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| 1 | 离子注入改良维生素C二步发酵混合菌研究(Ⅰ)2-酮基-L-古龙酸高产菌系IPPM-1028的选育显示文摘利用离子注入技术选育出2-酮基-L-古龙酸高产菌系IPPM-1028,其转化率较出发菌M-2980提高18.8%。经传代实验证明,其遗传性状较为稳定,4代平均转化率可达95.0%。 | 许安 姚建铭 余增亮 | 1998 | 工业微生物1998，28，4： | 41 |
| 2 | L-山梨糖脱氢酶的纯化及性质的研究显示文摘从5L罐发酵L-山梨糖的Gluconobacter SCB329和Bacillus thuringiensis SCB933混合菌株中差速离心收集SCB329菌体,破碎,离心获得无细胞抽提液,硫酸铵分级沉淀蛋白后依次经DEAECellulose 52和Q Sepharose FF柱层析分离得到了L-山梨糖脱氢酶(SDH),它能将L-山梨糖脱氢氧化为L-山梨酮,SDS-PAGE电泳测得分子量约为60KD。动力学性研究表明它为一个典型的Michaelis-Menten氏酶,对L-山梨糖作用的Km值为 52.7 ×10-3mol/L,对DCIP作用的Km值为 2.06 × 10-3mol/L,最适作用pH和温度分别为7.0和42℃。Mg2+,Ca2+是酶的激活剂,Cu2+是酶的抑制剂,EDTA对该酶也有明显的抑制作用。不同碳源对酶活的影响研究表明它在SCB329中是组成型表达。 | 薛震役 尹光琳 | 2000 | 微生物学通报2000，27，2： | 20 |
| 3 | 生物技术法生产维生素C的研究进展显示文摘维生素C是一种重要的有机酸,广泛应用于药物、食品、饮料、化妆品和饲料等中。相对于'莱氏法'而言,生物技术法生产维生素C具有低成本、高品质等优势,其主要包括一步发酵工艺和二步发酵工艺,而后者又包括以葡萄糖为底物的串联工艺和以D-山梨醇为底物的工艺。在对比各种生产方法的基础上,鉴于以D-山梨醇为底物的发酵工艺是唯一用于工业生产的生产方法,重点介绍了发酵法生产维生素C在发酵条件优化和一步发酵工程菌株的构建等方面的研究进展,并给出了生物技术法将来可能的发展方向。 | 张静 刘立明 刘杰 秦苏东 堵国成 陈坚 | 2008 | 食品与生物技术学报2008，27，5： | 18 |
| 4 | 维生素C发酵中伴生菌对氧化葡糖杆菌的影响显示文摘通过分析维生素C二步发酵过程中活菌数、产酸量、pH、糖酸转化活力等 ,研究了蜡状芽孢杆菌 (俗称大菌 )对氧化葡糖杆菌 (俗称小菌 )生长和产酸的影响。结果表明 ,在大菌存在情况下 ,小菌的活菌数约为单菌培养条件下的 5倍 ,产酸量为单菌培养条件下的 2~ 3倍 ,糖酸转化活力为单菌培养条件下的 2~ 3倍 ,提示在混合菌发酵条件下大菌仅仅是通过刺激小菌的生长而促进小菌产酸。用小菌休止细胞进行的糖酸转化实验结果也表明 ,无论大菌的发酵上清液还是破碎的菌体 ,都未发现对小菌产酸产生直接影响。 | 焦迎晖 张惟材 谢莉 袁红杰 陈梦霞 | 2002 | 微生物学通报2002，29，5： | 16 |
| 5 | L─山梨酮脱氢酶基因在大肠杆菌中的克隆和表达显示文摘参照已知的L-山梨酮脱氢酶基因序列,合成了两个引物序列,以AcetobacterliqueficiensIF012258的染色体DNA为模板进行PCR反应,克隆得到了L-山梨酮脱氢酶基因,经酶切验证与预期结果相同,序列测定结果也与已知序列一致。采用PCR方法在此基因的两端加上了E.coRI和HindⅢ两个酶切位点,经E.coRI和HindⅢ酶切后去掉了两端的多余序列后,将此片段连接到pKKH上,经诱导无蛋白表达,采用RcaI酶切启动子端,对载体pKKH则采用Mcol酶切,使表达载体的SD序列与起始密码子ATG之间的距离减少了一个碱基,终止子端仍采用HindⅢ酶切,连接后进行转化,得到的阳性克隆经诱导后有明显的蛋白表达条带,酶活力也比对照明显增高。此工作为构建可直接利用L-山梨糖发酵产生维生素C前体2-酮基-L-古龙酸的基因工程菌打下了基础。 | 郭新友 尹光琳 | 1998 | 微生物学通报1998，25，3： | 15 |
| 6 | 维生素C混合发酵中产酸菌基因文库的构建显示文摘在对氧化葡萄糖酸杆菌SCB329的纯培养方法进行了探索并获得了一定量的纯培养的SCB329菌体的前提下,用常规方法抽提得到Gluconobacter oxydans SCB329染色体DNA。选用质粒pKS作为载体,该载体具有氨苄抗性以及lacZ基因.用限制酶对染色体进行部分消化,将一定范围内的消化片段回收后与载体连接,连接产物转化E.coliDH5a感受态细胞,利用蓝白斑特性选出重组子构建SCB329基因组文库。用低熔点琼脂糖将SCB329菌体包埋起来,对包埋在凝胶块中的细菌菌体进行细胞裂解、去蛋白等操作,防止染色体因机械剪切作用而断裂,以测出SCB329染色体的完整长度。本工作为进行菌株改造以及构建以L-山梨糖为底物发酵产生维生素C前体2-酮基-L-古龙酸的基因工程菌株打下基础。 | 刘娟 尹光琳 | 1999 | 微生物学通报1999，26，5： | 9 |
| 7 | 微生物混合培养从D山梨醇产生维生素C前体——2-酮基-L-古龙酸显示文摘氧化葡萄糖酸杆菌 (Gluconobacteroxydans)SCB3 2 9以D 山梨醇为底物培养时可产生微量 2 酮基 L 古龙酸 ;而葡萄糖酸杆菌 (Gluconobactersp .)SCB1 1 0能将D 山梨醇以较高效率转化为L 山梨糖 ,但不产 2 酮基 L 古龙酸。将两种微生物在以山梨醇为底物的培养基中混合培养 ,其代谢产物经分离提纯后进行熔点测定、元素分析、红外吸收光谱测定等 ,确定其主要的代谢产物是 2 酮基 L 古龙酸。 | 尹光琳 林文楚 乔春红 叶晴 | 2001 | 微生物学报2001，41，6： | 9 |
| 8 | 用真空冷冻干燥法保存微生物菌株显示文摘本文主要介绍用Flexi Dry冷冻干燥仪保存微生物菌株的应用。研究了微生物菌株在真空冷冻干燥保藏中 ,不同浓度的保护剂和不同冻干温度对存活性的影响。 | 叶晴 尹光琳 | 2000 | 现代科学仪器2000，17，4： | 9 |
| 9 | 新组合菌系SCB329-SCB933利用L-山梨糖发酵生产维生素C前体——2-酮基-L-古龙酸的研究 Ⅱ.利用L-山梨糖批加技术实现高糖发酵显示文摘新组合菌系氧化葡萄糖酸杆菌SCB329-苏芸金芽孢杆菌SCB933能在较长时间内保持高的转化活力且具有极强的抗杂菌污染的特性。在一次投糖分批发酵的基础上,探索在控制溶氧、pH、温度等条件下,分批加入L-山梨糖发酵生产2-酮基-L-古龙酸新工艺。采用新工艺,既充分利用了菌系的优良特性,又避免了高糖浓度可能对菌系造成的不良影响。L-山梨糖最终浓度达到14%(w/v),产酸120—135g/l,转化率90%左右,发酵周期40—65h。 | 任双喜 何建明 宋祺 叶晴 郭新友 陈策实 尹光琳 | 1997 | 工业微生物1997，27，2： | 7 |
| 10 | 2-酮基-L-古龙酸的高效液相色谱分析显示文摘建立了测定微生物混合菌株发酵液中 2 酮基 L 古龙酸 (2 KLG)浓度的高效液相色谱法。采用AminexA 2 7柱 4 6× 2 50mm ;流动相为 0 1mol/L甲酸铵 (PH3 40 ) ,流速 1 0mL/min ,柱温 45℃ ;用示差折光检测器检测。此方法回收率为 93 61 % ,RSD为 4 7%。同时还研究了pH、流速等因素对检测的影响。 | 乔春红 尹光琳 | 2000 | 现代科学仪器2000，17，4： | 7 |
| 11 | 维生素C二步发酵中优良菌株201A的研究显示文摘在对维生素C生产菌选育过程中,发现一株葡萄糖酸杆菌正向突变株,分离纯化后,获得优良菌株201A,经摇瓶培养,做生长曲线测定,发现前期生长及产酸明显高于生产菌株201C,经流加发酵工艺培养,可缩短发酵周期8h,山梨糖生成2—酮基—L—古龙酸的摩尔转化率达80%。 | 刘祯 田丽晶 赵学莉 王露 | 2003 | 河北工业科技2003，20，2： | 7 |
| 12 | 维生素C二步发酵的新组合菌系显示文摘以掷孢酵母作为伴生菌与氧化葡萄糖酸杆菌组成新混菌体系 ,对其产酸性能和特点进行了研究。实验室摇瓶结果显示 :新菌系混菌状态不同 ,产酸不同 ,以KGA含量为 4 8,小菌 /掷孢酵母为 31∶1种液接种时 ,最有利于产酸 ,增加接种生物量可提高产酸速度 ,缩短发酵周期 ,但不影响最终产酸量。相同条件下 ,新菌系产酸能力高于现有菌系 ,酸量增加 5mg/ml~ 7mg/ml,发酵周期缩短 6h~ 8h ,酸转化率提高 3%~ 4 % ,最高产酸点pH值下降约 0 5。 | 仲崇斌 于海 吕主奎 冯树 张忠泽 | 2001 | 生物技术2001，11，2： | 5 |
| 13 | 以掷孢酵母作为伴生菌产生VC前体KGA的研究显示文摘以掷孢酵母作为伴生菌与氧化葡萄糖酸杆菌组成新混菌体系 ,通过测定生长代谢曲线 ,对其产酸性能和特点进行了研究。结果显示 :相同条件下 ,新菌系产酸能力高于现有菌系 ,酸量增加 5 - 7mg/ml,发酵周期缩短 6 - 8h,酸转化率提高 3- 4 % ,最高产酸点pH值下降约 0 5个单位 ,表现出较大的产酸潜力和可修饰性。 | 仲崇斌 张忠泽 张文革 李春红 | 2004 | 生物技术2004，14，1： | 5 |
| 14 | VC二步发酵伴生菌苏云金芽孢杆菌的选育显示文摘苏云金芽孢杆菌经紫外线(UV)、亚硝基胍(NTG)及两者的复合诱变,获得1株高效伴生菌株UN-366.在pH6.5~6.8的发酵培养基中与氧化葡萄糖酸杆菌混合发酵,UN-366的平均糖酸转化率提高了6.32%,古龙酸的质量浓度达到了83.7g/L,经连续5代转接发酵实验,性状稳定. | 郭礼强 郭立格 卢育新 张利平 | 2006 | 河北大学学报(自然科学版)2006，26，1： | 5 |
| 15 | 维生素C二步发酵菌种自然选育的研究显示文摘采用自然选育菌种的方法 ,从维生素 C二步发酵的生产过程中选取了一些具有某些特性的样品 ,后又从中选得 5 6个菌系 ,最终筛得一混合菌系 2 0 1 -F,此菌系同正在使用的 1 5 2菌系相比较 ,摇瓶条件实验较之 72 h提早至 48h到达终点 (产酸速度快 ) ,且转化率提高 5 %左右。培养条件同 1 5 2菌系也有些差异 ,并且此菌种进行了 5代传代后 ,平板培养、种液培养、摇瓶发酵所表现的特性均可稳定遗传。 | 王敬敏 李娜 谢广健 | 2000 | 河北工业科技2000，17，5： | 4 |
| 16 | Vc二步发酵新组合菌系B_(15-14)的筛选及其条件优化显示文摘筛选出了一组Vc二步发酵的新组合菌系(命名为B15-14),研究了环境因子对新菌系产酸的影响。结果显示:新组合菌系的最适底糖浓度为7%;温度为29~33℃,31℃为最适;适当增加通气量(20-30mL装液量,250mL三角瓶)有利于产酸;起始pH值范围为6.0—7.5;以Bt菌做伴生菌时,发酵40h就已达到终点。明显缩短了发酵时间。 | 康艳红 赵军 杨伟超 张海宏 徐慧 孙彩霞 | 2008 | 微生物学杂志2008，28，4： | 3 |
| 17 | VC二步发酵新组合菌系的研究显示文摘选用苏云金芽孢杆菌与氧化葡萄糖酸杆菌组成一新组合菌系 ,其摇瓶发酵转化率较原菌系提高 4 .83% ,且具有耐受高浓度 (10 % )山梨糖的特性。在 4m3 发酵罐中 ,连续 4批发酵平均转化率较对照菌系提高 8.16 % ,周期缩短 2 3.7%。新菌组合系的发酵转化率与玉米浆浓度成正相关性 ,尿素浓度x2 =1.4 5 % (g/ 10 0mL)时 ,转化率达最大。 | 李义 周彬 刘耀平 冯树 陈宏权 陈瑛 耿莉 | 2002 | 微生物学杂志2002，22，2： | 3 |
| 18 | 金属离子促进Gluconobacter oxydans高效合成2-酮基-L-古龙酸显示文摘根据Gluconobacter oxydans合成2-酮基-L-古龙酸(2-KLG)代谢途径采用单因素实验研究了6种金属离子对细胞生长和2-KLG的影响,在此基础上,对促进细胞生长或产酸的Mg2+、Mn2+、Fe3+建立多元二次方程模型,得到上述3种金属元素的最佳浓度为Fe3+0.21 mmol/L,Mn2+9.98 mmol/L和Mg2+4.23 mmol/L。在这一最优组合下,2-KLG产量达到65.1 g/L,与优化前比较,提高了144.4%。 | 纪凯 刘杰 秦苏东 刘立明 陈坚 | 2010 | 食品与生物技术学报2010，29，1： | 3 |
| 19 | 维生素C发酵中L-山梨糖脱氢酶的研究显示文摘从氧化葡糖杆菌 SCB32 9菌体中分离纯化得到 L-山梨糖脱氢酶后 ,用 Western印迹法验证了 L-山梨糖脱氢酶只存在于产酸“小菌”。SDS- PAGE电泳测得分子量约为 6 0 0 0 0。动力学性质研究表明它为一个典型的 Michaelis-Menten氏酶 ,对 L -山梨糖作用的 Km 值为 5 2 .7× 10 - 3m ol/ L ,最适作用 p H和温度分别为 7.0和 42°C。Mg2 + 、Ca2 +是酶的激活剂 ,EDTA、Cu2 + 是酶的抑制剂 ,氨基酸组成分析表明酸性氨基酸占 2 4.3% ,碱性氨基酸仅占 7.6 %。 | 薛震役 林文楚 尹光琳 | 2001 | 中国医药工业杂志2001，32，3： | 3 |
| 20 | 一种Vc二步发酵伴生菌的初筛方法显示文摘目的:建立一种Vc二步发酵高效伴生菌的快速初筛方法。方法:通过测定OD650,以伴生菌进入对数期的早晚和对数期持续长短为判断菌株伴生潜力的依据。结果:10h前进入对数期,对数期持续时间约12h的菌株具有高效的促进小菌生长和发酵产古龙酸的潜力。概率为71%。结论:以伴生菌进入对数期的早晚和对数期持续长短为判断依据的新的菌株快速初筛方法,简便、高效,利于大规模初筛应用。 | 杨伟超 汲涌 荆士华 张朝印 姜铭妍 谌明 徐慧 | 2009 | 生物技术2009，19，6： | 2 |
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