表达的酶进行金属螯合层析纯化。SDS-PAGE分析表明,纯酶分子量为36 kDa,而活性染色显示分子量为108 kDa,表明该酶在活性状态下可能是一个三聚体。光谱扫描显示ZmDyP有一个典型的亚铁血红素吸收峰,说明它是含有亚铁血红素的蛋白。对ZmDyP性质进行了研究,发现以2,2-二氨-双(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)ABTS为底物,ZmDyP表现出更高的转化效率。这些研究结果丰富了DyP-type过氧化物酶家族信息,并且为ZmDyP的结构功能和反应机制研究奠定了基础。 关键词：DyP-type过氧化物酶运动发酵单胞菌亚铁血红素蛋白表达纯化

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