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| 1 | 利用CRISPR/Cas9技术构建敲除MEIS2基因的HEK293T人胚肾细胞系显示文摘CRISPR/Cas9系统作为一种新型的基因组编辑技术,利用人工设计的向导RNA(singleguide RNA,sg RNA)介导外源表达的Cas9蛋白与基因组靶点特异性结合以实现对基因组DNA的特异性切割,切割后的基因组DNA通过非同源末端连接或同源重组的方式进行修复,从而实现基因的敲除、敲入等。MEIS2属于一类高度保守的同源盒转录因子MEIS家族,研究发现,MEIS2广泛参与胚胎的早期发育及肿瘤的发生发展,但其发挥作用的机制目前还不是很清楚。该研究针对MEIS2基因作用的功能域,设计两个靶向MEIS2基因Exon3和Exon8的sg RNA,通过SURVEYOR分析及Western blot检测,确认了所设计sg RNA的有效性。进一步通过细胞分选及Western blot检测筛选出稳定敲除MEIS2基因的HEK293T细胞株。最后,通过序列测定确认MEIS2发生了移码突变。综上所述,该研究利用CRISPR/Cas9技术成功建立了完全敲除MEIS2的HEK293T细胞株,为研究MEIS2的功能和作用机制提供了有效工具。 | 卢利莎 白杨 刘鑫 王洪涛 高洁 杨亦青 苏培 刘翠翠 王钰 张磊升 熊涛 周家喜 | 2015 | 中国细胞生物学学报2015，37，4： | 11 |
| 2 | Expression of lens-related microRNAs in transparent infant lenses and congenital cataract显示文摘AIM:To identify the expression of lens-related micro RNAs(miRNAs)in the central epithelium of transparent infant lenses and congenital cataract. METHODS:Lens-related mi RNAs were retrieved from Pub Med database. The expression levels of these mi RNAs in transparent infant lenses and congenital cataract were determined by stem-loop reverse transcription-polymerase chain reaction(RT-PCR). mi Randa algorithm was used to predict the target genes of these differentially expressed mi RNAs. The target m RNA was validated.RESULTS:Six lens-related mi RNAs were retrieved from screening Pub Med database. The most abundant mi RNA in transparent infant lenses according to stem-loop RT-PCR was mi R-184. miR-182 was up-regulated in congenital cataract. Contrarily,miR-204 and miR-124 was down-regulated.mi R-204 exhibited a more significant decrease in expression than mi R-124. In addition,Meis2 was predicted to be the target of mi R-204 using mi Randa algorithm. mi R-204mimic/antagomir transfection experiments suggested the negative correlation between the expression of mi R-204 and Meis2.CONCLUSION:The expression levels of miR-182,miR-204 and mi R-124 differ between the central epithelium of transparent infant lens and congenital cataract,suggesting their involvement in the pathogenesis of congenital cataract. miR-204 may act via silencing Meis2 to regulate lens development and congenital cataract formation. | Chang-Rui Wu Min Ye Li Qin Yue Yin Cheng Pei | 2017 | International Journal of Ophthalmology(English edition)2017，10，3： | 11 |
| 3 | miR-125a-5p靶向MEIS2基因对垂体瘤AtT20细胞增殖、凋亡的影响显示文摘目的探讨微小RNA-125a-5p(miR-125a-5p)是否可靶向调控MEIS2基因表达并分析其对垂体瘤AtT20细胞增殖及凋亡的影响。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测AtT20细胞及小鼠正常垂体细胞(NPC)中miR-125a-5p及MEIS2 mRNA表达量。采用瞬时转染技术分别将miR-125a-5p mimic质粒、anti-miR-125a-5p抑制剂及si-MEIS2质粒转染至AtT20细胞。双荧光素酶报告基因检测miR-125a-5p与MEIS2的靶基因关系,同时共转染miR-125a-5p mimic与pcDNA-MEIS2验证miR-125a-5p是否通过靶向MEIS2表达发挥作用。MTT法检测各组细胞增殖能力;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;蛋白免疫印迹(Western blotting)检测各组细胞MEIS2蛋白表达。结果qRT-PCR检测结果显示,与NPC比较,miR-125a-5p在AtT20细胞中表达水平显著降低,MEIS2 mRNA表达水平显著升高;与miR-NC组比较,miR-125a-5p组miR-125a-5p表达水平显著升高。Western blotting检测结果显示,与NPC比较,AtT20细胞中MEIS2蛋白表达水平显著升高;与si-NC组比较,si-MEIS2组MEIS2蛋白表达水平显著降低;与miR-125a-5p+pcDNA组比较,miR-125a-5p+pcDNA-MEIS2组MEIS2蛋白表达水平显著升高。双荧光素酶报告基因验证结果显示miR-125a-5p可直接调控MEIS2基因表达。MTT检测结果显示,与miR-NC组比较,miR-125a-5p组细胞增殖能力显著降低,抑制MEIS2表达细胞增殖能力显著降低;与miR-125a-5p+pcDNA组相比,miR-125a-5p+pcDNA-MEIS2组细胞增殖能力显著升高。流式细胞术检测结果均与MTT检测结果呈反向关系。结论miR-125a-5p通过负向调控MEIS2进而抑制垂体瘤AtT20细胞增殖能力并促进细胞凋亡。 | 陈亮 秦军 魏德胜 雷军荣 王璐 | 2022 | 临床神经外科杂志2022，19，1： | 1 |
| 4 | MEIS2基因沉默致A549细胞凋亡、细胞周期阻滞及调控机制研究显示文摘目的观察MEIS2基因沉默后,肺腺癌A549细胞凋亡及细胞周期变化。通过基因芯片分析技术,探讨MEIS2在非小细胞肺癌(NSCLC)细胞中的调控机制。方法将构建成功的4组pLKO1-MEIS2-shRNA慢病毒载体重组质粒瞬时转染人胚肾细胞239FT,收集病毒液感染A549细胞,显微镜下观察细胞形态,运用反转录-聚合酶链反应、免疫蛋白印迹检测MEIS2基因mRNA及蛋白的表达,流式细胞仪检测A549细胞凋亡及细胞周期变化,基因芯片检测基因表达变化。结果有2组pLKO1-MEIS2-shRNA重组质粒能有效沉默MEIS2的表达,MEIS2mRNA、MEIS2蛋白表达降低,光镜下A549细胞皱缩、凋亡增加;流式细胞术提示细胞凋亡,细胞周期G2/M比例增高,基因芯片检测分析发现人乳腺癌易感基因1(BRCA1)表达下调明显。结论shRNA干扰技术介导A549细胞的MEIS2沉默,出现细胞凋亡,G2/M比例增高,BRCA1相关分子通路可能是MEIS2的重要下游靶通路,提示MEIS2可能通过BRCA1调控NSCLC细胞生长及细胞周期阻滞。 | 黄长江 赵天明 张家祺 聂婷婷 王迎难 倪吉祥 | 2018 | 国际呼吸杂志2018，38，12： | 1 |
| 5 | HOXB13 mutations and binding partners in prostate development and cancer:Function,clinical significance, and future directions显示文摘The recent and exciting discovery of germline HOXB13 mutations in familial prostate cancer has brought HOX signaling to the forefront of prostate cancer research.An enhanced understanding of HOX signaling,and the co-factors regulating HOX protein specificity and transcriptional regulation,has the high potential to elucidate novel approaches to prevent,diagnose,stage,and treat prostate cancer.Toward our understanding of HOX biology in prostate development and prostate cancer,basic research in developmental model systems as well as other tumor sites provides a mechanistic framework to inform future studies in prostate biology.Here we describe our current understanding of HOX signaling in genitourinary development and cancer,current clinical data of HOXB13 mutations in multiple cancers including prostate cancer,and the role of HOX protein co-factors in development and cancer.These data highlight numerous gaps in our understanding of HOX function in the prostate,and present numerous potentially impactful mechanistic and clinical opportunities for future investigation. | Hannah Brechka Raj R.Bhanvadia Calvin VanOpstall Donald J.Vander Griend | 2017 | Genes & Diseases2017，4，2： | 1 |
| 6 | MEIS2、BRCA1表达的相关性及与术后非小细胞肺癌化疗预后的关系显示文摘目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)中MEIS2、BRCA1基因表达的相关性及与术后NSCLC化疗预后的关系。方法收集宜昌市第一人民医院2012年2月至2016年1月住院手术切除并经病理确诊NSCLC的石蜡包埋组织标本61例,收集整理标本对应患者的临床资料,随访患者生存情况。应用免疫组化检测组织中MEIS2及BRCA1基因的表达,分析两者表达的相关性,并将MEIS2、BRCA1表达纳入生存分析,研究两者与NSCLC术后辅助化疗疗效之间的相关性。结果61例NSCLC患者中,MEIS2和BRCA1的高表达率分别为57.38%(35/61)和65.57%(40/61),两者表达呈正相关(r=0.59,P=0.003)。NSCLC患者接受基于铂类药物化疗4~6周期化疗后,20例CR+PR(32.8%),41例SD+PD(67.2%),MEIS2低表达患者有效率为21.3%(13/61),而MEIS2高表达有效率为11.5%(7/61),有极显著性差异(P<0.01);BRCA1低表达患者有效率为23.0%(14/61),而BRCA1高表达有效率为9.8%(6/61),有极显著性差异(P<0.01)。结论免疫组化显示MEIS2和BRCA1两者的表达存在显著正相关,MEIS2和BRCA1的表达与NSCLC术后接受铂类药物化疗的预后相关,MEIS2和BRCA1表达越低,化疗疗效越好。 | 黄长江 聂婷婷 王迎难 倪吉祥 | 2019 | 中华肺部疾病杂志(电子版)2019，12，4： | 0 |
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