| 5 | 定量检测绿色荧光蛋白-轻链蛋白3转基因小鼠角质形成细胞自噬水平显示文摘目的 探索一种高通量定量检测细胞自噬小体数量的方法。方法 将绿色荧光蛋白?轻链蛋白3(GFP?LC3)转基因小鼠的角质形成细胞分为对照组(不接受照射或饥饿处理)、饥饿组(给予饥饿处理)、20 J/cm^2长波紫外线(UVA)照射组和40 J/cm^2 UVA照射组。处理后6 h,将细胞固定后在共聚焦显微镜下采集图片。用ImageJ软件编辑宏指令对细胞内GFP?LC3绿色荧光点及细胞进行自动计数,并比较不同组间自噬水平。结果 利用ImageJ软件编辑的宏指令可以成功识别并计数荧光图片中的自噬小体。在测试计算机上分析一张420万像素的图片仅需不到0.6 s。饥饿组、20 J/cm^2 UVA照射组和40 J/cm^2 UVA照射组平均自噬小体数量高于对照组,未加胃抑素A时各组间比较,F = 5.01,P 〈 0.05;加入胃抑素A时各组间比较,F = 20.05,P 〈 0.05。该方法可以成功区分饥饿组、UVA照射组和对照组的自噬水平差异。结论 成功为自噬研究提供了一种新的高通量定量检测方法,该方法能够快速准确地检测细胞自噬荧光点。 | 金婷婷 Heidemarie Rossiter Michael Mildner Florian Gruber Leopold Eckhart Erwin Tschachler 赵邑 | 2018 | 中华皮肤科杂志2018，51，3： | 1 |
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