长白山白眉蝮蛇毒类凝血酶Gussurobin基因的克隆、表达与纯化(英文)

查看全文 作　　者：[1]杨青;[1]胡学军;[1]许小明;[1]安利佳;[2]袁晓东;[3]苏志国;JANSON Jan-[4]Christer

机构地区：[1]大连理工大学化工学院生物工程研究所,大连116012;[2]宝生物大连公司,大连116600;[3]中国科学院化工冶金研究所生物化学工程国家重点实验室,北京100080;[4]BiosurfaceScienceCenter

出　　处：《生物化学与生物物理学报》索引2002年第34卷第1期,共5页

基　　金：辽宁省科学技术基金项目 (No .9930 5 0 0 1);瑞典政府NUTEK基金资助~~ 摘　　要：根据同源性 ,在高度保守的上游信号肽区域设计引物 ,通过RT PCR反应 ,从长白山白眉蝮蛇 (Gloydiusussurensis)毒腺总RNA中克隆得到类凝血酶 gussurobincDNA ,双向测序得到 gussurobin基因的全序列并由此推测出相应的氨基酸序列。与其他已知的类凝血酶不同 ,gussurobin只含有一个可能的糖基化位点 ,即Asn12 4 Ser12 5 Thr12 6。将gussurobin基因克隆到表达载体 pPIC9K中 ,电极转化至毕氏酵母菌株GS115中 ,经G418抗性筛选和营养缺陷型筛选获得重组子。经摇瓶培养 ,获得表达。经过柱层析分离 ,获得SDS PAGE电泳纯的重组gussurobin。 关键词：类凝血酶 gussurobin CDNA序列表达纯化长白山白眉蝮蛇蛇毒

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