健康成人24h尿液细胞外囊泡定量及大小分布

查看全文 作　　者：[1]林韩翡;[1]刘新宇;[1]徐小蒙;Luca [2]Musante;Harry [2]Holthofer;[1]邹和群

机构地区：[1]南方医科大学第三附属医院肾内科泌尿疾病研究所,广东广州510630;[2]CentreforBioAnalyticalSciences,DublinCityUniversity,RepublicofIreland

出　　处：《南方医科大学学报》索引2015年第35卷第11期,共6页

基　　金：欧盟第七框架计划资助项目(Uro Sense-286386);中国南方智谷引进创新团队和项目(CXTD-001);广东省科技厅科技计划项目(2014A020212196);南方医科大学科研启动计划项目(PY2014N094) 摘　　要：目的研究观察健康成人24 h尿液细胞外囊泡(u EVs)数量、大小分布及个体间差异。方法利用液压透析滤过法分离9名健康成年人24 h u EVs,通过western blot(WB)和透射电镜(TEM)技术验证u EVs的分离效果,应用BCA蛋白定量法及纳米微粒跟踪分析技术分别对富集的u EVs样品进行蛋白定量测定和囊泡数量及大小分布的分析。结果 TEM下可见大小不等、形状不一的囊泡。WB技术检测到外泌体的标记物—人肿瘤易感基因(TSG101)。9名健康成人24 h尿液分离的u EVs样品蛋白定量范围为132.50~760.70 ng/m L。纳米微粒跟踪分析技术检测结果显示24 h u EVs数量为(3.56~5.12)×1012个,CV=14.23%。24 h分泌的u EVs中,直径在〈40 nm范围内的囊泡占所检测到的总囊泡数的0.04~0.69%,数量为(1.80~26.49)×109个;符合外泌体直径范围(40~100 nm)的囊泡占总囊泡数的22.07%~42.08%,数量为(1.00~1.77)×1012个。符合微囊泡直径范围(100~1000 nm)的囊泡约占总囊泡数的57.88%~77.85%,数量为(2.09~3.86)×1012个。结论新型液压透析滤过法能高效、便捷地实现大样本尿液u EVs的分离。健康成人分泌的24 h u EVs个体间差异较小,是u EVs相关研究较理想的标本来源。 关键词：尿液细胞外微囊泡外泌体纳米颗粒跟踪分析

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