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| 1 | 石榴WRKY基因家族全基因组鉴定与表达分析显示文摘WRKY蛋白是一类在植物生长发育过程及生物与非生物胁迫过程中起重要调控作用的转录因子。该研究利用石榴全基因组数据,采用生物信息学的方法,对石榴WRKY转录因子家族成员蛋白理化性质、系统进化、基因结构、保守基序、顺式作用元件、蛋白互作及基因共表达和转录组表达模式进行系统分析。结果共鉴定出69个PgWRKY基因;分组鉴定和进化分析显示WRKY蛋白可分为Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ共三大类型。顺式作用元件分析表明,PgWRKY基因广泛参与到非生物胁迫中;蛋白互作网络与共表达分析暗示PgWRKY基因在同一胁迫应答中可能作用一致并同时诱导表达;RNA-Seq数据分析表明,PgWRKY基因有一定的组织表达特异性,广泛参与植物营养、生殖生长以及根部逆境胁迫应答过程。 | 任媛 赵玉洁 张心慧 招雪晴 苑兆和 | 2020 | 西北植物学报2020，40，2： | 13 |
| 2 | The WRKY transcription factor HpWRKY44 regulates CytP450-like1 expression in red pitaya fruit(Hylocereus polyrhizus)显示文摘Red pitaya(Hylocereus polyrhizus)fruit is a high-value,functional food,containing a high level of betalains.Several genes potentially related to betalain biosynthesis,such as cytochrome P450-like(CytP450-like),have been identified in pitaya fruit,while their transcriptional regulation remains unclear.In this work,the potential involvement of a WRKY transcription factor,HpWRKY44,in regulating CytP450-like1 expression in pitaya fruit was examined.HpWRKY44,a member of the Group 1 WRKY family,contains two conserved WRKY motifs and is localized in the nucleus.HpWRKY44 also exhibits trans-activation ability.Gene expression analysis showed that the expression of HpCytP450-like1 and HpWRKY44 increased steadily during pitaya fruit coloration,which corresponded with the production of elevated betalain levels in the fruit.HpWRKY44 was also demonstrated to directly bind to and activate the HpCytP450-like1 promoter via the recognition of the W-box element present in the promoter.Collectively,our findings indicate that HpWRKY44 transcriptionally activates HpCytP450-like1,which perhaps,at least in part,contributes to betalain biosynthesis in pitaya fruit.The information provided in the current study provides novel insights into the regulatory network associated with betalain biosynthesis during pitaya fruit coloration. | Mei-nv Cheng Zi-juan Huang Qing-zhu Hua Wei Shan Jian-fei Kuang Wang-jin Lu Yong-hua Qin Jian-ye Chen | 2017 | Horticulture Research2017，4，1： | 13 |
| 3 | 植物WRKY转录因子家族研究进展显示文摘WRKY转录因子是植物中最大的转录调控因子家族之一,是调控植物许多生物过程信号网络的组成部分。WKRY转录因子具有多种生物学功能,在植物的生长发育和衰老、非生物和生物胁迫等过程中发挥着重要的作用。在DNA水平上,WRKY转录因子可与靶基因启动子中的W-box TTGAC(C/T)结合,通过自调节或交叉调节激活或抑制下游基因的表达调控其反应。在蛋白水平上,WRKY转录因子可以与多种蛋白相互作用,包括MAP激酶、组蛋白去乙酰化酶、抗性R蛋白、多种转录因子等,调节植物的生长发育或各种应激反应。对WRKY转录因子的结构特征、生物学功能、调控机制和网络等方面进行了综述,有助于更加全面了解其在植物中的作用。 | 黄幸 丁峰 彭宏祥 潘介春 何新华 徐炯志 李琳 | 2019 | 生物技术通报2019，35，12： | 13 |
| 4 | 大豆转录因子GmWRKY58亚细胞定位及在非生物胁迫下的表达分析显示文摘WRKY转录因子在植物响应非生物胁迫,调控抗逆基因的表达方面具有重要作用。为了解析大豆转录因子GmWRKY58基因在非生物胁迫中的功能,从大豆中克隆了GmWRKY58 c DNA全长,推导其编码的氨基酸序列、生理生化特征与进化关系,并研究了其亚细胞定位和在不同组织及非生物胁迫下基因的表达变化。结果表明,GmWRKY58基因c DNA ORF全长为954 bp,编码317个氨基酸。亚细胞定位结果显示,GmWRKY58蛋白质定位于细胞核中。实时荧光定量PCR基因表达分析表明,GmWRKY58在大豆根、茎、叶、花和荚等组织均有表达,根、茎、叶中的表达量明显高于花和荚。在大豆根中,GmWRKY58基因受高盐、干旱、低N和缺Fe等非生物胁迫因子强烈诱导,在高盐胁迫下,基因表达量增加187.4倍;GmWRKY58基因受水杨酸(SA)、低温及低P和低K等诱导轻微,差异表达不显著。由此推测,GmWRKY58转录因子在大豆抗盐、抗旱、低N和缺Fe等非生物胁迫过程中起到重要的调控作用。 | 张红梅 刘晓庆 陈华涛 袁星星 崔晓艳 张智民 黄中文 陈新 | 2018 | 华北农学报2018，33，2： | 13 |
| 5 | 甘蔗ScWRKY4基因的克隆与表达特性分析显示文摘WRKY是植物中特有的转录因子家族之一,在植物对生物和非生物逆境胁迫的应答反应中起重要调控作用。本研究基于课题组前期构建的甘蔗(Saccharum spp.)转录组数据库,从新台糖22(ROC22)中成功克隆到1个WRKY基因,命名为Sc WRKY4(Gen Bank登录号为MG852087)。序列分析发现,Sc WRKY4基因c DNA全长1265 bp,包含1个741 bp的完整开放读码框,编码246个氨基酸,该蛋白具有1个WRKYGQK保守结构域和C2H2锌指结构域,属于IIc类WRKY转录因子。生物信息学预测分析发现,Sc WRKY4蛋白为碱性的不稳定亲水性蛋白,不存在信号肽和跨膜结构域,蛋白二级结构元件缺少β螺旋。在本氏烟(Nicotiana benthamiana)叶片瞬时表达中,Sc WRKY4蛋白定位于细胞核。酵母杂交实验结果显示,Sc WRKY4不具有转录激活活性。实时荧光定量PCR分析表明,Sc WRKY4基因在甘蔗的根、叶、芽和皮中的表达量无明显差异,在蔗肉中的表达量最高,为对照蔗根的18.38倍;黑穗病菌侵染0~72 h,Sc WRKY4在抗病品种崖城05-179中下调表达,在感病品种ROC22中表达较稳定;受到外源激素脱落酸、水杨酸和茉莉酸甲酯以及非生物胁迫因子氯化钠和聚乙二醇胁迫后,Sc WRKY4基因均被诱导上调表达。上述研究结果表明,Sc WRKY4基因可能不参与甘蔗对黑穗病的抗性反应或在该防御方面起负调控作用,但积极响应甘蔗对盐和干旱胁迫的应答。 | 王玲 刘峰 戴明剑 孙婷婷 苏炜华 王春风 张旭 毛花英 苏亚春 阙友雄 | 2018 | 作物学报2018，44，9： | 12 |
| 6 | 植物WRKY转录因子:结构、分类、进化和功能显示文摘WRKY因其特殊的七肽保守序列WRKYGOK而得名,是植物中最大的转录因子(transcription factors, TFs)家族之一,广泛参与植物对生物、非生物和激素胁迫的响应。WRKY TFs主要通过特异性结合靶基因启动子的顺式作用元件(T)TGAC(C/T)(W-box)来调控靶基因的表达和参与到植物响应不同生物、非生物和激素的信号通路中以及与多种蛋白发生相互作用来实现其在不同信号转导途径中的功能。本文针对WRKY TFs的结构、分类、起源与进化及其在响应生物、非生物胁迫和激素信号中的功能和调控机制进行了阐述,目的是系统总结植物WRKY TFs的研究进展,为相关研究者深入了解WRKY TFs及其介导植物抗逆性提高的分子机制,为作物遗传改良,提供有益参考。 | 任永娟 王东姣 苏亚春 王玲 张旭 苏炜华 阙友雄 | 2021 | 农业生物技术学报2021，29，1： | 12 |
| 7 | 植物盐胁迫应答转录因子的研究进展显示文摘盐胁迫会导致植物受到初级的渗透胁迫和离子毒害以及次级的氧化胁迫和营养胁迫,严重制约了农业生产。植物盐胁迫应答转录因子能够通过调节下游靶基因的表达减轻盐胁迫对植物造成的伤害。文中基于土壤盐渍化及其对植物的危害、转录因子在植物盐胁迫信号转导网络中的中枢调节作用,综述了盐胁迫应答转录因子参与的盐胁迫信号转导途径、通过形成同源或异源二聚体及与调控蛋白形成复合物等方式调控下游基因形成的复杂下游基因网络,以及盐胁迫应答转录因子在提高植物耐盐性中的应用,为解析盐胁迫应答转录因子在盐胁迫应答调控网络中的作用提供理论依据,为植物抗逆分子育种提供参考信息。 | 潘凌云 马家冀 李建民 尹兵兵 付畅 | 2022 | 生物工程学报2022，38，1： | 12 |
| 8 | 一个甘蔗Ⅱd类WRKY转录因子基因的克隆和表达分析显示文摘【目的】WRKY是植物特有的一类转录因子,在生理调控和逆境响应过程中有着重要作用。通过分析WRKY转录因子基因在甘蔗生长发育及抗逆境过程中的作用,为甘蔗抗逆分子育种提供优良的基因资源。【方法】从甘蔗转录组数据库中挖掘到一条WRKY基因Unigene序列,并通过RT-PCR扩增得到cDNA全长序列,利用ORF finder、Smart、ExPaSy、Prabi、NetPhos、Cell-PLOC 2.0和DNAMAN6.0软件对该基因序列及其编码蛋白序列进行生物信息学分析,并使用MEGA6.0软件构建系统进化树;构建pCAMBIA1300-WRKY-GFP融合表达载体,通过农杆菌转化本氏烟(Nicotiana benthamiana),确定WRKY蛋白在烟草叶片中的亚细胞定位;利用酵母杂交试验验证WRKY是否具有转录自激活活性;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法分析WRKY在甘蔗品种ROC22中的组织特异性(根、蔗芽、叶、蔗髓和皮)及其在MeJA(100μmol·L-1)、SA(5 mmol·L-1)、PEG(25%)、NaCl(250 mmol·L-1)、CuCl2(500 mmol·L-1)和CdCl2(500 mmol·L-1)胁迫条件下表达量的变化。【结果】从甘蔗品种ROC22中克隆获得一个WRKY转录因子基因,命名为ScWRKY6(GenBank登录号为MH393927)。该基因序列全长1 289 bp,包含1个1 059bp的ORF,编码352个氨基酸,并具有45个磷酸化位点;理论等电点为9.73,不稳定指数为50.23,亲水性为-0.579,推测其为碱性不稳定亲水性蛋白。ScWRKY6蛋白具有1个WRKY结构域和1个锌指结构域(CX5CX23HXH),该蛋白氨基酸序列与高粱(Sorghum bicolor)WRKY(XP_002464211.1)的同源性最高,根据系统进化树分析可以推测其属于WRKY家族Ⅱd亚类。亚细胞定位结果显示,ScWRKY6::GFP融合蛋白定位在细胞核上。酵母转录激活验证试验显示,ScWRKY6蛋白不具有转录自激活活性。qRT-PCR分析表明,ScWRKY6在甘蔗中为组成型表达,其表达量由大到小依次为蔗芽、叶、根、皮和蔗髓,其中蔗芽、叶和根的表达量分别为蔗髓的2.05、1.55和1.37倍。ScWRKY6在NaCl、PEG、MeJA、重金属Cu2+和Cd2+胁迫诱导下表达量均上调,其在NaCl处理12 h时表达量最高,为对照的4.18倍;在PEG处理3 h时表达量最高,为对照组的6.88倍;在CuCl2和CdCl2诱导24 h时表达量最高,分别为对照组的3.63倍和4.86倍。【结论】ScWRKY6蛋白定位在细胞核上,不具有转录自激活活性;该基因在甘蔗不同组织部位中均有表达,且受NaCl、PEG、CuCl2和CdCl2等胁迫的诱导,推测ScWRKY6可能在甘蔗干旱应答、耐盐及金属离子胁迫响应中发挥作用。 | 张旭 凌辉 刘峰 黄宁 王玲 毛花英 李聪娜 汤翰臣 苏炜华 苏亚春 阙友雄 | 2018 | 中国农业科学2018，51，23： | 12 |
| 9 | PEG模拟干旱胁迫下野生大豆转录组分析显示文摘为研究耐旱型野生大豆在干旱胁迫下基因表达谱的变化,从备选野生大豆材料中筛选抗旱性强的野生大豆品种,同时探讨最适PEG胁迫浓度,而后以野生大豆永46为试验材料,利用RNA-seq技术对20%PEG6000处理不同时间的叶片进行基因表达谱差异分析。结果显示:获得39 183个序列信息,其中各时期共有序列27 875个。随干旱胁迫时间延长,差异表达基因数量发生变化,胁迫12 h达到最多。根据GO功能分析可将序列大致分为分子功能、细胞成分和生物学过程三大类,其差异表达基因广泛涉及糖、脂类、蛋白质和核酸等生物大分子代谢、能量代谢以及次生代谢过程。在KEGG数据库中,依据代谢途径可将其定位在127个分支,包括植物-病原体互作、植物激素信号转导、RNA降解、ABC转运蛋白等,其中植物激素信号转导途径在不同时间处理下的变化都显著。转录因子分析发现在干旱胁迫下变化明显的转录因子家族包括MYB、bHLH、AP2\EREBP、WRKY和NAC等。对4个不同功能基因干旱胁迫后不同时间的表达量进行荧光定量分析,其变化趋势与转录组数据相同。 | 张小芳 王冰冰 徐燕 张炜坤 赵恢 张锴 乔亚科 李桂兰 | 2018 | 大豆科学2018，37，5： | 12 |
| 10 | 小麦TaWRKY71a基因克隆、生物信息学及表达分析显示文摘WRKY蛋白是主要存在于植物体内一类转录因子家族,在植物的生长发育和逆境应答中发挥重要作用。为了揭示小麦WRKY基因功能,从普通小麦中克隆出Ta WRKY71a基因后进行氨基酸序列分析,并对Ta WRKY71a基因在不同组织及不同胁迫条件下的表达模式进行分析。结果表明,Ta WRKY71a基因编码一个含有355个氨基酸的蛋白质。氨基酸序列分析显示,Ta WRKY71a蛋白含有1个WRKY结构域及1个C2H2锌指结构。预测分析表明,Ta WRKY71a蛋白定位在细胞核;其二级结构包含28.17%的α-螺旋、16.34%的延伸链、4.79%的β-转角和50.70%的无规则卷曲。不同物种间WRKY蛋白的同源性分析比较表明,Ta WRKY71a与粗山羊草WRKY71、水稻WRKY71、高粱WRKY71和拟南芥WRKY40的氨基酸序列之间具有高度的保守性。q RT-PCR分析表明,Ta WRKY71a在叶、根、茎、花和种子中均有不同程度表达,并受ABA、Na Cl和PEG诱导表达,推测该基因可能参与小麦逆境胁迫应答。研究结果为进一步研究Ta WRKY71a的生物学功能奠定了基础。 | 王俊斌 杨文丽 丁博 吴天文 王海凤 谢晓东 | 2018 | 华北农学报2018，33，3： | 8 |
| 11 | 植物WRKY转录因子及其生物学功能显示文摘WRKY转录因子家族是近年来研究比较广泛的转录因子家族之一。在植物的进化历程中,WRKY转录因子因其结构域N-末端具有高度保守的WRKYGQK氨基酸序列而得名,且能与目标基因启动子中的W-box发生特异性结合并调控目的基因的表达,进而参与到植物的生命活动进程中。它们不仅参与调控植物对胁迫的应激反应,还参与了激素途径和整个发育过程。本综述回顾了有关植物WRKY转录因子在生物和非生物胁迫、形态建成、生长发育和次生代谢等方面的生物学功能,并对该领域在未来的研究做出了展望。 | 赵楠楠 刘立峰 | 2019 | 分子植物育种2019，17，21： | 8 |
| 12 | 橄榄WRKY转录因子的克隆及其在低温胁迫下的表达分析显示文摘【目的】探讨橄榄WRKY转录因子的序列特征及其在生长发育与低温胁迫过程中的调控作用。【方法】以'福榄1号'橄榄为材料,采用RT-PCR技术克隆了4个WRKY转录因子家族成员(分别命名为CaWRKY21、CaWRKY33、CaWRKY50和CaWRKY55),并对其进行生物信息学和qRT-PCR表达模式分析,同时研究橄榄低温胁迫过程中总抗氧化能力的变化。【结果】CaWRKY21、33、50、55开放阅读框分别为561、1 644、357和1 044 bp,预测可分别编码186、547、118和347个氨基酸,GenBank登录号为MG356652、MG356653、MG356654和MG356655。生物信息学分析表明,CaWRKY21、33、50、55的密码子偏好性普遍较弱,均编码不稳定疏水性蛋白质,其中CaWRKY21和CaWRKY55属于第Ⅱ类植物WRKY转录因子,定位于细胞核内,CaWRKY33和CaWRKY50分别属于第Ⅰ类和第Ⅲ类WRKY转录因子,可能分别定位在内质网膜和细胞质中;聚类分析发现,橄榄与番木瓜、甜橙、桉树WRKY的亲缘关系较近。低温胁迫过程中,随着温度下降,橄榄总抗氧化能力和CaWRKY21、33、50、55表达水平均明显上升,在-3℃处理组中达到最高点;此外,它们均呈现器官特异性表达。【结论】WRKY转录因子可能参与橄榄器官形态建成,并且受低温胁迫显著诱导。 | 赖瑞联 冯新 程春振 陈瑾 陈义挺 吴如健 | 2018 | 果树学报2018，35，12： | 6 |
| 13 | 谷子GATA基因家族的鉴定及表达分析显示文摘本研究从谷子基因组水平鉴定出33个SiGATA成员,命名为SiGATA1~SiGATA33。利用生物信息学方法对谷子SiGATA家族的系统发育、基因结构、染色体分布、保守基序、蛋白三级结构和顺式调控元件进行预测和分析。结果表明,33个SiGATA转录因子被划分为3组,不均匀的分布在8条染色体上,多数含有CX2CX18CX2C保守结构域;谷子GATA蛋白与单子叶植物水稻的同源性大于其他两种单子叶植物;蛋白三级结构分析表明,整体结构相似度存在差异,同组进化序列基因的结构相似度较高;顺式作用元件分析表明,SiGATAs启动子序列中存在调控生长发育、激素信号传导和逆境胁迫响应元件,其中SiGATA15、SiGATA22、SiGATA31在干旱、厌氧诱导及脱落酸响应等元件中表达量较高,其在谷子生长发育及逆境响应过程中可能发挥了重要生物学功能。这些逆境响应及生长发育相关转录因子的挖掘,将为作物育种提供一定理论参考。 | 卢成达 李阳 孙迪 牛学谦 昌秦湘 | 2021 | 西北农业学报2021，30，5： | 5 |
| 14 | Reprogramming of a defense signaling pathway in rough lemon and sweet orange is a critical element of the early response to‘Candidatus Liberibacter asiaticus’显示文摘Huanglongbing(HLB)in citrus infected by Candidatus Liberibacter asiaticus(CLas)has caused tremendous losses to the citrus industry.No resistant genotypes have been identified in citrus species or close relatives.Among citrus varieties,rough lemon(Citrus jambhiri)has been considered tolerant due to its ability to produce a healthy flush of new growth after infection.The difference between tolerance and susceptibility is often defined by the speed and intensity of a plant’s response to a pathogen,especially early defense responses.RNA-seq data were collected from three biological replicates of CLas-and mock-inoculated rough lemon and sweet orange at week 0 and 7 following infection.Functional analysis of the differentially expressed genes(DEGs)indicated that genes involved in the mitogen activated protein kinase(MAPK)signaling pathway were highly upregulated in rough lemon.MAPK induces the transcription of WRKY and other transcription factors which potentially turn on multiple defense-related genes.A Subnetwork Enrichment Analysis further revealed different patterns of regulation of several functional categories,suggesting DEGs with different functions were subjected to reprogramming.In general,the amplitude of the expression of defense-related genes is much greater in rough lemon than in sweet orange.A quantitative disease resistance response may contribute to the durable tolerance level to HLB observed in rough lemon. | Qibin Yu Chunxian Chen Dongliang Du Ming Huang Jiqiang Yao Fahong Yu Ronald H Brlansky Frederick G.Gmitter Jr | 2017 | Horticulture Research2017，4，1： | 5 |
| 15 | 苦荞抗旱相关转录因子基因FtWRKY10的克隆及功能鉴定显示文摘WRKY转录因子是植物特有的一类锌指型蛋白。本研究基于苦荞(Fagopyrum tataricum)转录组数据,由苦荞中克隆1条WRKY转录因子基因FtWRKY10 (GenBank No. MK910373)。序列分析表明,FtWRKY10定位于苦荞基因组第5号染色体,DNA全长4 303 bp,含6个外显子和5个内含子,ORF为1647 bp可编码548个氨基酸残基的蛋白;推导的FtWRKY10蛋白为Ⅰ类WRKY转录因子,与拟南芥(Arabidopsis thaliana) AtWRKY20具有最近的系统发育关系,qRT-PCR显示其在苦荞中的表达受到干旱胁迫的诱导。分子鉴定结果表明,FtWRKY10在酵母(Saccharomyces cerevisiae)菌株AH109中显示出转录激活活性,在转基因拟南芥中定位于细胞核;该转录因子可分别在酵母和植物细胞中特异结合其靶DNA位点W-box并启动报告基因的表达。转基因拟南芥中,FtWRKY10的超表达可增强拟南芥萌发过程中对干旱和脱落酸(abscisic acid, ABA)处理的耐受;提高拟南芥植株在干旱胁迫下叶绿素(chlorophyll)和脯氨酸(proline, Pro)的含量,增加超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、过氧化物酶(peroxidase, POD)和过氧化氢酶(catalase, CAT)的活性,上调拟南芥抗逆相关基因脱水应答蛋白(responsive to dehydration protein, RD)基因RD29A、RD29B和RD22,ABA应答蛋白(responsive to ABA protein, RAB)基因RAB18及丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶基因(serine/threonine protein kinase) KIN1的表达。本研究为苦荞优良生产性状的利用提供了了基础资料和思路,为进一步丰富WRKY转录因子家族的功能提供了基础素材。 | 王官凤 吕兵兵 王安虎 赵海霞 王晓丽 吴琦 陈惠 李成磊 | 2020 | 农业生物技术学报2020，28，4： | 5 |
| 16 | 紫花苜蓿MsWRKY42的分离、鉴定及其对非生物胁迫的响应显示文摘【目的】WRKY是转录因子大家族,在植物生长发育及逆境胁迫应答中发挥着核心调控作用。通过分析转录因子MsWRKY42在紫花苜蓿抗逆境过程中的作用,为进一步研究WRKY转录因子在紫花苜蓿抗逆分子调控中的作用奠定基础。【方法】通过同源比对方法从紫花苜蓿转录组基础数据库中获得MsWRKY42序列。使用MEGA-X对MsWRKY42蛋白序列及拟南芥序列进行多序列比对,构建系统发育树。通过PlantCARE预测分析MsWRKY42启动子的顺式作用元件。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法分析MsWRKY42在紫花苜蓿不同组织中的表达量及其在NaCl(0.3 mol·L^-1)、PEG(15%)、4℃、40℃、低磷以及ABA(0.1×10^-3 mol·L^-1)处理后的表达量变化。构建pCAMBIA1300-WRKY-GFP融合表达载体,通过农杆菌转化本氏烟草(Nicotiana benthamiana),确定MsWRKY42蛋白的亚细胞定位。利用酵母单杂交系统检测MsWRKY42和启动子区域顺式作用元件W-box的体外结合活性。【结果】该基因包含1个1692 bp的开放阅读框,编码563个氨基酸。多序列比对及系统进化树分析表明,该蛋白属于Ⅱb类WRKY家族成员,含有1个WRKY保守结构域和1个C2H2锌指基序,与拟南芥WRKY家族中的AtWRKY42相似度最高,故将其命名为MsWRKY42。在紫花苜蓿MsWRKY42启动子区域鉴定到多个顺式作用元件,主要包括胁迫响应、激素响应、生长发育等不同生命活动相关的调控作用元件。实时荧光定量PCR结果表明,MsWRKY42在紫花苜蓿各组织中均有不同程度的表达,其中根、叶中的表达量最高,茎、花、荚果中次之,芽中最低。经NaCl、PEG、低温、高温、低磷和ABA处理后的MsWRKY42表达量均有不同程度的上调。亚细胞定位结果显示,MsWRKY42蛋白定位在细胞核上。酵母单杂交系统检测结果显示,MsWRKY42能够与W-box顺式作用元件特异性结合。【结论】MsWRKY42为典型的WRKY转录因子,蛋白质定位在细胞核,能够与W-box顺式作用元件特异性结合;该基因在紫花苜蓿不同组织部位中均有表达,在根和叶中的表达量最高,且表达受NaCl、PEG、低温、高温胁迫和ABA激素的正向诱导。在紫花苜蓿中,该基因可能参与多种非生物胁迫反应。 | 刘佼佼 王学敏 马琳 崔苗苗 曹晓宇 赵威 | 2020 | 中国农业科学2020，53，17： | 5 |
| 17 | 过表达玉米转录因子ZmWRKY101基因提高拟南芥植株的耐盐力显示文摘WRKY是植物细胞中特有的一类转录因子,在逆境胁迫应答中具有重要的调控作用。本研究基于非生物胁迫诱导的玉米转录组数据库,鉴定了1个WRKY基因,该基因含有855 bp的完整开放读码框,编码285个氨基酸,在C端含有1个保守的WRKYGQK结构域和锌指结构,属于第II组WRKY转录因子,命名为ZmWRKY101。烟草叶表皮细胞亚细胞定位显示,ZmWRKY101蛋白定位在细胞核中。定量表达分析表明,ZmWRKY101在玉米的根、叶和雄穗中具有较高的表达水平,而在花丝和胚中表达水平最低。PEG、NaCl和ABA处理能够显著诱导ZmWRKY101的表达水平,其中NaCl诱导上调了17.6倍;而低温处理抑制了该基因的表达。在拟南芥中过表达ZmWRKY101通过提高抗氧化酶活性及抗胁迫相关基因的表达水平,继而改进植株的耐盐性。上述结果表明,ZmWRKY101基因通过改进抗氧化系统参与对盐胁迫的信号转导。 | 郭玉敏 张云华 井涛 臧小平 | 2020 | 植物生理学报2020，56，9： | 4 |
| 18 | 向日葵WRKY转录因子家族鉴定与生物信息学分析显示文摘WRKY转录因子家族参与了多种激素调节信号通路,在帮助植物响应外界不良环境中起着重要作用。本研究基于向日葵(Helianthus annuus)基因组数据库对向日葵进行了WRKY基因家族成员鉴定、进化关系分析、基因定位、基因结构和保守Motif分析、功能启动子元件和基因共线性分析。结果表明:向日葵中包含117个WRKY家族基因,分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类,其中Ⅱ类包含Ⅱa、Ⅱb、Ⅱc、Ⅱd和Ⅱe五个亚家族。染色体定位显示HaWRKY基因在向日葵所有染色体上均有分布,第10号染色体上分布最多含有18个HaWRKY基因,2号和13号染色体分布最少仅有3个HaWRKY基因。向日葵WRKY转录因子蛋白在59~940个氨基酸之间,平均氨基酸个数为345个,等电点为5.01~10.19不等。基因结构分析表明除Ha WRKY52、HaWRKY82不含内含子,其他成员都含有1~9个不等的内含子。保守域分析表明有12个HaWRKY家族基因WRKYGQK发生了变异,占向日葵WRKY家族的10%。此外,启动子分析表明HaWRKY家族基因启动子区含有大量响应生物胁迫和非生物胁迫元件,共线性分析得到11对加倍复制基因。本研究结果有助于了解向日葵WRKY基因家族成员的情况,为向日葵WRKY基因家族成员进一步的功能分析提供基础。 | 项玉婷 王景 曾俊岚 杨春贤 | 2020 | 分子植物育种2020，18，14： | 4 |
| 19 | 甘蓝型油菜转录因子WRKY72的基因克隆、表达分析及互作蛋白鉴定显示文摘WRKY转录因子作为植物特有的一类转录因子,参与调控生长发育、次级代谢、衰老以及对生物和非生物胁迫的响应等过程。本研究首先利用反转录PCR (reverse transcription PCR, RT-PCR)方法从甘蓝型油菜(Brassica napus)中克隆了WRKY72的cDNA序列(GenBank No. KC246585),其编码蛋白含有1个保守的WRKY结构域和1个C2H2型锌指结构。利用绿色荧光蛋白进行亚细胞定位观察,结果显示BnaWRKY72定位于细胞核。双荧光素酶报告系统检测发现,BnaWRKY72对W-box元件驱动的萤火虫荧光素酶报告基因具有转录激活活性。通过多种激素、生物和非生物逆境处理,利用qRT-PCR检测BnaWRKY72表达量变化,发现该基因能够响应冷害胁迫以及核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)侵染。利用酵母双杂交和双分子荧光互补技术,筛选并验证了BnaWRKY72的多个互作蛋白,包括同亚组的BnaWRKY31、BnaWRKY42及其自身;同时,BnaWRKY72与小分子类泛素修饰蛋白(small ubiquitin-like modifier, SUMO) 3发生互作,提示SUMO化修饰可能参与其活性调节。本研究首次探讨了BnaWRKY72分子特性,为深入研究其抗逆功能及相关分子机制提供了参考依据。 | 李琪 李翠 王琛 孙云 江元清 杨博 | 2019 | 农业生物技术学报2019，27，5： | 4 |
| 20 | 枇杷EjWRKY15基因克隆与蛋白特性分析显示文摘【目的】克隆枇杷EjWRKY15基因并对其组织表达模式及蛋白特性进行分析。【方法】从枇杷转录组数据库中获得EjWRKY15基因ORF序列,克隆该基因,对获得的基因序列进行遗传进化分析,并通过qRT-PCR探究其在不同组织中的表达模式。同时对EjWRKY15蛋白分子的理化特性、磷酸化位点、跨膜区、信号肽、亲疏水性、二级结构、三级结构和亚细胞定位等蛋白特性进行预测分析。【结果】枇杷EjWRKY15基因含有开放阅读框951 bp,共编码316个氨基酸,具有WRKY家族典型结构特征。系统进化结果表明,EjWRKY15序列与苹果WRKY61序列同源度高达95%,说明从进化角度来看,EjWRKY15与苹果WRKY61的亲缘关系最为密切。实时荧光定量PCR分析结果显示,该基因具有组织表达特异性,在根中相对表达量较高,果实次之;对EjWRKY15蛋白进行理化性质测定,其分子质量为35.79 kDa,等电点为5.09,脂溶指数为56.45,不稳定性指数为69.72,平均亲水性为-0.598,为亲水性蛋白。该蛋白含有33个磷酸化位点,包含丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)和酪氨酸(Try),数量分别为25、6、2个。蛋白质二级结构预测结果表明,EjWRKY15蛋白以α螺旋和无规卷曲为主,分别占30.70%和56.65%,其次是延伸链8.27%和β角4.43%。同时,三级结构分析表明,该蛋白的结构域主要由4个β-折叠组成,β-折叠1为WRKYGQK,β-折叠2为RSYYKC,β-折叠3为GVRKHVER,β-折叠4为AVVTTY。另外,预测结果证实了EjWRKY15蛋白不含信号肽,也不是同时含有跨膜区的分泌蛋白。亚细胞定位预测和验证结果都显示EjWRKY15基因定位于细胞核中。【结论】本研究结果为深入探究EjWRKY15基因在枇杷不同生长发育时期的分子生物学功能及其响应逆境调控机制的研究奠定了良好的基础。 | 李晓颖 徐红霞 陈俊伟 | 2020 | 果树学报2020，37，12： | 4 |
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